5植物组织培养及工艺品

国家级精品课程生命科学导论植物细胞组织培养（植物克隆技术）及工艺品制作国家级精品课程生命科学导论一、实验目的1、能够进行常规的无菌植物组织培养操作；2、能够得到快繁植物和愈伤组织；3、学会超净台、光照培养箱、离心机的使用；4、可以设计和制作简单的组培工艺品。国家级精品课程生命科学导论二、实验材料烟草（Nicotiana）属茄科植物；三叶草等植物种子；无菌烟草苗各种种子国家级精品课程生命科学导论三、原理---植物细胞的全能性：植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力，称为全能性。植物组织培养就是利用植物的全能性进行离体无菌植物培养的一门技术。国家级精品课程生命科学导论MS培养基MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。国家级精品课程生命科学导论•在作物育种上的应用（单倍体植株、种间杂交、细胞融合、细胞突变、种质保存和基因工程）•在快速繁殖和作物脱毒上的应用•在遗传、生理生化和病理研究上的应用2、植物组织培养的应用国家级精品课程生命科学导论利用植物细胞组织培养技术进行种间的杂交育种国家级精品课程生命科学导论长春花的胚性细胞培养国家级精品课程生命科学导论石斛植物的芽培养国家级精品课程生命科学导论黄芪的发状根培养国家级精品课程生命科学导论黄芪发状根的液体培养新鲜培养基含有有用物质的培养基植物生物工程反应器国家级精品课程生命科学导论通过植物组织培养技术对胡萝卜的快速繁殖国家级精品课程生命科学导论快速繁殖得到的个体均匀一致国家级精品课程生命科学导论马铃薯与草莓都是营养繁殖国家级精品课程生命科学导论马铃薯脱毒技术染毒薯无毒薯脱毒组培无毒培养国家级精品课程生命科学导论草莓脱毒技术草莓感染病毒会严重影响品质与产量国家级精品课程生命科学导论石竹的植株培养国家级精品课程生命科学导论荷兰的花卉与园艺工业国家级精品课程生命科学导论国家级精品课程生命科学导论荷兰的花卉拍卖市场国家级精品课程生命科学导论ShanghaiJiaoTongUniversity•愈伤组织：原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。•外植体：植物组织培养中用来进行无菌培养的离体材料，可以是器官、组织、细胞和原生质体等；3、植物组织培养中的重要概念国家级精品课程生命科学导论4、无菌概念超净工作台火焰灭菌酒精消毒湿热和干热灭菌国家级精品课程生命科学导论互动1、以下是不能保证灭菌的是？1、培养液高压蒸汽灭菌；2、水蒸馏灭菌；3、剪刀高温干热灭菌；4、土壤高温干热灭菌；国家级精品课程生命科学导论四．实验内容１、烟草苗的快速切繁（每人繁殖1瓶）2、烟草叶片的愈伤组织培养（每人2皿）3、植物种子除菌（每人2皿）4、组培工艺品制作（每人10瓶）国家级精品课程生命科学导论无菌操作注意事项每次操作前，将双手用酒精棉球擦拭消毒；解剖针、剪刀等金属工具用火焰烧过灭菌，在酒精中冷却，再将酒精烧去方可使用；尽量减少无菌三角瓶和培养皿在空气中的暴所露时间；无菌操作尽量在酒精灯附近完成。国家级精品课程生命科学导论1、烟草无菌苗的快速切繁⑴实验开始前，打开紫外灯灭菌30min，关闭紫外灯，打开风机，用酒精棉球擦拭工作台，双手擦拭消毒，点着酒精灯，金属工具灭菌。国家级精品课程生命科学导论外焰国家级精品课程生命科学导论1、烟草无菌苗的快速切繁⑵打开长有无菌烟草苗的三角瓶，三角瓶瓶口使用前后需在酒精灯外焰上烧过灭菌。⑶用灭菌的镊子捏出幼苗，放在无菌的培养皿中，用灭菌的剪刀将主茎剪成若干小段（0.5-1cm的），要求每段至少包含一个生长点。国家级精品课程生命科学导论国家级精品课程生命科学导论国家级精品课程生命科学导论叶腋夏天秋天春天国家级精品课程生命科学导论国家级精品课程生命科学导论1、烟草无菌苗的快速切繁⑷接入盛有MS培养基的三角瓶中，每一个切段必须直接接触培养基，三角瓶口重新烧过灭菌，并重新封好。国家级精品课程生命科学导论国家级精品课程生命科学导论写好姓名，放在25℃光照培养箱培养2周，观察结果。国家级精品课程生命科学导论2、烟草叶片的愈伤组织培养无菌的烟草叶片，用剪刀剪成四边有伤口的方块（1cm2），用镊子将叶片放入含激素的Ms培养皿中，封口，放在25℃光照培养箱培养2-3周。每人两皿国家级精品课程生命科学导论培养皿封口国家级精品课程生命科学导论植物种子10-20粒放在1.5ml灭菌EP管中；加入500ul70%乙醇晃动2min，5000rpm离心30s，吸去液体；加入500ul8%次氯酸钠晃动5-8min，离心去液体；加入800ul无菌水洗6-8次；吸取无菌水种子悬液（在无菌滤纸上吸干水分）播种在9cm1/2MS皿中，封口；20℃培养箱，光照16小时，黑暗8小时，培养1-2周；（认真阅读光照培养箱说明书，自行设置，并贴好标签）3、植物种子除菌和工艺品制作国家级精品课程生命科学导论minispin型离心机时间调节速度调节开始/停止打开机盖国家级精品课程生命科学导论该离心机需配合盖子同时使用盖子国家级精品课程生命科学导论Minispin有12个孔，注意离心管必须对称放置，统一尾巴向外。国家级精品课程生命科学导论播种在9cm皿中4周后国家级精品课程生命科学导论种子除菌国家级精品课程生命科学导论配制1/2MS培养基，用移液器(使用时永远朝下)分装，每小瓶800-1000ul培养基，每人10瓶（可调色，每人需要成功上交老师5瓶）；工艺瓶竖立放在培养皿中，加皿盖，塑料袋包扎；工艺瓶塞子放入小皿，塑料袋包扎；灭菌；烘干、收藏；4、无菌工艺瓶的准备国家级精品课程生命科学导论5、后续实验安排----自己安排时间完成无菌种子发芽后；接种一瓶无菌快繁种子苗到小三角瓶；用愈伤组织或无菌种子苗，接种10瓶小工艺瓶；25℃光照培养箱培养2周。国家级精品课程生命科学导论五、成绩评定原则(5分)实验结果成绩（3分)烟草快速繁殖（克隆苗）（0.5分）烟草愈伤培养（0.5分）植物种子无菌发芽(0.5分)种子无菌快繁苗（0.5分）工艺品的制作（1分）每完成一项，请老师记分；实验报告成绩(2分）（实验结束再交报告，注意讲义后面的题目)