醋五味子检验方法验证方案

醋五味子检验方法验证方案一、简介醋五味子取净五味子，照醋蒸法蒸至黑色，用时捣碎。主要用于肺虚久咳，肺热痰嗽，久泻久痢，自汗盗汗，消渴，便血痔血，外伤出血，痈肿疮毒，皮肤湿烂。二、验证目的：醋五味子检验质量标准收载在《中国药典》2010版一部P61,为保证生产出的成品符合检验标准的要求,确认该检测方法是否适用于本公司生产的成品检验。现对质量标准分析方法进行验证，确保检验结果的准确可靠。三、验证范围①、鉴别②、含量测定四、验证小组成员及职责4.1验证小组成员4.2人员职责表1：五、验证实施步骤1、为了确保验证数据的准确可靠，采取以下几个先行保障措施1.1仪器：己经过校正并在有效期内1.2人员：均经过培训，熟悉方法及使用的仪器1.3对照品：均购自江苏省药品检验所1.4材料：均符合检验要求1.5参考资料：《中国药典》2010年版一部《药品生产验证指南》(2003版)2、鉴别人员职责验证小组组长组织相关的验证培训；负责起草验证方案、组织项目的具体验证、督促验证小组成员按照验证方案的要求做好验证记录；起草并完成验证报告，对整个验证项目负责。验证小组成员按照方案实施验证、并做好记录、意外情况及时汇报和记录、协助起草验证方案和报告。2.1试验A：取本品粉末lg，加三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材lg，同法制成对照药材溶液。再取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254，薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颇色的斑点。2.2试验B：取三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。取试验A下的对照药材溶液及对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254，薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。2.3检测结果:表2检验结果结果判断试验A试验B检测人:检测日期:2.4验证标准:试验A供试品溶液在与对照药材溶液及对照品溶液相同的位置显相同颜色的斑点。试验B供试品溶液在与对照品溶液相同的位置未显斑点。2.5检验结果评价3、含量测定照高效液相色谱法测定。仪器：LC-10AT液相色谱仪3.1专属性3.1.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇水(65：35)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。流速：1.0ml/min；色谱柱规格：4.6×250mm；粒度：5μm；进样量：10μl。3.1.2对照品溶液的制备：精密称取在五氧化二磷减压干燥器中存放过夜的五味子醇甲对照品约15mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为五味子醇甲对照品溶液。3.1.3供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约0.3g，置25ml量瓶中，加甲醇约20ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）20分钟，取出，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.1.4空白溶液的制备：直接取甲醇作为空白溶液。3.1.5将结果填入下表。表3含量测定专属性试验表保留时间供试品溶液对照品溶液空白溶液检测人：检测日期：3.1.6验证标准：供试品溶液中应呈现与五味子醇甲对照品保留时间相同的色谱峰；空白溶液中在这点应无色谱峰。3.1.7结果评价3.2线性及线性范围3.2.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(65：35)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。流速：1.0ml/min；色谱柱规格：4.6×250mm；粒度：5μm；进样量：10μl。3.2.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下的对照品溶液作为对照品溶液。3.2.3标准曲线的制备：分别吸取3.2.2项下对照品溶液0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml、2.0ml置5个2ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成分别约含五味子醇甲0.06mg/ml、0.12mg/ml、0.18mg/ml、0.24mg/ml、0.30mg/ml的溶液。3.2.4以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。将结果填入下表。表4五味子醇甲不同浓度的峰面积浓度（mg/ml）峰面积（μv*sec）回归方程相关系数检测人：检测日期：3.2.5结果评价3.3准确度3.3.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇水(65：35)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。流速：1.0ml/min；色谱柱规格：4.6×250mm；粒度：5μm；进样量：10μl。3.3.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。3.3.3供试品溶液的制备：取3.1.3项下的供试品溶液，作含量测定用。3.3.4取本品粉末（过三号筛）约0.15g，置25ml量瓶中，共称九份。