药物定量分析实验设计--测定头孢拉丁含量

药物定量分析实验设计实验选用样品为头孢拉定，方法为高效液相色谱法。一、实验目的1．掌握药物结构与分析方法之间的关系；2．掌握常用分析方法的基本操作与药物含量计算。3．熟悉专业文献资料的查阅；4．了解药品分析工作的全过程和如何根据文献资料进行实验设计。二、实验原理实验选择头孢拉定作为样品，以高效液相色谱法测定其含量。高效液相色谱法(HighperformanceLiquidChromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(HighPressureLiquidChromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(HighSpeedLiquidChromatography，HSLP)。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。近年来，在保健食品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分离测定等应用广泛。世界上约有80%的有机化合物可以用HPLC来分析测定。[1]头孢拉定（Cephradine,Velosef）别名：先锋霉素Ⅵ、头孢菌素Ⅵ等。临床主要用于呼吸道、泌尿道、皮肤和软组织等的感染，如支气管炎、肺炎、肾盂肾炎，膀胱炎，耳鼻咽喉感染、肠炎及痢疾等。适用于敏感菌所致的急性咽炎、扁桃体炎、中耳炎、支气管炎和肺炎等呼吸道感染、泌尿生殖道感染及皮肤软组织感染等，为口服制剂，不宜用于严重感染。该品为白色或类白色结晶性粉末；微臭。该品在水中略溶，在乙醇、氯仿、乙醚中几乎不溶。比旋度取该品，精密称定，加醋酸盐缓冲液（取醋酸钠1.36g，加水约50ml溶解，用冰醋酸调节PH值至4.6，加水稀释至100ml）溶解并制成每1ml中含10mg的溶液。依法测定，比旋度为80度至90度。文献报道的测定方法有高效液相色谱法,荧光法,电化学分析法,分光光度法,流动注射-化学发光法等。目前对头孢拉定的定量分析多采用高效液相色谱法，在伯大为等报道的方法中，采用高效液相色谱法测定头孢拉定胶囊中头孢拉定的含量，色谱采用ShimadzuVP-ODSC-s柱（250mm×4.6mm，5mm），以水-乙腈-0.1mol／L磷酸二氢铵（1︰2︰2）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为215nm。结果显示头孢拉定胶囊质量浓度在0.02574～1.0296g/L范围内与峰面积线性关系良好（r=0.9997），平均回收率为99.9%，RSD=0.7%（rl=7），两批样品的40min溶出度均在70％以上。该方法快速、简便、准确、可靠，重现性好，且不易受外界因素影响，减少了头孢氨苄对测定结果的影响。可用于头孢拉定胶囊溶出度的测定。本次实验采用高效液相色谱法检测样品中的头孢拉定含量。参考倪伯大为等报道的文献，色谱柱：ShimadzuVP-ODSC18柱（250mm×4.6mm，5mm）；流动相：水-4％醋酸溶液-3.86％醋酸钠-甲醇（1564︰6︰30︰400）；流速：1.0ml／min；检测波长：254nm；进样量：20μl。外标法定量。本法操作简便、结果准确，可用于头孢拉定的质量控制。三、实验仪器高效液相色谱仪，电子分析天平，头孢拉定对照品，头孢拉定，醋酸钠，冰醋酸，蒸馏水。四、实验方法一、溶液的制备1、溶出条件溶剂：以醋酸盐缓冲液（pH5.5）（取0.04mol/L醋酸钠溶液，用冰醋酸调节pH为5.5）900ml；转速：100r/min；取样时间：45min。2、标准品溶液：精密称取头孢拉定对照品适量（约相当于头孢拉定27mg），置100ml量瓶中，加醋酸盐缓冲液（pH5.5）超声溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。3、样品溶液。精密称取头孢拉定样品适量（约相当于头孢拉定27mg），置100ml量瓶中，加醋酸盐缓冲液（pH5.5）超声溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。二、标准曲线精密称取头孢拉定对照品0.02574g，置25ml量瓶中，加流动相至刻度，取0.25ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml，分别置10ml量瓶中，加流动相稀释到刻度，摇匀，分别精密吸取上述溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱，以峰面积对标准品浓度进行线性回归,得到标准曲线。三、进样精密吸取标准品溶液、样品溶液各20μL进样，测定头孢拉定的峰面积，用紫外吸收检测器于254nm处检测，记录色谱图，并按外标法计算含量。重复一次。五、注意事项1、经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50~75ml。2、选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。参考文献：[1]高效液相色谱原理和操作详解[2]俞永进.浅谈溶出度自身对照法的优劣[J].中国药事,2000,14（1）:46[3]谢元超,李军,刘琦,等.头孢氨苄片溶出度的测定[J].中国药品标准,2002,3（6）:60[4]柏大为，钱桂英,等.头高效液相色谱法测定头孢拉定胶囊的溶出度[J].首都医药,2011-10-15[5]曾慧,刘学斌.HPLC法同时测定头孢拉定和精氨酸含量[J].药物分析,1999,19(1):27-30.[6]杨梅,张文伟,周红丹,等.荧光法快速分析胶囊中头孢拉定含量[J].分析实验室,2000,19(1):66-68.[7]曾泳淮,马红艳.头孢拉定的电化学行为[J].分析化学,1997,25(9):1006-1009.[8]吴美珍,娄小娥,田秀华.紫外分光光度法测定注射用头孢拉定含量[J].中国抗生素,2001,26(3):226-229.[9]范顺利,吕超,周庆祥,等.流动注射-化学发光法测定头孢拉定[J].分析化学,2001,29(3):367.