用imagej进行WB定量分析

ImagJ是一款简单的图像处理与分析软件，可以用来进行WB定量分析。一、利用ImagJ对WB条带进行灰度分析1、File——》open打开WB片子2、把图片转化成灰度图片image——》type——》8-bit3、消除背景影响process——》subtractbackground选择50基本可以4、设置定量参数analyze——》setmeasurements，点击面积，平均密度和灰度值及IntegratedDensity5、设置单位analyze——》setscale，在“unitoflength”的方框里输入“pixels”6、把图片转换成亮带，Edit——》invert7、选择FreehandSelection，尽量把条带圈起来，点击键盘m，出来IntDen灰度值当测定完所有条带，选结果中的“Edit”的“SelectAll”，然后复制数据“IntDen”到Excel表即可进行分析8、复制数据IntDen进行分析二、利用ImagJ对WB条带进行密度分析1、File——》open打开WB片子2、如条带不正，需修正image——》transform——》rotate调节angle值，直到条带水平为止3、选中矩形选项，圈中第一个条带，然后analyze——》gels——》selectfirstlane（快捷键ctrl+1），然后移动第一个条带上的矩形到第二个条带上，analyze——》gels——》selectsecondlane（快捷键ctrl+2），最后analyze——》gels——》plotlanes4、选中直线工具，将开口的波峰关闭5、选中魔棒工具，点击波峰可以显示波峰下面积，即条带的密度值6、以第一个数值为基数，其他数值与第一个数值的比值为相对密度TheprotocolofimageJforquantitativeanalysisofWesternblotting:-openanimage-transfertheimageto8-bitsimage→type:8bits-Process→substractbackground50-analyze→setmeasurements:pickarea,meangrayvalue,integrateddensity.-analyze→setscale,fill“unitoflength”with“pixels”-switchtheimagetobrightbandsedit→invert-freehandselection,choosethetargetareaontheimage(e.g.aband),typea“m”formeasurement,thenwegettheresultfromanewwindow.-aftermeasuringallofthebands,pickthe“edit”oftheresultwindow.“selectall”,copytheintegrateddensityvaluestoexceltoanalyze.Theintegrateddensitymeansthattheareavaluemultipliesthemeangrayvalue.ForWesternblottinganalysistheintegrateddensityisveryimportant,becausetheareaandgrayvaluebothofthemhavemeaningforWesternblottingbands.