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临床检验临床检验又称实验诊断学,即通过实验室的各种检查方法,包括感官检查、理学检查、化学检查,显微镜检查以及自动化仪器检查等,对病人的血液、体液、分泌物和排泄物等标本进行检查、分析,以获得病原、病理变化及脏器功能状态等资料。1、临床血液学检验2、体液检验3、临床化学检验4、临床免疫学检验5、微生物学检验6、分子生物学检验临床化学临床免疫临床微生物临床基础检验血液细胞学检验科临床检验在医学中的作用为准确诊断、及时治疗提供依据:如:肾脏有实质性损伤:尿液中出现蛋白、细胞管型贫血(症):血中红细胞和血红蛋白量减少白血病:血象和骨髓象为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据:在疾病过程中,血液、体液、分泌物和排泄物也会随之发生相应的变化为预防疾病提供资料如血象和肿瘤细胞学的普查等临床生化检验临床生物化学,即采用生物化学分析方法,对临床标本进行定性或定量分析,以辅助临床诊断;临床生化常用的检测方法:化学比色法:待测物经特定的化学反应生成的一定的产物,在特定波长光照下具有吸收峰,待测物的浓度与吸光度成正比,从而对物质进行定量检测方法免疫比浊法:抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成复合物,使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时,形成的复合物随抗原量增加而增加,浊度亦增加。然后检测透(散)射光强度,即透(散)射比浊离子选择性电极电位法:通过检测电极表面电位的改变,比较测定电极与参比电极表面电位变化的差值大小来计算样本中离子的含量。如,钾、钠、氯的测定电泳法:直流电场中,带电粒子向相反电极移动,血清中的蛋白质为双性离子,在碱性环境中带负电荷,在电场中向正极移动。不同蛋白具有不同大小、分子量和电荷,带电荷多,分子量小则泳动快,反之则慢,从而将不同蛋白分离。如:血清蛋白电泳二全自动生化分析仪自动生化分析仪:集添加试剂、注入样本、比色、计算、出报告等功能于一体,用于检测生化项目的计算机控制的自动化仪器。国内使用的主要品牌:日本:日立(HITACHI)7020,7060,7080,7170,7180,7600奥林帕斯(OLYMPUS),AU400,640,800,1000,2700,5400岛津(SHIMADZU),CL7200,8000东芝(TOSHIBA),TBA40FR,120FR希森美康(SYSMEX);180京都1024魅力系列美国:雅培(ABBOTT),AerosetC8000,2000德灵(杜邦)(DADEBEHRING),AR,RXL,XPAND贝克曼库尔特(BECKMANCOULTER),CX4,5,7,9,LX20德国:拜尔(BAYER)ADVIA1650,2400;罗氏(ROCHE)利霸欧宝S-600;康宁560国内:深圳迈瑞,沈阳东软、南京英诺华,上海科华其他:荷兰的威图、意大利的BT2000/3000、西班牙的A30等。光学光谱区远紫外近紫外可见近红外中红外远红外10nm~200nm200nm~380nm380nm~780nm780nm~2.5m2.5m~50m50m~300m自动生化分析仪应用原理:分光光度法分光光度技术是利用物质的分子对光的选择性吸收作用对物质进行定性或定量分析的技术。分光光度法是光谱分析技术中最常用的一种,应用最多的是紫外-可见光分光光度法光吸收基本定律:Lambert-Beer定律Lambert-Beer定律时讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层厚度之间关系的基本定律,该定律时分光分析的理论基础。K为比例常数,C为溶液浓度(当液层厚度为cm,浓度单位为mol/L时,吸光系数K称为摩尔吸光系数ε。ε的意义是:当液层厚度为1cm,物质浓度为1mol/L时在特定波长下的吸光度值。