miRNA操作手册(2013版)

上海艾博思生物技术有限公司ShanghaiIntegratedBiotechSolutionsCo.,Ltd.使用说明IBS-miRNAoligoszmiRNAmimics(模拟物)zmiRNAinhibitors(抑制物)操作手册IBS-miRNAoligoszmiRNAmimics(模拟物)zmiRNAinhibitors(抑制物)使用说明订购和技术服务联系信息：•电话:[phone]•Fax:[phone]•网上订购:•E-MAIL:[e-mail](产品订购)[e-mail](服务咨询）[e-mail](技术支持)您可以通过传真，电子邮件，或者直接从艾博思网站订购.每个订单请填写详细的订购信息:•您的联系信息(名称,电话,电子邮箱地址)•产品名称，目录号，订购量•邮寄地址•发票抬头更多的信息,参考艾博思公司网站—全面生物技术解决方案上海浦东张江高科技园紫薇路750弄10号202室，邮编：201203,电话：[phone]传真：[phone]E-mail:[e-mail],[e-mail],[e-mail]公司网址：Ⅰ.MiRNA简介A.MiRNA实验原理microRNA(miRNA)是一类长度很短的非编码调控单链小分子RNA，约20~24nt(少数小于20nt的)，由一段具有发夹环结构的长度为70~80nt的单链RNA前体(pre-miRNA)剪切后生成。它通过与其目标mRNA分子的3'端非编码区域(3'-untranslatedregion,3'UTR)互补匹配导致该mRNA分子的翻译受到抑制。miRNA基因以单拷贝、多拷贝或基因簇等多种形式存在于基因组中，而且绝大部分定位于基因间隔区。上海艾博思生物技术有限公司ShanghaiIntegratedBiotechSolutionsCo.,Ltd.IBS—全面生物技术解决方案上海浦东张江高科技园紫薇路750弄10号202室，邮编：201203,电话：[phone]传真：[phone]E-mail:[e-mail],[e-mail],[e-mail]公司网址：的丰度转染试剂如脂质体法，电穿孔法等实验对照miRNA模拟物阴性对照miRNA抑制物阴性对照miRNA荧光标记的转染对照基因表达的检测方法miRNA水平检测用qRT-PCR蛋白表达水平检测用westernblot荧光素酶试验检测目的miRNA与目的基因的3’UTR的结合试验细胞miRNA分离纯化组织miRNA分离纯化血液miRNA分离纯化脂质体pSi-TransfectionReagentLipo2000PEI病毒慢病毒（lentivirus）腺病毒（adenovirus）MiRNAqRT-PCRSYBR染料法Probe探针法蛋白分析WesternblotMicroarray基因芯片miRNA芯片报告系统分析荧光素酶报告系统miRNA分离纯化miRNA转染MiRNA功能MiRNA检测GOInvivo研究动物实验级别大规模miRNA模拟物miRNA抑制物大规模miRNA质粒慢病毒上海艾博思生物技术有限公司ShanghaiIntegratedBiotechSolutionsCo.,Ltd.IBS—全面生物技术解决方案上海浦东张江高科技园紫薇路750弄10号202室，邮编：201203,电话：[phone]传真：[phone]E-mail:[e-mail],[e-mail],[e-mail]公司网址：(模拟物)2.修饰的miRNAmimics(模拟物)3.荧光标记miRNAOligos4.miRNAmimics(模拟物)对照5.miRNAinhibitors(抑制物)6．miRNAinhibitors(抑制物)对照1.常规的miRNAOligo上海艾博思miRNAOligo是在ISO9000质量标准下生产并经过了反复优化和严格测试；产品质量高度稳定，以退火双链RNA冻干粉的产品形式提交给用户。2.化学修饰miRNAOligo上海艾博思化学修饰miRNAOligo不仅增强了miRNA在血清、体内及细胞培养中的稳定性，同时与标准miRNA作用时间相比，化学修饰miRNAOligo的作用时间可延长一倍左右。3.荧光标记miRNAOligo荧光标记miRNAoligo可用荧光显微镜、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜等观察到，可直观地观察miRNA转染效率，优化转染条件；荧光标记的miRNA还可用于miRNA细胞定位及双标实验（配合标记抗体）来追踪转染过程中导入了miRNA的细胞，将转染与靶蛋白表达结合起来。4.miRNA阴性对照上海艾博思miRNA模拟物和抑制物阴性对照，与哺乳动物基因无同源性，通过严格的BLAST比对，并且多篇文献引物有很强的阴性结果的说服力。上海艾博思生物技术有限公司ShanghaiIntegratedBiotechSolutionsCo.,Ltd.IBS—全面生物技术解决方案上海浦东张江高科技园紫薇路750弄10号202室，邮编：201203,电话：[phone]传真：[phone]E-mail:[e-mail],[e-mail],[e-mail]公司网址：转染试剂是一种基于脂质的转染试剂，专门用于转染，确保没有RNAse活性，细胞毒性低。