硕士论文-三七总皂苷的提取及纯化新工艺研究

广西大学硕士学位论文三七总皂苷的提取及纯化新工艺研究姓名：李春玲申请学位级别：硕士专业：化学工艺指导教师：韦藤幼20080701三七总皂苷的提取及纯化新工艺研究作者：李春玲学位授予单位：广西大学相似文献(5条)1.学位论文黄超滇丹参指纹图谱及其对细胞损伤保护作用和紫丹活血口崩片工艺的研究2007本论文从化学成分和细胞药理学层面比较了滇丹参和丹参的异同，探讨滇丹参作为丹参替代药物的可行性，并对滇丹参的提取、纯化及其成型工艺进行了研究，制备了紫丹活血口崩片。目的：建立滇丹参指纹图谱质量控制方法，鉴定指纹图谱中主要特征成分，并与药典正品丹参进行对比，从化学成分的层面比较其异同；以H,2O,2诱导损伤的内皮细胞为模型，比较滇丹参与丹参及其与三七总皂苷不同配伍比例对细胞损伤的保护效应，从细胞药理学的层面比较其异同；研究滇丹参提取、纯化工艺及筛选新型辅料，针对心血管疾病特点制备紫丹活血口崩片，为中风后昏迷、吞咽障碍等特殊病人提供一种新型速效制剂。方法：收集不同产地的滇丹参药材，对影响指纹图谱的主要因素如流动相、色谱柱、提取方法等因素进行了考察，建立滇丹参指纹图谱，并采用LC-MS法对滇丹参指纹图谱中的主要特征色谱峰进行鉴别；同时与相同条件下建立的丹参指纹图谱进行对比。以H,2O,2诱导损伤人脐静脉内皮细胞为模型，以MTT法检测细胞存活率，以流式细胞检测仪分析其对细胞分裂周期的影响，对比滇丹参总酚酸、丹参总酚酸及其与三七总皂苷配伍对H,2O,2诱导损伤内皮细胞保护效应。对滇丹参提取、纯化工艺进行研究，得到适宜的原料，同时经过辅料筛选，压制成能在口腔内快速崩解的片剂。结果：分别建立了滇丹参水溶性成分的指纹图谱和脂溶性成分的指纹图谱，该方法具有较高的重现性、专属性和可行性。滇丹参水溶性成分指纹图谱与丹参相比，在色谱峰的数与量方面都存在着较大的差异，滇丹参指纹图谱中特征色谱峰相对较多，峰面积相差相对较小，而丹参指纹图谱为丹酚酸B“一峰独大”，其它特征色谱峰数与量均较少。滇丹参脂溶性成分指纹图谱与丹参相比，色谱峰在数的方面基本相仿，即基本成分相似；但在色谱峰在“量”的方面即色谱峰面积相差较大。滇丹参总酚酸对H,2O,2损伤细胞保护效应的活性要强于丹参总酚酸。滇丹参、丹参的总酚酸和三七总皂苷各配伍组中，活性最强的丹参总酚酸：三七总皂苷配比值为2：1，其次为丹参总酚酸：三七总皂苷配比值为1：1、滇丹参总酚酸：三七总皂苷配比值为1：2和1：1。总体来说，丹参总酚酸与三七总苷配伍组活性要强于滇丹参总酚酸与三七总苷配伍组。滇丹参总酚酸的提取纯化过程中工艺的温度是影响丹酚酸B转移率关键因素，通过调节滇丹参提取液的PH值工艺可有效减少干膏率，经过本工艺制得滇丹参总酚酸符合口崩片对原料的要求。当微晶纤维素(MCC)：交联聚维酮(PVPP)：低取代羟丙基纤维素(L-HPC)为26：5.3：2.7，且在处方中的比例为74％时，经压片成型后的成品符合口崩片质量要求。结论：建立的滇丹参指纹图谱具有较高的重现性、专属性和可行性，为滇丹参质量控制提供了新的手段。滇丹参水溶性成分种类多，与丹参相差较大，为合理解释滇丹参药理作用强于或相当丹参提供了物质基础。本文发现滇丹参总酚酸对H,2O,2损伤细胞保护效应的活性要强于丹参总酚酸，再次证实了这一观点。本文发现当丹参总酚酸：三七总皂苷配比值为2：1和1：1时，对H,2O,2损伤细胞保护效应的活性较强，而且强于滇丹参总酚酸与三七总苷配伍组。这说明丹参总酚酸通过配伍显著地改善了其成分单一的弱势而增强了短期的作用，该比例和配伍为临床应用提供了依据。本文发现，滇丹参总酚酸与三七总皂苷配伍后活性强弱顺序为配比值1：21：1、2：1，这一发现对滇丹参资源的充分利用和保护是有重要意义的，因为滇丹参来自野生植物，其资源远较丹参和三七紧缺，这一发现为少量滇丹参经配伍后发挥较大作用奠定了基础。