药品生产企业实验室管理培训班--XXXX年10月重庆--谢沐风

谢沐风上海市食品药品检验所[e-mail]请大家将手机调至“振动”档！谢谢您的配合！工作简历★1998年~至今在本所化学室工作。经历了“1998年~2002年的强仿期”和“2003~2006仿制药疯狂期”★2003年8月~2004年2月赴日本国立医药品食品卫生研究所药品部（相当于我国中检所化药室）进修。★发表了多篇方法类、思路类文章，引起业内瞩目与同仁共鸣。(1)如何建立HPLC(TLC)法测定有关物质方法；(2)如何建立HPLC法测定含量方法；★与企业和研发公司交流经历走访/核查过全国100多家制药企业；时常与同仁们相互交流、切磋；深谙目前国内制药企业技术现状与薄弱环节。★2009年伊始、在国内知名药学网站——丁香园“药物分析版”上创立“溶出度研究”子版。我们已经走得太远，以至于忘记了为什么而出发。——黎巴嫩著名诗人纪伯伦（1883～1931）工作感悟本人体会●工作中一定要注重思考，带着问题去学习、有的放矢地去攻读，多观察、多领会，日积月累、潜移默化之中就会水到渠成。●思维要开放、活跃，不要固步自封、按部就班，因循守旧。●一定要不断思考，注意查询文献，收集各方面信息，培养自身的专业素养与专业敏感度，不要怕遇到问题，越是遇到问题、将其解决，就越能不断提高与进步。很荣幸此次来到重庆与各位同仁相互交流、学习！感谢国家药监局培训中心搭建平台！★寄望大家多思考、多提问！★寄望能学以致用，为大家工作献计献策、呈上绵薄之力！　GMP检查时应注意的项目和内部人员管理(1)所有试验与操作均需有管理文件支持。审核人员将十分注重文件是否制订、制订是否合理以及其中人员是否严格按照文件进行操作等情况。(2)内部人员应经培训后才能上岗，并应遵循循序渐进方式：首先阅读相关体系文件，随后由带教老师辅导，再在实践中自我感悟，最后独立试验。实验室管理中的规范要求与操作细节(1)试液与试剂均需有配制记录：时间、人员、操作等信息记录在案，以备查；并应有标签注明何时配制、何人配制等信息。(2)滴定液☆滴定液配制与复标，均应有记录，☆贮藏与领用亦要有记录，☆滴定液的有效期界定（通过复标实现）尤其对于原料药、滴定液校正因子准确与否尤为关键；对于制剂，由于限度一般均较为宽泛，故可酌情看待。(2)滴定液☆氢氧化钠滴定液标化后一定要分成小塑料瓶、密闭包装。使用时，酌情（针对放置时间和样品之类）再标化一份即可。因其极易吸收空气中的二氧化碳，使校正因子降低，消耗过多滴定液，从而使结果偏高，尤其是原料药，有时会出现高于101.0%的情况。☆高氯酸滴定液应临用现标。使用当天标化三份，取均值即可。(2)滴定液☆滴定管要根据滴定液消耗体积针对性选取。单位里一般需配置10ml、26ml和50ml三种规格的滴定管。☆对于消耗量极少的滴定，建议采用电位滴定仪进行，因其基本不受体积影响（但不可少于1ml）。(2)滴定液☆部分指示液配制后，如放置时间过久，其变色会迟钝，导致消耗体积过大，结果偏高；故配制后酌情放入冰箱中。☆对于采用指示剂法测定的操作，只要有空白试验，样品变色后的色泽一定要与空白色泽一致，以消除系统误差。(3)剧毒品领用记录※必须配备领用登记本、并由专人负责。※领用量与剩余量应吻合，以被查。(4)仪器使用登记※仪器使用记录本。※每台仪器必须配置“标准操作规范（SOP）”。※每一样品的HPLC检测项目一定要固定色谱柱，且流速与柱温亦要固定。这一点至关重要！(4)色谱柱使用登记※色谱柱一定要有使用登记，并记录下每次试验时：样品、流速、柱温、柱压、柱效、分离度、拖尾因子等信息。以便观察该色谱柱从是使用起、至性能无法满足测定要求的过程中其变化程度与速度，做到心中有数。尤其在遇到问题时，便于查询根源、迅速找到解决问题的方案。引申至液相中经常出现的一些问题：※柱温箱一定要配制。试验温度建议在30-50℃。清洗温度可高于试验温度5℃。※色谱柱清洗：对于正相、实验结束用流动相再冲洗半小时即可。