鸡感染REV和ALV-J后血清指标动态变化与生长抑制的关系

鸡感染REV和ALV-J后血清指标动态变化与生长抑制的关系朱国，刁秀国，成子强（山东农业大学动物科技学院山东泰安271018）摘要：首次研究REV和ALV-J感染及混合感染引起血清指标动态变化与鸡群体重抑制的关系。三组1日龄哈伯德父母代肉种鸡，分别接种禽网状内皮组织增生症病毒（REV）、禽J亚群白血病病毒（ALV-J）和REV与ALV-J。定期称量体重，采外周血，通过生化自动分析仪检测鸡血清内总蛋白（TP）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）、甘油三酯（TG）、胆固醇（CHO）的动态变化。结果表明：前7周，血清学指标TP、TG、LDL-c浓度变化与生长抑制的变化呈现相关性，随体重的增加，TP、TG、LDL-c浓度有上升的趋势，HDL-c、CHO浓度变化与体重的变化不存在相关性。这种结果表明了病毒引起鸡的病理变化，从而影响鸡的新陈代谢。生理功能的变化是影响鸡生长抑制的部分因素，肿瘤性病毒感染造成的生长抑制较早地体现在血清指标的变化上。因此，检测7周内的血清TP、TG、LDL-c浓度的动态变化与鸡群体重抑制的关系，可作为这两种肿瘤性疾病早期诊断的依据。关键词：网状内皮组织增生病病毒；J亚群白血病病毒；血清指标；生长抑制；禽网状内皮组织增生症是REV引起火鸡、鸡、鸭、鹅等禽类以淋巴——网状组织增生为特征的肿瘤性病理综合征[1，2]。除此之外，其最重要的特征就是引起鸡群严重的免疫抑制。J亚群白血病是由ALV-J引起的一种肿瘤性传染病，主要发生在肉种鸡[3]。本病可垂直传播，也可水平传播[4],传播迅速，死亡率可高达20％[5]。REV与ALV-J同属于反转录病毒，是目前已知能引起禽类肿瘤的三种病毒中的两种，关于ALV-J和REV引起生长抑制已有报道，但单独及混合感染生长抑制在血清学上的体现还未见报道。因此，本研究拟通过人工感染REV和ALV-J，定期检测体重和血清学指标，分析其相关性，找出与体重抑制密切相关的血清指标，为禽肿瘤性疾病的早期诊断提供依据。1材料和方法1.1试验鸡健康1日龄哈伯德父母代肉种鸡120只，购自潍坊昱合公司。采血，经免疫荧光试验检测ALV-J和REV为阴性。随机把鸡群分为3个实验组，1个对照组。严格隔离饲养，饲料中添加适量的维生素。1.2病毒及接种REV为SNV株（由山东农业大学崔治中教授惠赠），ALV-J为NX0101株（本实验室保存）。第1组于1日龄腹腔接种REV0.3ml，相当于103.31TCID50/只，第2组腹腔接种ALV-J0.2ml，相当于103.1TCID50/只,第3组同时腹腔接种REV与ALV-J，每只接种REV0.3ml、ALV-J0.2ml；第4组（对照组）注射生理盐水。严格隔离饲养，按正常免疫程序免疫，观察、记录临床表现。1.3血样与病料的采集分别于接种后1，3，5，7，9，11，13周称重、采血，1周颈收稿日期：基金项目：中华人民共和国博士后基金（2005038258）作者简介：朱国（1976－）山东阳谷县人，硕士研究生，研究方向为动物分子病理学*通讯作者：成子强（1971-），男，副教授，博士，硕士生导师。研究方向为动物分子病理,E-mail:[e-mail]静脉采血，之后翅静脉采血，自然状态下析出血清。取肝脏、肾脏、胰腺、肾上腺、胸腺、脾脏、法氏囊、肠等器官于中性福尔马林溶液中固定，石蜡包埋，常规切片，用于病理组织学观察。1.4检测利用抗原抗体反应检测HDL-c；保护法检测LDL-c；双缩脲法检测总蛋白；GK-GPO-PAP终点比色法检测甘油三酯；以HDAOS作为显色剂的酶法试剂检测CHO；全自动生化分析仪进行检测。1.5数据处理对所得数据用SPSS软件进行单因子方差分析，同时在单独感染组和对照组之间、单独感染组与混合感染组之间进行t检验，比较差异的显著性。