ε是物质的特征性常数)Lambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体A=lg(I0/It)=kbc吸光度介质(溶液层)厚度(cm)——光径吸光度与浓度的关系A=bc吸光度0.00光源检测器吸光度0.22光源检测器b吸光度0.42光源检测器b一般对一个新的试剂来说,总是先做标准品定标(校准),再进行相应的样本检测。多点定标和一点定标:通过多个浓度有一定梯度的标准液来定标(校准),规范出标准曲线的一定的趋势,以此来得到浓度与吸光度的函数。多点定标大多用于非线性校准,得到的标准曲线一般为二次函数的抛物线类型。只用一个标准品来定标,得到的函数为Y(浓度)=AX(吸光度)+B,是一条简单的直线。生化分析基本测定方法连续监测法(速率法):即连续监测反应过程,按产物的生成或底物的消耗的速度(△A/min)进行定量分析的方法,读数点必须在等速区对低浓度的样本,它的吸光度随时间变化的慢(速率低),而高浓度样本,它的吸光度随时间的快(速率高)。在反应时间进程曲线上为反应呈恒速区段(斜率保持不变),常用于酶活性线性反应期测定或以酶为工具测底物(代谢物)的浓度。终点法:反应到达终点后与起始点(空白)的吸光度差与相同条件下用校正液测得的结果比较取得结果的方法。试剂与样本反应之前的吸光度在某一定的水平,开始反后,在主波长下出现一个最大的吸光度,得到一个较明显的吸光度的落差,所以通过标准品吸光度变化值可以限定其它样本的浓度。终点法中的反应时间是指开始反应后,试剂与反应物反应到达一定的稳定点,试剂与反应物不再反应,吸光度不再随时间的变化而发生改变,既到达了反应平衡。其间所要的时间就是反应时间。在反应时间进程曲线上为与x轴平行线区段。(1)延迟区:delaytime,lagtime;(2)等速区:斜率相等的线性段;连续检测法在此区读数(3)过渡区:两点固定时间法,在此在此区读数(4)平衡区:终点法在此区读数实时反应曲线典型的全自动自动生化分析仪基本结构样品(Sample)系统:校准品、质控品和病人样品盘。由样品装载、输送和分配等装置组成。试剂(Reagent)系统:一般由试剂储放(试剂盘)和分配加液装置组成;条形码(Barcode)识读系统:条码试剂反应系统:反应盘-反应转盘比色杯(Cuvettes);恒温控制装置;蠕动泵(Pump);回旋搅拌混合装置清洗(Wash)系统:碱性洗液,酸性洗液,去离子水清洗-防止交叉污染比色系统:卤素灯(325~800nm)或氙灯(285-750nm);)单色器与检测器(可见一紫外分光光度计);程序控制系统:生化分析仪主要操作程序仪器运行前,主要进行仪器的基本设置:l.试验项目设置对试验名称、编码,试验组合(Profile)、试验轮次(Round),必要时包括试验顺序等设置。2.各试验的参数设置包括试验间比值、结果核对等参数的设定。3.剂设置根据有关试验参数,设置各试验的试剂位、试剂瓶规格,必要时设定试剂批号、失效期等。4.校准品设置对校准品的位置、浓度和数量等进行设置。5.质控设置根据质控要求。设置质控物个数,质控规则,质控项目及相应质控参数等。6.样品管设置包括样品管类型,残留液高度(死体积),识别方式等设置。7.其他设置对数据传输方式、结果报告格式、复查方式及复查标准等设置。常规操作程序:开机(预热、保养)-设置开始条件(日期时间索引、轮次、样品起始号等)-根据需要,申请校准、质控和病人测定项目(包括架号、杯号或顺序号。测定中可继续申请)_装载校准品、质控物和病人标本-装载试剂-核对仪器起始状态(未应用条码系统,采用顺序识别样品时,尤其要核对测定起始编号是否与样品架号和申请号相符)-定标和质控测定-检查定标和质控结果-病人标本测定-测定过程监控(试剂检查,观察分析结果,编辑校正)-数据传递(打印报告,向检验管理系统传输,包括工作量统计、财务统计、病人情况追踪、质控分析等)。测定后保养。测定结果检查分析:1.各种警示符号的含义与作用在正确设定参数的前提下,利用各种警示符能提高发现问题和解决问题的效率。2.