滇丹参经提取纯化后作为原料而制得的口崩片，能60s内在口腔中迅速溶散崩解，以期为特殊病人提供一种新型速效制剂，为市场提供一种新的药物选择。本论文有关滇丹参的研究均为首次研究。2.学位论文王俊永脑得生丸的药效物质基础研究2008本文分析了近年来中药复方药效物质基础的研究现状和研究方法，探讨了中药复方的药效物质基础研究对中药创新发展的意义，归纳了研究对象脑得生丸中主要化学成分及其药理活性的研究概况。在中医药学理论和实践的指导下，设计研究路线，以追踪中药复方整体药效部位为核心，结合药效学试验筛选出脑得生丸的有效部位，借助大孔吸附树脂纯化技术对脑得生丸进行纯化分离得到脑得生洗脱部位，并采用适宜的分析手段建立药效部位的质量控制方法。研究以总皂苷、总黄酮、葛根素和羟基红花黄色素A（HSYA）等有效成分为评价指标，采用正交设计试验和大孔吸附树脂纯纯化技术优选提取纯化工艺为：将脑得生丸成方分为两部分，以三七、川芎和山楂为第一部分，粗粉混匀，用10倍量80％乙醇的溶剂回流提取2次，每次60min，合并提取液，减压回收溶剂，浸膏减压干燥，得脑得生丸第一部分提取样品Ⅰ；以葛根和红花为第二分，用12倍量40％乙醇的溶剂回流提取2次，每次45min，，合并提取液，减压回收溶剂，浸膏减压干燥，得脑得生丸第二部分提取样品Ⅱ。脑得生的两部分提取物（样品Ⅰ、Ⅱ）均以A型吸附树脂为纯化填料，树脂柱径高比为H1，上样浓度分别为C1和Ca，上样量与树脂体积比均为N，以5B倍树脂体积的水清洗树脂柱后，分别用M％乙醇（样品Ⅰ）和N％乙醇（样品Ⅱ）洗脱树脂，洗脱剂用量分别为5B和6B量树脂体积。收集M％和N％乙醇洗脱液，合并，减压干燥至干，粉碎，混匀，制得脑得生纯化样品。建立大鼠全脑缺血为模型，以神经症状评分，脑组织含水量，脑梗死面积为评价指标初步筛选出脑得生丸的药效部位，并通过药效学试验验证所得纯化样品为脑得生丸的药效部位。利用HPLC法和UV法，建立了脑得生丸药效部位的质量控制方法。药效部位中的总皂苷含量为12.52％～12.71％，总黄酮含量为11.53％～11.75％，阿魏酸含量为0.226％～0.229％，异黄酮的含量总和为35.43％～36.07％，HSYA含量为2.14％～2.21％，脑得生有效部位中可测定的成分总含量大于60％。其中总皂苷、总黄酮、阿魏酸、异黄酮（葛根素、3‘－甲氧基葛根素、芹糖基葛根素和大豆苷之和）和HYSA的转移率分别为89.14％～90.81％，79.33％～81.13％，81.89％～84.25％，84.47％～85.72％，71.21％～73.38％，表明研究所建立的脑得生丸药效部位提取纯化工艺是合理的、可行的，各有效成分的含量和转移率均符合开发新药要求。本研究初步阐释了三七总皂苷、山楂总黄酮、阿魏酸、异黄酮（葛根素、3‘－甲氧基葛根素、芹糖基葛根素和大豆苷等）和HYSA为脑得生丸的药效物质，为脑得生丸现代创新药物的进一步研究开发奠定基础。3.学位论文邱智东康心滴丸的工艺、质量标准研究2007冠心病心绞痛是一种常见病、多发病，其致死率仅次于癌症。据统计我国冠心病平均发病率为6.42％，其死亡率为1.55％，占死亡构成比的25.67％，但目前防冶药物与方法尚无大的突破。为此，研究开发抗冠心病心绞痛有效的现代中药制剂，一直是医学研究者致力攻克的难关。康心滴丸由三七、葛根、麝鼠香三味中药经过提取纯化制成，是一治疗冠心病心绞痛的中药复方制剂。经大量临床实践证明该处方疗效可靠，故拟将其开发为五类新药，为更多的冠心病患者减轻痛苦，给他们带来福音。本课题主要进行了如下研究：1三七总皂苷的提取纯化工艺研究；2葛根总黄酮的提取纯化工艺研究；3康心滴丸成型工艺研究；4康心滴丸质量标准研究。4.期刊论文刘旭.杨雪梅.徐江平.李琳.朱柏华正交试验法优化三七提取纯化工艺-广州医学院学报2003,31(4)目的:优选三七的最佳提取纯化工艺.方法:采用正交设计的方法,以三七总皂苷的含量作为考察指标,对三七的提取纯化工艺进行了优化.