高中生物实验总结

1/20高中生物实验总结实验一观察DNA和RNA在细胞中的分布1.实验原理：利用甲基绿和吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布；甲基绿和吡罗红对DNA和RNA的亲和力不同：甲基绿+DNA→绿色吡罗红+RNA→红色2.分布：真核生物DNA主要分布在细胞核中；线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA；RNA主要分布在细胞质中。3.实验结果:细胞核呈绿色,细胞质呈红色.4.实验结论：DNA主要分布在细胞核中；RNA主要分布在细胞质中；5.实验流程：（1）取口腔上皮细胞制片：①载玻片上滴一滴质量分数为：0.9%NaCl溶液；②漱口后，用消毒牙签刮口腔内壁后放在载玻片的液滴中涂抹几下；③载玻片在酒精灯上烘干，盖上；（2）水解：①载玻片放入盛有30ml质量分数为8%的HCl的小烧杯中；②大烧杯中加入30℃温水；③将小烧杯放入大烧杯中保温5min；（3）冲洗涂片：用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10s;（4）染色：①吸水纸吸去载玻片的水分；②滴两滴混合染液，染色5min；③吸去多余的染液，盖上盖玻片；（5）观察：先低倍后高倍；6、几种液体在实验中的作用：（1）0.9%NaCl溶液：保持口腔上皮的正常形态。8%的HCl：①改变细胞膜等的通透性；②使染色质中的DNA与蛋白质分开。蒸馏水：配置染液；冲洗载玻片。（2）混合染液需要现配现用；（3）该实验不宜用深色的材料，避免颜色对实验的干扰。实验二、物质鉴定一、实验原理：还原糖+斐林试剂～砖红色沉淀（水浴加热）脂肪+苏丹III～橘黄色（滴液观察或制片显微镜观察）脂肪+苏丹IV～红色蛋白质+双缩脲试剂～紫色反应（不加热）1、还原糖的检测（1）材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如：苹果，梨，白萝卜。（2）试剂：斐林试剂（甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液），现配现用。2/20（3）步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL（斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入）→水浴加热2min左右→观察颜色变化（白色→浅蓝色→砖红色）操作方法注意问题解释1.制备组织样液。（去皮、切块、研磨、过滤）苹果或梨组织液必须临时制备。因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。2.取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。3.向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂；切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu(OH)2在70~900C下分解成黑色CuO和水；甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无CuOH生成。4.试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。也可用酒精灯对试管直接加热。防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；缩短实验时间。★模拟尿糖的检测1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液2、检测方法：斐林试剂（水浴加热）或班氏试剂或尿糖试纸3、结果：试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。2、脂肪的检测（1）材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。（2）步骤：制作切片（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央↓染色（滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精）↓制作装片（滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片）↓镜检鉴定（显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒）3/20操作方法注意问题解释花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。干种子要浸泡3~4小时，新花生的浸泡时间可缩短。因为浸泡时间短，不易切片；浸泡时间过长，组织较软，切片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，染色1分钟。染色时间不宜过长。用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上1~2滴蒸馏水，盖上盖玻片。滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。装片不宜久放。时间一长，油滴会溶解在乙醇中。3、蛋白质的检测（1）试剂：双缩脲试剂（A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液）（2）步骤：试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL，摇匀→加双缩尿试剂B液4滴，摇匀→观察操作方法注意问题解释制备组织样液。（浸泡、去皮研磨、过滤。）黄豆浸泡1至2天，容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。鉴定。加样液约2ml于试管中，加入双缩脲试剂A，摇匀；再加入双缩脲试剂B液3~4滴，摇匀，溶液变紫色。A液和B液也要分开配制，储存。鉴定时先加A液后加B液。CuSO4溶液不能多加。先加NaOH溶液，为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B液混装或同时加入，会导致Cu2+变成Cu(OH)2沉淀，而失效。否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。可用蛋清代替豆浆。蛋清要先稀释。如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。