2结果2.1感染病毒后对体重的影响感染病毒后对体重的影响05001000150020002500135791113周体重(g)REVALV-JREV+ALV-J对照组图1感染REV与ALV-J后对不同日龄鸡体重的影响2.2TP浓度的变化攻毒组TP的浓度前期变化较大。在1、3周体重还没有差异性时，血清蛋白已经出现明显的差异性，单独感染组和混合感染组与对照组比较差异极显著。7周后，攻毒组与对照组比较差异不显著，说明耐过的鸡血清TP逐渐恢复到正常值。表1鸡血清TP浓度（X±SD）（单位：g/L）注：REV组、ALV-J组和REV＋ALV-J组分别与混合感染组和对照组做比较。与对照同一日龄同列肩注a为差异显著(p0.05)，A为差异极显著(p0.01)。REV组与ALV-J组同混合感染组同一日龄同列肩注b为差异显著(p0.05)，B为差异极显著（p0.01），未标字母者差异不显著（p0.05）。X为平均数，SD为标准差。下同。2.3CHO浓度的变化整个实验期间，胆固醇含量的变化各组间差异不显著，第5周胆固醇含量最高，以后呈下降趋势，鸡耐过后胆固醇趋于稳定。攻毒后影响到机体胆固醇代谢，但差异不显著。攻毒后3周出现大的转折，可能是病毒对机体的影响造成的。组别1周3周5周7周9周11周13周1组14.76±2.05A13.42±1.15A23.60±1.10A24.76±1.10b22.86±0.9018.57±3.0928.83±2.12组12.30±1.15A12.83±1.10A25.56±0.98A22.36±2.44A21.56±3.1619.86±2.6029.33±3.863组15.10±0.17A11.66±2.84A21.20±2.33A20.06±0.80A23.82±0.1019.90±3.1425.16±6.394组22.53±2.9521.50±3.1432.86±5.3929.49±0.7026.73±2.4022.13±2.8928.16±1.81表2鸡血清CHO浓度（X±SD）（单位：mmol/L）组别1周3周5周7周9周11周13周1组2.73±0.241.54±0.153.40±0.853.21±0.172.24±0.081.63±0.131.63±0.132组2.46±0.301.74±0.403.67±0.383.47±0.192.52±0.231.62±0.351.62±0.123组3.03±0.511.91±0.413.02±0.513.53±0.062.22±0.011.71±0.271.67±0.184组3.15±0.672.02±0.143.91±0.523.45±0.192.76±0.582.10±0.182.10±0.182.4TG浓度的变化实验过程中，攻毒后血清TG在1、3、5周明显增高，攻毒组大于对照组的浓度，单独感染与混合感染比较差异不显著。5、7周呈现下降趋势，7周以后，各组间浓度变化差异不显著，出现交叉，呈平稳发展。表3鸡血清TG浓度（X±SD）（单位：mmol/L）组别1周3周5周7周9周11周13周1组0.32±0.030.27±0.01a0.21±0.02B0.18±0.030.18±0.010.16±0.030.25±0.022组0.34±0.030.29±0.02a0.34±0.05A0.19±0.060.23±0.050.15±0.010.40±0.01ab3组0.30±0.020.25±0.02a0.35±0.05A0.16±0.040.17±0.020.19±0.030.34±0.154组0.27±0.040.21±0.010.19±0.020.17±0.020.17±0.010.17±0.010.29±0.012.5HDL-c浓度的变化第5周，攻ALV-J组与混合感染组和对照组差异显著，REV组与对照组差异显著。总的来说攻毒组鸡血清中HDL-c的含量低于对照组。