对于反相，除非流动相采用单纯的甲醇/乙腈-水，其他所有流动相皆建议先用纯水冲洗半小时（流速1.0ml/min），再改用20%甲醇冲洗半小时，随后取下、两头密闭即可。绝不推荐……引申至液相中经常出现的一些问题：※液相色谱仪：绝不建议为节约乙腈/甲醇，而采用两个泵，将水相与有机相分别注入混合的方式（即便配置了脱气机）。一定要将两相按比例混合后脱气过滤，采用一个泵注入，且清洗时一定就清洗使用泵，不建议采用另一个泵将清洗液注入（重点讲述！）※过滤膜一定要采用混相膜。※正相流动相无需过滤、混合均匀后超声即可。引申至液相中经常出现的一些问题：※梯度洗脱时——最理想方式：A相位高比例的水相兑低比例的有机相；B相为低比例的水相兑高比例的有机相；其次：A相位高比例的水相兑低比例的有机相；B相皆为有机相。绝不建议A相位纯水相、B相位纯有机相，即便质量标准如此拟定，采用一元一次函数，将其转换成第二种情况，否则极易出现基线飘动、无法准确积分的现象。引申至液相中经常出现的一些问题：※梯度洗脱时，必须先行测定空白溶剂峰，应基线平稳、溶剂峰出峰在前。确认色谱柱内清洗干净后再测定样品。(5)质检科的“一般留样”和“重点留样”※这些留样均与研发时的“稳定性考核不同”。※一般留样：每批样品均需有少量保留，主要是观察外观为主，检测较少。※重点留样：当工艺/处方有更改、生产规模有变更时，针对性检测一些项目：溶出度、有关物质等。(6)对照品的使用与管理※管理：登记品名、购入时间、编号（批号）、来源、数量以及使用期限（如有），设置台账等。※贮藏：按照对照品使用说明书上的标注（主要是温湿度）进行贮藏（一般置于冰箱内）。如自制工作用对照品量较大或对照品自身较易吸潮，建议分装成小包装密封存放。(6)对照品的使用与管理※称量：固体/采用的称量纸一定要小，一般为购买来的硫酸纸1/4即可。如称过量，可取回。液体/采用倒称法，将吸管或药勺同对照品一并称量（着重讲述测定残留溶剂时对照品称量方法）※对于价格昂贵或量极少的对照品，可考虑将配制好的对照品溶液贮藏于冰箱内放置，在一定时间内使用。但该时间段必须经过验证。对照品溶液贮藏时间验证方法※0天配制时，取浓度高的溶液（最好不低于有关物质测定时的供试品溶液浓度）进样测定，观测杂质与主成分情况（用归一化法）。※每隔一段时间再取该浓度高的溶液测定，依法观察。※在三或六个月节点，另配制一份对照品溶液，测定前两份对照品含量，如在±2.0%以内，则证明对照品溶液浓度没有改变，可在该时间段内使用。对照品使用特例硝酸咪康唑溶液剂含量采用磺基丁二酸钠二辛脂滴定液滴定，根据对照品和样品消耗体积计算。此时，为摸索适宜滴定体积，可先采用原料药进行预实验，最后采用对照品进行准确测定。(7)仪器使用的环境要求※天平台面应为大理石台面；※红外房间必须控制温湿度；※粒度房间应有一定粉尘/粒度级别要求；※卡氏水分测定环境一定要注意湿度。日常理化分析检验中的注意事项——详解药典附录中每一项目的关键所在【紫外-可见分光光度法】比色法测定时、一定要平行操作，测定时迅即完成。【红外鉴别】观测2500cm-1-400cm-1波数段间8大主峰波数。峰间高低可以不一。个别小峰允许存在，是杂质峰显示。【荧光分析法】响应值不稳定，有时会波动较大，不建议使用。【气相色谱法】检测二氯甲烷和三氯甲烷时，如采用氢火焰检测器，响应值小，无法准确测定。建议采用电子捕获检测器。【熔点测定法】试验结束后切勿立即切断电源，设置为室温，使其自然降温，之后再关闭电源。【旋光度测定法】温控尤为重要！先将溶剂置于该温度水浴中，随后采用该溶剂快速配制溶液，定容后旋即测定。【氧瓶燃烧法】样品一定要燃烧完全。若氧气充满、尚无法燃尽，可将样品量减半，在其后的测定中再将浓度增加一倍，即可。【氯化物、硫酸盐、重金属检查法】建议配制梯度对照液，这样可对样品进行一个全面、综合分析。【炽灼残渣检查法】炽灼后放置于干燥器内的时间不得少于1小时，否则称重不稳。