3.3.4.1三份中分别加3.3.2项下的对照品溶液2.5ml，置25ml量瓶中，加甲醇约20ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）20分钟，取出，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.3.4.2三份中分别加3.3.2项下的对照品溶液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇约20ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）20分钟，取出，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.3.4.3三份中分别加3.3.2项下的对照品溶液7.5ml，置25ml量瓶中，加甲醇约20ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）20分钟，取出，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.3.5计算式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值；AT为对照品峰面积；单位μv*sec；nＴ为供试品的稀释倍数；WT为供试品的称量；单位g。3.3.6计算结果填入下表：表5含量测定五味子醇甲加样回收率试验表序号样品称量（g）样品中五味子醇甲的含量（mg）对照品加入量（mg）实测值（mg）回收率（%）回收率的平均值（％）RSD（%）123TTTTTWAfWnAfgmg25)/(实测值%100%加入对照品量供试品所含被测成分量实测值回收率456789检测人：检测日期：3.3.7结果评价3.4精密度3.4.1重复性（设操作人员A）3.4.1.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇水(65：35)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。流速：1.0ml/min；色谱柱规格：4.6×250mm；粒度：5μm；进样量：10μl。3.4.1.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。3.4.1.3供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约0.3g，共称六份，分别置25ml量瓶中，加甲醇约20ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）20分钟，取出，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.4.1.4计算式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值；AT为对照品峰面积；单位μv*sec；nＴ为供试品的稀释倍数；WT为供试品的称量；单位g。3.4.1.5将计算的结果填入下表表6含量测定五味子醇甲重复性试验表序号样品称量（g）含量（g/g）含量的平均值（g/g）RSD（%）12TTTTTWAfWnAfgmg25)/(含量3456检测人：检测日期：3.4.1.6结果评价3.4.2中间精密度（换一时间，换一操作人员，设操作人员为B）3.4.2.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇水(65：35)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。流速：1.0ml/min；色谱柱规格：4.6×250mm；粒度：5μm；进样量：10μl。3.4.2.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。3.4.2.3供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约0.3g，共称六份，分别置25ml量瓶中，加甲醇约20ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）20分钟，取出，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.4.2.4计算式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值；AT为对照品峰面积；单位μv*sec；nＴ为供试品的稀释倍数；WT为供试品的称量；单位g。3.4.2.5将计算的结果填入下表表7：含量测定五味子醇甲中间精密度试验表序号样品称量（g）含量（g/g）含量的平均值（g/g）RSD（%）操作员A123456TTTTTWAfWnAfgmg25)/(含量操作员B123456检测人：检测日期：3.4.2.6结果评价3.5耐用性3.5.1以流动相的组成比例、同一规格的色谱柱为变动因素，得出测定结果不受影响的程度，为使方法用于常规检验提供依据。3.5.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。3.5.3供试品溶液的制备：取3.3.3项下供试品溶液作为供试品溶液。3.5.4色谱条件1：以甲醇水(65：35)为流动相，C18，检测波长为250nm，流速：1.0ml/min；色谱柱规格：4.6×250mm；粒度：5μm；进样量：10μl。3.5.5色谱条件2：流动相组分比例改变，其他条件不变。⑴以甲醇水(70：30)为流动相，C18，检测波长为250nm，流速：1.0ml/min；色谱柱规格：4.6×250mm；粒度：5μm；进样量：10μl。⑵以甲醇水(60：40)为流动相，C18，检测波长为250nm，流速：1.0ml/min；色谱柱规格：4.6×250mm；粒度：5μm；进样量：10μl。3.5.6将数据整理，填入下表。表8含量测定耐用性试验表保留时间分离度理论板数色谱条件1色谱条件2⑴⑵检测人：检测日期：3.5.7结果评价六、验证的结果评价及建议七、再验证周期：质量部门根据验证结果确定再验证周期