表4鸡血清HDL-c的浓度（X±SD）（单位：mmol/L）组别1周3周5周7周9周11周13周1组2.26±0.240.96±0.132.00±0.20a2.52±0.191.55±0.111.44±0.082.12±0.172组1.86±0.251.27±0.412.64±0.19ab2.29±0.201.66±0.361.54±0.192.18±0.273组2.46±0.091.32±0.112.02±0.242.44±0.111.64±0.121.30±0.222.14±0.224组2.54±0.061.52±0.093.16±0.512.74±0.061.59±0.281.55±0.182.22±0.132.6LDL-c的含量变化前7周，感染组的比对照组高，差异极显著，虽然9~13周感染组浓度也较对照组高，但差异已不显著。单独感染组和混合感染组也出现极显著差异性。由此看来，可能疾病对LDL-c的影响更大。表5鸡血清LDL-c的浓度（X±SD）（单位：mmol/L）组别1周3周5周7周9周11周13周1组0.58±0.01Ab0.39±0.11AB0.71±0.20A0.84±0.09Ab0.50±0.030.45±0.110.56±0.032组0.40±0.09B0.37±0.02aB0.96±0.17AB0.84±0.09Ab0.52±0.260.37±0.020.55±0.183组0.65±0.06A0.63±0.08A0.61±0.02a0.92±0.09A0.49±0.050.66±0.140.64±0.094组0.41±0.010.28±0.060.56±0.040.69±0.010.50±0.060.40±0.050.57±0.082.7器官病变与组织切片的观察剖检可见：肝脏肿大，部分有肿瘤结节，显微镜下多数肝内出现增生的淋巴细胞，肝细胞坏死较严重，中央静脉周围充满大量的炎性细胞，血管内充满红细胞，部分血管血栓。肠道90％以上变薄，弥漫型出血，肠粘膜脱落，显微镜下多有淋巴细胞浸润。胰腺出血，由乳白色变为粉红色，显微镜下腺细胞呈片状坏死。肾上腺眼观病变不明显，镜下可见淋巴细胞呈灶性增生，腺细胞呈片状坏死。肾脏肿胀、苍白，显微镜下可见肾小球萎缩，部分崩解；肾小管上皮细胞肿胀、核碎裂、细胞崩解，只剩基底膜。肾小管间质增宽。3讨论对于REV与ALV-J，鸡群单独感染和混合感染都能引起生长抑制[6]。目前鸡群多存在二重感染或多重感染，特设单独感染与混合感染做比较。本实验中1～7周，攻毒组TP与LDL-c浓度相对于对照组差异极显著，攻毒组间差异不显著。但TP浓度在3、5、7周混合感染组偏低于单独感染组。TG的浓度攻毒组与对照组在3、5周时差异显著。HLD-c、CHO整个过程差异不显著。因此，1～7周，TP、TG、LDL-c浓度变化与体重抑制存在相关性，随着体重的增加TP、TG、LDL-c浓度有上升的趋势。TP、TG、LDL-c可以作为临床检测的一个指标，是病毒对鸡的生长抑制最早体现。而HDL-c、CHO不具有临床价值。混合感染组与单独感染的体重和血清变化没有明显差异性，不能作为鉴别诊断的依据。血清中蛋白的含量降低，主要是因为攻毒后鸡食欲降低，摄入的碳水化合物和蛋白质不足。又由于肝细胞坏死较严重，同时肠粘膜脱落，致使消化功能紊乱，致使机体合成与吸收作用减弱，造成血液总蛋白含量下降。攻毒组的免疫器官重量明显低于对照组，IgG的含量生成减少，也是造成总蛋白下降的原因[6，7]。胰岛素可以促进氨基酸进入细胞，从而促进蛋白质合成，攻毒鸡胰腺腺细胞呈片状坏死，胰岛素分泌减少，也降低了蛋白质合成。HDL由肝和肠合成与分泌，与TG浓度成反比，它的下降造成血浆内TG的上升[8]。LDL是许多组织吸收胆固醇酯和胆固醇的中介体，LDL-c的升高，促进血清内胆固醇减少，引起血清内胆固醇含量降低。胆固醇是体内所有其他类固醇的前体，例如皮质类固醇、性激素和维生素D的前体[8]。肝与肠的炎症性变化，使胆固醇合成的量减少。胆固醇在血清中含量的降低，将影响上诉激素在体内的产生，抑制鸡的生长与性成熟，从而对鸡的体重有抑制作用。本实验从临床早期诊断的角