【崩解时限】胶囊剂有时会出现胶囊壳存留于网底的情况，可将囊壳取出，若其中无内容物，亦可判断为合格。高效液相色谱法测定含量(1)对照品溶液配制2份（2份粉末）分别进样3针，计算校正因子f=C/A，随后计算f的RSD，小于2.0%即认为2份对照品溶液配制均无误、且仪器已稳定。取f均值测定样品。(2)样品溶液亦配制2份，每份进样一针，两份百分含量差值在±2.0%以内即可。高效液相色谱法测定含量(3)待全部样品检测结束后（无所谓n针，即便运转了一天、亦无须担忧），任取一份对照溶液回进一针，计算含量（浓度），应在理论浓度偏差的±2.0%以内，便可确保检测过程中仪器性能的稳定。(4)以上各针的测定，积分参数必须一致，决不能各自采用最优化积分。样品平均校正因子样品AfC)(•=−高效液相色谱法测定有关物质(1)每批样品配制1份，即可。(2)多批样品同时检测时，选用粉末量最少的样品稀释制成自身对照溶液即可，绝对无需每一样品均稀释成自身对照溶液。(3)对照溶液连续进样3针，计算主峰峰面积的RSD，小于2.0%即认为仪器稳定、积分无误。取峰面积均值用于样品杂质峰比较。高效液相色谱法测定有关物质(4)测定空白溶剂（梯度洗脱时一定要先行测定）(5)每一样品进样一针，对杂质峰进行积分。积分时注意事项：)最小峰面积：设定为对照溶液主峰面积的1/10-1/50（讲述原理）)斜率与峰宽：与对照溶液积分参数相同。)技巧：对照溶液稀释后，若主峰面积呈线性（一般均呈线性），归一化法计算结果与自身对照法测定结果基本一致（相差在0.02%以内），可用归一化直接观测。　化学分析方法学验证的精髓与核心(1)方法变更允许，但一定要经过验证。例如：溶出度测定，样品取出后需稀释一倍。可改为不稀释、用0.5cm小池测定（对照品亦不稀释），但需验证。证明该更改可行。如吸收度值低于0.20，可采用2-5cm小池测定。(2)称量范围是规定范围的±10%。如规定取20mg，对照品两份与供试品两份只要介于18.0mg~22.0mg间即可，无需强求极其接近。一、线性试验主成分含量测定以测定浓度为100%，50%~120%之间选取5个点即可。溶出（释放）度测定以释放量的10%～120%间选取5个点即可。杂质含量用杂质对照品准确测定以杂质限度为100%，50%~120%之间选取5个点即可。测定结果：1）阐述如何看待截距和斜率、如何应用。2）误差在哪里，应用时的注意事项。3）为什么没有不成线性的？通常C、H、O、N结构，紫外监测器决定。个别化学键所致。梯度洗脱时，有时会出现不成线性。4）都成线性、为何还要做？最小二乘法的原理知晓。何种情况不成线性？PPHOOOHOHOOHOHNN唑来磷酸结构式引申使用：1）有关物质测定归一化法和自身对照法的相互妙用。2）缓释制剂溶出度测定，对照品浓度设定为中间浓度。举例说明。3）回收率试验为何做80%~120%即可？亦及样品浓度与对照品浓度接近到何等程度的理解。4）国内只注重相关系数，不注重截距。二、精密度试验重复性试验：连续进样6次。中间精密度试验和重现性试验通过“耐用性试验中的溶液稳定性试验”来体现。浓度极低时才会不理想，加大进样量。色谱峰形极为重要，对称性、柱效等参数。加大柱温、增加流动相中有机相比例，使被测物质峰尽快出峰。三、准确度试验用回收率来衡量作法：在80%~120%间选择3点或5点，原因是由外标一点法决定的。已知杂质、且有杂质对照品的，可采用加入法，即加样回收率来评价。一般情况下，只要空白辅料无干扰，回收率均是良好的！四、专属性有关物质为主，其他检测项目（含量）基本上均参照有关物质。有关物质的验证，采用中间体和降解产物（确认结构后人工合成）来验证与主成分的分离。系统适用性试验的配制方法：在100％浓度的主成分溶液中加入1%浓度的杂质对照品，以模拟样品中有可能存在的状态。介绍配制方法——先配制杂质贮备液，再用供试品溶液（或浓的对照品溶液）来稀释，简便、易行！专属性试验验证图谱存在问题——配制相同浓度，测定样品时，主成分峰骤然加大，将杂质峰覆盖。强破坏试