结果:选用热浸法对三七进行提取,实验设计四个因素均对提取效率有显著性影响;最佳工艺条件为:溶剂量12倍,乙醇浓度80%,浸出时间160min,温度65℃.结论:试验结果可为三七提取工艺的确定提供实验依据;该优化工艺可为工业生产提供参考.5.学位论文张建军舒胸缓释微丸的研制2007舒胸片用于治疗冠心病心绞痛，已经广泛应用于临床且证明疗效显著，作用稳定，但冠心病需要长期服药，普通中药制剂由于原制各工艺落后，服用次数多，服用剂量大，服用不方便等缺点，其剂型已经不能适应中药制剂现代化的需要，为了适应中药现代化的需要，有必要对该品种进行二次开发。本文以中医药理论为指导，采用现代科学技术方法，重点从提取分离，精制纯化、新辅料应用、制备工艺、质量标准和药代动力学等方面进行研究，研制出符合临床需求的缓释制剂——舒胸缓释微丸。采用UV法建立了三七总皂苷和红花黄色素的含量测定方法，建立了川芎中阿魏酸的HPLC测定方法，分别对制剂中三种不同理化性质的指标性成分人参皂苷Rg,1、羟基红花黄色素A、阿魏酸建立了含量测定方法和释放度测定方法，以及家兔体内血浆中阿魏酸的含量测定方法，以上方法的建立对制备工艺、质量标准、体外释放特性和体内药动学研究奠定了良好的基础。在舒胸缓释微丸的提取纯化工艺研究中，以有效成分(部位)的含量为指标，在单因素考察了溶媒种类、溶剂用量、加热温度、提取时间等对三七、红花、川芎中指标性成分的提取率影响的基础上，通过均匀设计或正交设计筛选出最佳提取工艺：(1)三七有效部位的制备：三七药材粉碎，加入12倍量75％的乙醇，提取2次，0.5h/次，三七总皂苷的平均提取率可达95％；提取液用HPD100型大孔树脂纯化三七皂苷，以70％的乙醇洗脱，制得有效部位三七总皂苷，得率约为8.85％，含量(以人参皂苷Rg。计)约为65％。(2)红花总黄素的制备。取红花药材，加水14倍，75℃温浸2次，1h/次，红花黄色素平均提取率可达87％；提取液用HPD400型大孔树脂吸附红花黄色素，以70％的乙醇洗脱，制得红花总黄素，得率约为8.0％，含量(以羟基红花黄色素A计)约为23％。(3)川芎提取物的制备。川芎药材粉碎，加入10倍量55％的乙醇，提取2次，1.0h/次，阿魏酸的平均提取率可达91％，浸膏得率约为20％。舒胸提取物药效学试验表明，提取物各剂量组对垂体后叶素所至大鼠急性心肌缺血有明显的改善作用，与阳性药物舒胸片相比，提取物低、中剂量与其作用相当(P0.05)，但中剂量有优于舒胸片的趋势，提取物高剂量则有明显优于舒胸片的作用(P0.05或0.01)；在改善血清酶的含量方面，阳性药物组与提取物组均能明显升高急性心肌缺血模型大鼠血清的SOD的含量，降低MDA、CK、LDH的含量(P0.05或0.01)，提取物组与舒胸片组相比，提取物高、中、低组在改善急性心肌缺血大鼠的酶学方面与舒胸片组无差别。上述结果从化学成分和药效学两方面证明本研究的提取精制工艺是合理可行的。在舒胸微丸的成型工艺研究中，用滚动凝聚成圆法制备了舒胸缓释微丸素丸，在单因素考察结果的基础上，选择MCC的用量、黏合剂的浓度、滚转时间和滚转速度作为考察因素，通过4因素3水平正交试验设计，采用“归一化”多指标综合评分，对微丸圆整度、堆密度、脆碎度、收率进行综合评定，筛选出优化处方工艺为：MCC与浸膏比例为1:1，包衣锅转速为40rpm，仰角35°，2％的HPMC的70％乙醇溶液为粘合剂制丸，滚转时间为50分钟。以该优化工艺制备的素丸圆整度好，硬度适宜，收率高，脆碎度小，可满足进一步包衣工艺的要求。薄膜包衣工艺研究中，在单因素考察的EudragitRS100、EudragitRL100的比例，抗粘剂、增塑剂、致孔剂的用量，以及包衣增重，包衣温度等影响因素的基础上，选取RS/RL的比例，致孔剂的用量和包衣增重三个对释放度的影响较大的因素，采用均匀设计法，以指标性成分的体外释放特性为指标，对工艺进一步的优化，优选出的最佳工艺为：EudragitRL/RS比例为1:8，抗