附：淀粉的检测和观察用试管取2ml待测组织样液，向试管内滴加2滴碘液，观察颜色变化。碘液不要滴太多以免影响颜色观察4、考点提示：（1）常见还原性糖与非还原性糖有哪些？葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原4/20（2)还原性糖植物组织取材条件？含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。（3)研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。（4）斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？斐林试剂甲和斐林试剂乙直接反应生成酒石酸络铜离子，酒石酸络铜离子和可溶性还原糖在加热条件下反应产生砖红色沉淀。斐林试剂甲和斐林试剂乙混合后会因酒石酸有一定的还原性而自发地缓慢产生氧化亚铜沉淀，而氧化亚铜是砖红色沉淀，这就会给实验带来误解。因此斐林试剂一般为现用现配。（5)还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为：浅蓝色棕色砖红色（6）花生种子切片为何要薄？只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。（7）转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？切片不均匀。（8）脂肪鉴定中乙醇作用？洗去浮色。（9）双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？先加A液的目的。怎样通过对比看颜色变化？不能混合；先加A液的目的是使溶液呈碱性；先留出一些大豆组织样液做对比。实验三观察叶绿体和细胞质流动1、材料：新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶，口腔上皮细胞临时装片2、原理：叶绿体在显微镜下观察，绿色,球形或椭球形。用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色,细胞质接近无色。知识概要：取材制片低倍观察高倍观察考点提示：（1)为什么可直接取用藓类的小叶，而不能直接取用菠菜叶？因为藓类的小叶很薄，只有一层细胞组成，而菠菜叶由很多层细胞构成。（2）取用菠菜叶的下表皮时，为何要稍带些叶肉？表皮细胞除保卫细胞外，一般不含叶绿体，而叶肉细胞含较多的叶绿体。（3)怎样加快黑藻细胞质的流动速度？最适温度是多少？进行光照、提高水温、切伤部分叶片；25℃左右。（4）对黑藻什么部位的细胞观察，所观察到的细胞质流动的现象最明显？叶脉附近的细胞。（5）若视野中某细胞中细胞质的流动方向为顺时针，则在装片中该细胞的细胞质的实际流动方向是怎样的？仍为顺时针。（6）是否一般细胞的细胞质不流动，只有黑藻等少数植物的细胞质才流动？否，活细胞的细胞质都是流动的。（7）若观察植物根毛细胞细胞质的流动，则对显微镜的视野亮度应如何调节？视野应适当调暗一些，可用反光镜的平面镜来采光或缩小光圈。（8）在强光照射下，叶绿体的向光面有何变化？叶绿体的受光面积较小有一面面向光源。实验四、观察有丝分裂1、材料：洋葱根尖（葱，蒜）2、步骤：（一）洋葱根尖的培养（二）装片的制作5/203、实验原理：（1）龙胆紫溶液能将染色体染成深色（2）有丝分裂各个时期细胞内染色体的形态和行为变化不同，可用高倍显微镜根据各个时期内染色体的变化情况，识别该细胞处于那个时期。制作流程：解离→漂洗→染色→制片1.解离:药液:质量分数为15%的盐酸,体积分数为95%的酒精(1:1混合液).时间:3~5min.目的:使组织中的细胞相互分离开来.2.漂洗:用清水漂洗约10min.目的:洗去药液,防止解离过度,并有利于染色.3.染色:用质量浓度为0.01g/mL或0.02g/mL的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)染色3~5min目的:使染色体着色,利于观察.4.制片:将根尖放在载玻片上,加一滴清水,并用镊子把根尖弄碎,盖上盖玻片,在盖玻片上再加一片载玻片.然后用拇指轻轻地按压载玻片.目的:使细胞分散开来,有利于观察.过程方法时间目的解离上午10时至下午2时，剪去洋葱根尖2-3mm，立即放入盛入有盐酸和酒精混合液（1：1）的玻璃皿中，在温室下解离。3-5min用药液使组织中的细胞相互分离开来漂洗待根尖酥软后，用镊子取出，放入盛入清水的玻璃皿中漂洗。约10min洗去药液，防止解离过度染色把根尖放进盛有质量浓度为0.01g/ml或0.02g/ml的龙胆紫溶液（或醋酸洋红液）的玻璃皿中染色。3-5min染料能使染色体着色。制片用镊子将这段根尖取出来，放在载玻片上，加一滴清水，并用镊子尖把根尖能碎，盖上盖玻片，在盖玻片上再加一片载玻片。然后，用拇指轻轻的按压载玻片。使细胞分散开来，有利于观察（三）观察1、先在低倍镜下找到根尖分生区细胞：细胞呈正方形，排列紧密,有的细胞正在分裂。（长方形：伸长区）2、换高倍镜下观察：分裂中期→分裂前、后、末期→分裂间期。（注意各时期细胞内染色体形态和分布的特点）。其中，处于分裂间期的细胞数目最多。考点提示：（1)培养根尖时，为何要经常换水？增加水中的氧气，防止根进行无氧呼吸造成根的腐烂。（2）培养根尖时，应选用老洋葱还是新洋葱？为什么？应选用旧洋葱，因为新洋葱尚在休眠，不易生根。（3）为何每条根只能用根尖？取根尖的最佳时间是何时？为何？因为根尖分生区的细胞能进行有丝分裂；上午10时到下午2时；因为此时细胞分裂活跃。（4）解离和压片的目的分别是什么？压片时为何要再加一块载玻片？解离是为了使细胞相互分离开来，压片是为了使细胞相互分散开来；再加一块载玻片是为了受力均匀，防止盖玻片被压破。（5）若所观察的组织细胞大多是破碎而不完整的，其原因是什么？压片时用力过大。6/20（6)解离过程中盐酸的作用是什么？丙酮可代替吗？分解和溶解细胞间质；不能，而硝酸可代替。（7)为何要漂洗？洗去盐酸便于染色。（8)细胞中染色最深的结构是什么？染色最深的结构是染色质或染色体。（9）若所观察的细胞各部分全是紫色，其原因是什么？染液浓度过大或染色时间过长。（10）为何要找分生区？分生区的特点是什么？能用高倍物镜找分生区吗？为什么？因为在根尖只有分生区的细胞能够进行细胞分裂；分生区的特点是：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞处于分裂状态；不能用高倍镜找分生区，因为高倍镜所观察的实际范围很小，难以发现分生区。（11）分生区细胞中，什么时期的细胞最多？为什么？间期；因为在细胞周期中，间期时间最长。（12）所观察的细胞能从中期变化到后期吗？为什么？不能，因为所观察的细胞都是停留在某一时期的死细胞。（13）观