血清使用说明-解冻-灭活-分装

血清使用说明胎牛血清与小牛血清某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可。储存条件血清一般储存于－20℃，同时应避免反复冻融。若存放于4℃时，请勿超过一个月。血清中絮状沉淀的处理沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白，这是正常特性，不会影响产品性质。离心血清（400g，1-2分钟）或简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤。使用浓度一般为5－20％，最常用是10％。过多血清容易使培养中的细胞发生变化，特别是一些二倍体的无限细胞系，迅速生长之后容易发生恶性转化。解冻方法血清从冰箱取出后应慢慢地解冻。最好在4℃低温冰箱里放置一天或直到完全融化为止。如果时间不允许低温解冻,可参考以下解冻方法：1.将血清从冰箱里取出后，在室温下放置15-20分钟。2.然后将血清放置在37℃水浴槽里。过高温度会导致血清出现浑浊现象。不要让水淹没装有血清的瓶子。3.每隔5分钟左右适当摇晃瓶子，直到完全地解冻为止。热灭活方法加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。1.用上述描述的方法将血清在低温冰箱或室温下解冻。2.在血清解冻时，将一个容器装入适量的水，用于模拟装有血清瓶子在热处理过程中检测瓶内水的温度。容器大小、质地和装水的量最好与装血清的瓶子相同或相似。3.待血清彻底解冻时，将含有血清的瓶子放在预热的56℃水浴里，不要将含有血清的瓶子让水淹没或接近瓶子的盖子，以免导致污染。4.在开始加热处理时，要及时使用温度计测定模拟瓶内水的温度。5.在预热期间，每隔3-5分钟要适当摇晃含有血清和水的瓶子，确保瓶内液体均匀加热。6.一旦模拟瓶内的水温达到55.8±0.5℃时，开始计时，并在此温度范围内热处理30分钟，然后立即放在冰上冷却。为防止在热处理过程中由蛋白质变性而导致的浑浊和沉淀现象，热处理时应注意下列事项：1.不要用高于25℃以上的温度加快解冻速度。2.在热处理之前，要使血清彻底融解。3.不要使热处理的温度高于56.3℃4.热处理时间不要长于30分钟。5.在加热过程中一定要定时摇动血清。避免事项避免反复冻融长时间储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。避免产生沉淀解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。血清分装时，须规则摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一。勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。建议事项一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。（100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素）500ml血清分装过程：准备灭菌的血清瓶慢慢解冻，最后放在室温平衡下温度。灭活水浴锅，56℃，30分钟，并且随时摇晃均匀。取出，立即放在冰上冷却|自然冷却至室温（约需1-3小时）。在热灭活过程中，定时适当摇动可以减少沉淀现象的发生。无菌分装转入无菌间，在超净台内将血清分装入50-100ml血清瓶中（注意预先要将血清轻轻摇动数周、混匀；用吸液管吹出血清时要注意：不要吹出气泡（血清很粘稠，很容易产生气泡；如果产生气泡，则在酒精灯火焰上过一下）封口，并于-20℃保存备用。使用前融化，最好置于4℃融化。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。