金黄葡萄球菌的检验

食品中金黄色葡萄球菌检验•金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气，土壤，水及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌素引起的食物中毒占整个世界性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。经典案例•广东牛奶受金黄色葡萄球菌污染珠海市政府新闻办昨晚向媒体公布导致过百幼儿食物中毒的最新调查结果,引起公众普遍关注的维维高钙牛奶饮品污染原因终于查明。3月26日下午,珠海市3家幼儿园119名学生陆续出现以呕吐为主的胃肠道症状,爆发集体食物中毒(详见本报3月28、29日的报道)。据调查,患儿因饮用了受金黄色葡萄球菌污染的珠海维维大亨乳业有限公司生产的高钙牛奶饮品(生产日期:2008/03/26；150ml杯装型)而引起食物中毒。该批次的高钙牛奶饮品因在加配料环节受到金黄色葡萄球菌污染且未经有效净化消毒导致被污染。据广东省食品安全委员会办公室官方网站披露,截至3月28日上午10时,珠海、江门两市共发现疑似食物中毒患者152例(其中珠海市119例,江门33例),其他市未发现疑似患者。•金黄色葡萄球菌的流行病学有如下特点：多见于春夏季；中毒食品以奶，肉，蛋，鱼，剩饭，油煎蛋，糯米糕及凉粉最为常见。上呼吸道感染者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位常为污染源。•一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员，炊事员或销售员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓，对肉体其他部位的污染等。金黄色葡萄球菌毒素•金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F五种血清型。肠毒素可耐受100°C煮沸30分钟而不被破坏。它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。如何预防？•①防止金黄色葡萄球菌污染食品防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进行健康检查，患局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗位。对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。②防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻底加热。有金黄色葡萄球菌感染者，可选用：红霉素、新型青霉素、庆大霉素、万古霉素或先锋霉素Ⅵ治疗。一、生物学特性典型的金黄色葡萄球菌为球形，直径0.5—1微米左右，显微镜下排列成葡萄串状。无芽孢，鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。它对营养要求不高，需氧或兼性厌氧，最适在37度PH7.4生长。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%--15%Nacl肉汤中生长。可分解葡萄糖，麦芽糖，乳糖，蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素，红霉素等高度敏感。金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎，胃肠炎，心包炎等，甚至败血症，脓毒症等全身感染。它的致病力强弱主要取决于其产生的毒素如溶血毒素，杀白细胞素，肠毒素和侵袭性酶如血浆凝固酶，脱氧核糖核酸酶。革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0μm，成对或成短链状排列，或呈葡萄状聚集，无芽孢，无鞭毛食品中金黄色葡萄球菌的检出主要应用细菌检验技术，首先将检样进行涂片镜检，如发现有典型的金黄色葡萄球菌存在，便可初步判断检样中金黄色葡萄球菌存在。但有时因检样中的菌落太少，或不为典型的葡萄状，因此，需进行培养分离再进行鉴定。有时也可把检样接种到葡萄糖肉汤培养基中，30摄氏度增菌培养24—48小时再进行涂片镜检。规范的检验金黄色葡萄球菌的国家标准方法是直接计数法和增菌培养法。二、检验所需器材•金黄色葡萄球菌检验的器材主要有胰酪胨大豆汤，7.5%氯化钠肉汤，血琼脂平板，Baird-Parker琼脂平板，肉浸夜肉汤，灭菌盐水，兔血浆及显微镜，培养箱，离心机1ml和10ml灭菌吸管，灭菌试管，灭菌平皿，均质器，载玻片，L形布棒，酒精，接种环等。三、检验程序•检样•25g(ml)+225ml灭菌生理盐水直接计数方法Baird-Parker平板0.3ml,0.3ml,0.4ml血平板增菌培养方法7.5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆汤血平板，Baird-Parker平板观察溶血涂片染色血浆凝固酶试验报告四、操作方法•1.增菌培养法•（1）检样处理无菌操作称取25g检样，加入到盛有225ml灭菌生理盐水的灭菌溶液内，制成1：10检样混悬液。•（2）增菌培养吸取5ml的1：10检样混悬液，接种于50ml的7.5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆汤培养基内，置36℃培养箱内培养24小时。•（3）分离培养用接种环从有细菌生长的增菌培养基中取菌一环，划线接种于血平板和Baird-Parker平板，36℃培养24小时。•（4）观察菌落形态观察血平板和Baird-Parker平板上可疑食品中金黄色葡萄球菌形态。•（5）革兰氏染色挑取血平板和Baird-Parker平板可疑食品中金黄色葡萄球菌落进行革兰氏染色镜检。•（6）血浆凝固酶试验挑取可疑食品中金黄色葡萄球菌接种到葡萄糖肉汤培养基内，36℃培养24小时。吸取1：4新鲜兔血浆0.5ml,放入小试管中，再加培养24小时的金黄色葡萄球菌肉浸液培养物0.5ml,震荡摇匀，放36℃温箱内，每30min观察一次，观察6h，呈凝块则为阳性结果。•2。直接计数方法•（1）检样处理同“增菌培养法”。•（2）样品稀释吸取上述1：10混悬液，进行10倍递增稀释。•（3）分离接种根据样品污染情况，选择适宜浓度的稀释液1ml，分别加入三个Baird-Parker平板，每个平板接种量分别为0.3，0.3，0.4ml.然后用灭菌L棒涂布整个平板。如水分不易吸收，可将平板在36℃温箱1小时，等水分蒸发后反转平皿置36℃温箱培养。•（4）菌落计数在三个平板上将周围有混浊带的黑色菌落计数。•（5）接种血平板任选5个菌落，分别接种血平板，36℃培养24小时后进行革兰氏染色镜检。•（6）血浆凝血酶试验步骤同增菌培养法。•（7）报告将三个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数相加，乘以血浆凝血酶阳性数，除以5，再乘以稀释倍数，即可求出每克样品中金黄色葡萄球菌数。谢谢观看