适用细胞广泛；可在含有抗生素的完全培养基中转染；即用型试剂，不必更换培养基，操作简便易行，重复性好，可在半小时内完成操作；介导miRNA高转染细胞和体内高效导入，即使在含血清培养基中也能表现高转染效率；4℃下可长期保存。1.SiMiTransfectionReagentsz低浓度条件下的miRNA转染，最大程度避免脱靶效应z难转染细胞适用zmiRNA模拟物和抑制剂的高效转染zmiRNA高效转染z在含血清培养基中也能表现高转染效率z适用细胞广泛；即用型试剂，可在含有抗生素的完全培养基中转染，操作格外简单方便简洁z可在室温下运输，在4℃下可长期保存参考目录册Z-012.DVExTransfectionReagentszDNA高效转染zDNA和miRNA/miRNA共转染的高效转染z易于操作的转染流程z无动物源成分z在含血清培养基中也能表现高转染效率z适用细胞广泛；即用型试剂，可在含有抗生素的完全培养基中转染，操作格外简单方便简洁z可在室温下运输，在4℃下可长期保存z功能基因组研究、高通量DNA转染、shRNA载体转染参考目录册Z-02上海艾博思生物技术有限公司ShanghaiIntegratedBiotechSolutionsCo.,Ltd.IBS—全面生物技术解决方案上海浦东张江高科技园紫薇路750弄10号202室，邮编：201203,电话：[phone]传真：[phone]E-mail:[e-mail],[e-mail],[e-mail]公司网址：Ⅱ.艾博思miRNAoligos产品特性A.哺乳动物miRNAmimics(模拟物)和inhibitors抑制物设计z艾博思生物专业的设计团队进行设计与合成zmiRNA模拟物是双链设计zmiRNA抑制物是单链的甲氧基修饰设计B.miRNAoligo技术数据与miRNA相关的一些技术数据及注意事项miRNAmimics模拟物1.miRNA模拟物的一般的平均分子量13,300。2.miRNAoligo的OD、nmol和质量间有相应的公式可以计算；一般情况下，对于一个21bp的miRNAoligo，有如下简单关系：1ODduplex＝3.0nmols＝40ug3.1OD的miRNA欲溶解为20uM的样品，可用150uLDEPCH2O去重悬1OD的miRNA，溶解后为20uM的样品。4.由于OligoRNA呈很轻的干膜状附在管壁上，打开时极易散失，所以打开管子前先离心，然后再慢慢打开管盖，溶解时请加足量DEPC水后盖上管盖，振荡溶解5.荧光标记的RNA，如FAM、HEX、TAMRA等标记的Oligo因为对光敏感，必须避光保存。miRNAinhibitors抑制物1.miRNAinhibitors(抑制物)的一般的平均分子量6,660。2.miRNAoligo的OD、nmol和质量间有相应的公式可以计算；一般情况下，对于一个21bp的miRNAoligo，有如下简单关系：1ODduplex＝5.0nmols＝33ug3.1OD的miRNA抑制物欲溶解为20uM的样品，可用250uLDEPCH2O去重悬1OD的miRNA，溶解后为20uM的样品。4.由于OligoRNA呈很轻的干膜状附在管壁上，打开时极易散失，所以打开管子前先离心，然后再慢慢打开管盖，溶解时请加足量DEPC水后盖上管盖，振荡溶解5.荧光标记的RNA，如FAM、HEX、TAMRA等标记的Oligo因为对光敏感，必须避光保存。C.上海艾博思miRNA产品特点上海艾博思拥miRNAoligo合成是在ISO9001质量标准及严格控制的流程和条件下完成的，确保了产品质量的高度稳定。化学合成miRNA有操作简便、转染效率高、对细胞的或者组织的毒副作用小、可大规模制备等优点，特别适用于基因靶位点不确定情况下，进行miRNA有效片段的筛选。化学修饰的miRNAOligo不仅增强了miRNA在血清、体内及细胞培养中的稳定性，同时也延长了miRNA的作用时间。上海艾博思生物技术有限公司ShanghaiIntegratedBiotechSolutionsCo.,Ltd.IBS—全面生物技术解决方案上海浦东张江高科技园紫薇路750弄10号202室，邮编：201203,电话：[phone]传真：[phone]E-mail:[e-mail],[e-mail],[e-mail]公司网址：合成是严格控制的流程和条件下完成的；在ISO9000质量标准下生产；产品经过分光光度计精确定量。纯化HPLC纯化；miRNA模拟物全长双链miRNA含量97%miRNA抑制物单链修饰miRNA含量97%标记和修饰在3'和5'末端标记生物素、荧光素和磷酸等更加方便监测miRNA的抑制特异基因表达的效果长度19～23碱基/链储存和稳定性建议在-20°C的环境中存贮，避免多次冷冻和化冻处理。保证在上述条件下寡核苷酸的稳定性可达到6个月，荧光标记的RNA必须避光保存。技术数据表技术数据表与miRNAoligo一同交付，包括名称、序列、浓度、OD和nmols的精确数量、纯化类型。个性服务按照客户要求分装；免费设计服务。Ⅳ.miRNA转染A．miRNA转染的方法哺乳动物转染的常见方法有：磷酸钙共沉淀、电穿孔法