安全输血(2)

红细胞血型免疫分子生物学研究和临床应用：安全输血•红细胞血型ISBT规范分类、命名及表述•组织血型和器官血型•红细胞ABO血型、基因、表型亚型•RH血型：基因结构、表型•输血前血型检测输血前血型血清学检测程序《《人类红细胞血型学实用理论与实验技术》(P125-163)血型检测:ABO血型RH血型不规则抗体检测和鉴定:交叉配血:常规检测正反定型不符及原因ABO血型亚型获得性B、T多凝集检测原则及结果处理常规方法试剂常规检测抗体鉴定常规要求基本试验技术一般程序及简单鉴定复杂抗体鉴定盐水交叉配血试验不完全抗体配血试验抗体筛检和交叉配血试验结果分析血型检定《《人类红细胞血型学实用理论与实验技术》(P126表15-1)正反定型不符及原因实验者操作错误红细胞标本问题血清标本血型检定《《人类红细胞血型学实用理论与实验技术》(P126表15-1)实验者操作错误假阳性：离心速度时间过↑试剂或细胞标本盐水污染不干净试管......假阳性：未加入抗体↑不认识溶血-为阳性反应试剂失效或不合格试剂抗体与细胞比例少......血型检定《《人类红细胞血型学实用理论与实验技术》(P126表15-1)红细胞标本问题相容但不同型输血或骨髓移殖后，弱抗原性:亚型、恶性肿瘤、老年人获得性和遗传性多收集T/Tn，血清标本ABOAg↑-中和抗体试剂，自身凝集素包被自身红细胞......血型检定《《人类红细胞血型学实用理论与实验技术》(P126表15-1)纤维蛋白凝块不规则抗体↑规则抗体↓:免疫抑制病、免疫抑制6月婴儿、老年人骨髓移植，大量输血浆......血清标本治疗病人、老人ABO血型血型血清学亚型及抗原变化分类主要根据血清学特征：表15.2、P131新的ABO亚型或变异型B（A）多凝集红细胞：表14-1、P119获得性B红细胞ABO血型血型血清学亚型及抗原变化分类主要根据:1.抗原性弱2.正反定型-血清抗体反应强度3.红细胞H抗原性强度4.唾液中ABH血型抗原量和中和能力5.凝集状况：混和凝集或弱凝集6.红细胞吸收放散抗A、抗B能力临床有意义抗体和无意义抗体完全抗体和不完全抗体血型检测不完全抗体的检测交叉配血输血前血型血清学检测要点1.检测程序：2.抗体性质：3.检测技术和方法：对完全抗体的检测对不完全抗体的检测（或应用完全抗体的检测、应用不完全抗体的检测）1、ABO血型由Ag-Ab两者决定-不能只检“一半血型”2、病理和生理情况-ABO血型正反检测结果不一致3、单抗试剂质量要求和安全输血关系：多凝集-获得性B4、血型定型只是输血前血型血清学检测程序一部分血型血清学检测和安全输血要点1、D弱型-产生抗D2、D抗原阳性-献血员和病人为D阳性或阴性？3、抗D试剂要求：效价？识别表位？4、血型血清学结果和分子生物学结果与安全输血关系？血型血清学检测和安全输血要点血型血清学检测和安全输血要点结论1、规范化、标准化检测程序重要性！！2、目前临床问题：忽视对不完全抗体的检测3、血型基础研究成果、新技术促进安全输血1、研究和认识RhD抗原的结构2、高特异性的血型试剂3、用于细胞流式仪检测胎母出血（FMH）4、用于ELISA对预防性抗D定量检测5、用于新生儿溶血病的抗D预防性制剂BRAD-3（IgG3),BRAD-5(IgG1)6、engineered-“null”“antibody”－“block”－functionalactivematernalantibodies.基因工程制备的“无效”抗体一对“功能”活性的母体抗体的阻断(aMcAb-Anti-DengineeredbyalteringintheFcregiontorenderitincapableofreactingwitheffectcells.sucha“null”antibodymoleculecouldprotectagainstRhHDNbybindingtofetalredcellsandblockingthebindingoffunctionallyactivematernalantibodies.)应用抗D单克隆抗体的意义RHD基因RCR定型方法和靶DNAmethodandTargetDNA说明Description第一代检测：FirstgenerationRHDgenotypingSingle-regionRCRTestExon10,intro4.exon7假阳性和假阴性反应理论根据：所有的D阴性表型人都是缺失完整的D基因（对高加索人的实验结果）第二代检测：SecondGenerationTestmultipleSSPs(i.e.sepatatetubePCRs)选择与RhcE基因不同的至少两个RHD的外显子exons.mulliplexPCR选择所有的RHD-特异性外显子exons假阳性和假阴性反应多试管中反应（每一引物,一试管）假阳性反应（在非州人和日本人中高频率）,固D－人可能有无功能RHD单一试管中反应（多引物,一试管中）第三代检测ThirdgenerationTestmultiplexPCR同时检测RHD阴性的RHD缺失和假RHD（RHDψ4）（RHD.RHC/cgenotypingassay）RHDexons4and7RHCEintro2orexon2TheprevalenceofsilentRHDallelesinotherpopulationgroupsisonlyportiallyresolred.