运用仪器的相关操作屏(界面)如:用反应过程监测(ReactionMonitor),观察反应时间进程曲线;用校准追踪(CalibrationTrace)回顾分析校准曲线;利用统计(Statistics)了解不同日期段病人测定均值及数据分析;运用分析数据编辑(DataEdit)察看和校正测定数据。3.校准的检查要充分利用仪器设置的功能,监测校准曲线图形、各校准点吸光度值(不能忽略试剂空白值及空白速率值)、计算K值等的波动情况,以及与以往的比较。必要时,应进一步检查反应时间进程曲线。必须结合质控数据来把握实验条件。4.病人结果的检查除了目测观察或用血清指数了解标本性状,注意和了解临床资料及诊断外,分析反应时间进程曲线及数据。三生化试剂(试剂盒)生化试剂定义及应用体液中的多数物质正常含量在一定范围,检测这些物质的含量对诊断疾病起很重要的参考价值。生化试剂(试剂盒)指与样本(一般为体液:血液,尿液,腹水等)中的某物质发生反应的化学物质。通过反应,引起颜色(光吸收)的变化,达到测量样本该物质含量的目的。生化试剂的应用范围:医院、疾控中心、血站(只检测ALT)、体检中心、部分保险公司的检验科。生化试剂的发展从性状来讲,经历了冻干、干粉、液体试剂。从单一试剂向双试剂发展,再向单试剂发展。双试剂:存储时间长、稳定、抗干扰能力强,一般大医院都选择使用双试剂,其缺点是每个试剂需要两个试剂位。单试剂:存储时间、稳定性、抗干扰能力均不如双试剂强,但占用的试剂位少,使用方便,特别适合小医院及小型仪器使用;如:日立7020仅有36个试剂位,如果全部使用双试剂,则只能开展18个检测项目,而医院出于临床需要及增加收益方面的考虑,希望开展的项目越多越好,因此会倾向于选择使用单试剂,而乡镇一级卫生院绝大部分都是半自动生仪,只能使用单试剂。如果把双试剂混成单试剂使用,一则比较麻烦,二则不稳定,也很浪费。单试剂与双试剂的界限:在某些双试剂,由于各试剂成份及所参与反应的目的的不同,有的双试剂可以事先混成单试剂,但有的双试剂只能用双试剂通道来做。如:R1用来去干扰的目的:R1试剂用来清除血清中的干扰物,防止R2与血清中的干扰物反应。如化学氧化法的TBIL,DBIL,CR(酶),LDL-C等。单试剂不稳定:R1,R2中的成份相互影响发生反应,使试剂中色源提前反应,引起起始吸光度及吸光度变化率的改变等。(CHE,GGT)仪器自身特点:有的仪器(如半自动,手工)它没有双试剂的加样模式,那它只能用单试剂来做,一般双试剂加样模式的仪器也可以单试剂加样来做,但是单试剂加样的仪器就不一定能做那些只能双试剂模式的检测。标准品与质控品标准品(标准血清)即一个或几个已知浓度的样本,它在检测中作为一个或几个参照物,使以后的所有的检测都与之比校,以此来得到其它样本的浓度。标准品明确赋值,通过校正后,得到较为规范的标准曲线,以此得到检测样本浓度与该样本吸光度之间的函数关系。标准品稳定性的重要性:标准品作为其它样本检测的标准,必须保持它的准确性和稳定性,一旦标准出现问题,后果很严重。在保存一定时间后,如果标准品的实际浓度降低了,那么定标(校准)后检测样本时该测值就会偏高,反之,如果标准品实际浓度变高了,那么测定值就会偏低。故标准品在运输,储存过程中应慎重,以免其变质。质控品:质控血清是已有靶值的血清,并且对它的测定有一定允许的偏差,质控血清在质控工作中起重要作用。同样质控品必须要与试剂的体系一致,如果两种方法学或者两个体系的试剂之间的质控就不一定能够做到相互符合。所以试剂与质控必须一致使用。生化试剂的分类一按用途来分,主要有以下方面(本公司产品—以检测的物质命名):肝功能肝功常规:ALT,AST,ALP,GGT,TP,ALB,TBIL,DBIL,发达地区医院选择性加测:TBA,AFU,AFP,ADA,CHE,GPDA,PA肾功能肾功常规:UA,BUN,CR发达地区医院选择性加测:B2-MG,NAG,mALB,CSF,CYS-C心肌酶谱LDH,HBDH,CK,CK-MB血脂TG,TCH,HDL-C,LDL-C,APOA1,APOB,LP(a)风湿三项ASO,RF,CRP(中西部地区一般使用手工法)血糖GLU,GSP,HBA1C,
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