(Del-Japanese)Exon4PCRproductRHD:498bpRHDψ:535bpRHC:320bpintron2RHc:177bpexton2VoxSang2000;78(suppl2):083-089SiteDirectedMutagenesisoftheHumanRhDAntigen:MolecularBasisofDEpitopes.NeilD.Avent.WendyLiu...DouglasVoak.D-negativephenotypes_twomajormecharisms_atthegenomiclevel.RHDgenedeletionRHDψ(psendogene):37bpinsertionandnonsensemutationinRHDgene.AllweakDphenotypes-:causedbycodingregionregionsintheRHDgene.alleredDantigenexpression(lacksomeDepitopes)(previousdogmathatweakDphenotypeindividualshavemerelyquartitativebutnotqualitativedifferercesinRhDantigonisincorrect.)PartialDphenotypes-1.majorityofpartialDphenotypesare“Knockonts”wherelossofepitopes.2.fewpartialDphenotypesinvolvejustoneaminoacidchange.3.RoHarphenotype-smallnumberofDepitopes.RHCEgeneexon5isreplacedwithanRHDequivalent.RecentworkhasconcludedthatthetermsweakandpmtialDphenotypesshouldbereplocedbytheterm”ABERRANT-D”,asallweakDphenotypesinvestigatedillustrateauniqueDphenotype.WagnerBlood200095:2699-2708.VoxSang2000;78(suppl):079-082MonoclonalAntobodiestoRhD-Developmentandused.MarionLScott.DonglasVoak.Thelastwork-shopclusteredthe103anti-Dmonoclonalantibodiesstudiedinto24specificity(epitope)gwaps.Nooneanti-DmonoclonalantibodyhasbeenfoundthatiscapableofreactingwithallpartialDtype.INDLAGNOSTICSForDORNORtyping:1.TypeallpresentationsofRhDthatcouldcauseimmunizationinaDnegativeindividualasDpositive.2.Useafasinglemonoclonalauti-Disthereforenotacceptable.3.Themostcommonstuategyistouse①onehighavidityIgMmonoclonalanto-DthatgivesstrongreactivitywithnormalDphenotype,DⅣandDⅤbutdoesnotreactwithDⅥ②alongsideapolyclonalorothermonoclonalreagentthathasbeenspecificallyselectedfordetectionofDⅥandveryweakD.ForPATIENTtyping:1.WeakDandpartialDindividualaretypingasDnegative,astheywillthensafelybegivenDnegativeblood.2.DetectionofweakDbyantigloblmtestswithanIgGanti-D.(polyormonocloual)isnotrecommenedforpatienttesting.becauseoftheriskoffalsepositives.3.ReagentsusedforroutinepatienttypingshouldnotdetedtDⅥ_forthereasonthatDⅥindividualslackmuchofthenormalDantigen,andthereforereadilymakepotentanti-DwhentransfusedwithDpositiveblood.ForREFERENCElaboratorips:panelofmonoclonalanti-Dwithdifferentepitopetspecificitiesareinvaluable-sampleswithaberrantDtypingresutlsorindividualwhotypeasRhDpositivebuthaveanti-Dintheirseaum.VoxSang2000;78(suppl):079-082McAb-anti-DindiagnosticlabstomeasureFMHbyflowcytometry-moreaccuratethantheRleihauerTest-assay.ELLSA-biotinylatedmonoclonalIgGanti-DinacompetitiveA-Europeanpharmacopoeiastudy-comparingthiswithtraditionalauto-analyzermethodforanti-Dquantitation.Useofmonoclonalanti-Dforprophylaxis.1.dependsnotonlyonthespecificityandavidityofthemonoclonalantibody-viaitsFvregions.2.butalsoitsfunctionalactivityininteratingwitheffectorcell