贝诺酯质量标准的研究

贝诺酯质量标准指定的研究贝诺酯（C17H15NO5313.31），即4-乙酰胺苯基乙酰水杨酸酯。按干燥品计算，含C17H15NO5应为99.0％～102.0%。结构：【性状】本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭无味。本品在沸乙醇中易溶，在沸甲醇中溶解，在甲醇或乙醇中微溶，在水中不溶，熔点为177～181℃。【鉴别】(1)三氯化铁反应:取本品约0.2g，加氢氧化钠试液5ml；煮沸，放冷，滤过，滤液加盐酸适量至显微酸性，加三氯化铁试液2滴，即显紫堇色。(2)芳香第一胺的反应：取本品约0.1g，加稀盐酸5ml，煮沸，放冷，滤过，滤液加0.1mol/L的NaNO2数滴，再加碱性β-奈酚试液数滴，显橙黄至猩红色沉淀。(3)UV检测：取含量测定项下的溶液，照分光光度法（附录ⅣA）测定，在240nm的波长处有最大吸收，在240nm的波长处测定吸收度，按干燥品计算，吸收系数（Ｅ1％1cm）为730～760。【检查】（1）氯化物取本品2.0g，加水100ml，加热煮沸后，放冷，加水至100ml，摇匀，滤过，取滤液25ml，依法检查（附录ⅧA），与标准氯化钠溶液5ml制成的对照液的比较，不得更浓（0.01％）。（2）硫酸盐取氯化物项下剩余的滤液25ml，依法检查（附录ⅧB），与标准硫酸钾溶液1ml制成的对照液比较，不得更浓（0.02％）。（3）对氨基酚取本品1.0g，加甲醇溶液(1→2)20ml，搅匀，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1ml，摇匀，放置30分钟，不得显蓝绿色。（4）游离水杨酸取本品0.1g，加乙醇5ml，加热溶解后，加水适量，摇匀，滤入50ml比色管中，加水适量使成50ml，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液（取1mol/L盐酸溶液1ml,加硫酸铁铵指示液2ml，再加水适量使成100ml）1ml，摇匀，30秒钟内如显色，与对照液（精密称取水杨酸0.1g，置1000ml量瓶中，加水溶解后，加冰醋酸1ml，摇匀，再加水适量至刻度，摇匀，精密量取1ml，加乙醇5ml与水44ml，再加上述新制的稀硫酸铁铵溶液1ml，摇匀）比较，不得更深(0.1％)。（5）干燥失重取本品1.0g，置与供试品相同条件下干燥至恒重的扁形称量瓶中，精密称定。在105℃干燥至恒重，减失重量不得过0.5％（应平铺在扁形称量瓶中，厚度不可超过5mm，如为疏松物质，厚度不可超过10mm。放入烘箱或干燥器进行干燥时，应将瓶盖取下，置称量瓶旁，或将瓶盖半开进行干燥；取出时，须将称量瓶盖好。置烘箱内干燥的供试品，应在干燥后取出置干燥器中放冷，然后称定重量）。（6）炽灼残渣取本品1.0g，置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5~1.0ml使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，在500~600℃炽灼使完全灰化，移至干燥器内放冷，精密称定后，再在500~600℃炽灼至恒重既得。遗留残渣不得过0.1％。（需残渣进行重金属检查，温度控制在500~600℃）（7）重金属取（6）的炽灼残渣，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨试液至对酚酞指示液显微粉红色，再加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，微热溶液后，移置纳氏比色管中，加水稀释成25ml；另取配置供试品溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml与水15ml，微热溶液后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液2.5ml，再用水稀释成25ml，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，供试管中显出的颜色与标准管中比较，不得更深标准铅溶液的制备称取硝酸铅0.1599g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml与50ml溶液后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得，当日使用（每1ml相当于10μg的Pb）。（8）有关物质取本品适量，加甲醇溶解并制成每1ml中含0.4mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液（临用前配制）；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。另取对乙酰氨基酚对照品适量，用甲醇配制成每1ml中含0.01mg的溶液，作为对乙酰氨基酚对照品溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10％～20%；再精密量取对乙酰氨基酚对照品溶液，供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍，供试品溶液的色谱图中如显杂质峰（溶剂峰除外），与对乙酰氨基酚保留时间一致的峰，其峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1/10(0.1%),其余单个杂质峰面积均不得大于对照溶液主峰面积的1/2(0.5%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（1.0%）。【含量测定】1．高效液相色谱法1.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－水（用磷酸调pH为3.5）（56：44）为流动相；检测波长为240nm。理论板数按贝诺酯峰计算不低于3000，贝诺酯与相邻杂质峰分离度大于1.5。测定法取本品适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.4mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取贝诺酯对照品适量，精密称定，用甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.4mg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。1.2对照品溶液的制备精密称取贝诺酯对照品50mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇约70ml，超声10rain使其溶解，用无水乙醇稀释至刻度。摇匀。得对照品贮备液。精密量取对照品贮备液5ml，置50ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度．摇匀，即得对照品溶液。1.3供试品溶液的制备取供试品0.1g，置于100ml量瓶中，加无水乙醇约70ml，超声10min使其溶解，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀．滤过．精密量取续滤液5m1，置100ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。1.4标准曲线的绘制精密量取对照品贮备液1、3、5、7、9、11m1分别置50ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，分别进样10ul，测定色谱峰面积。以对照品进样量(ug)为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方程，要求相关系数≥0.99981.5精密度试验取供试品溶液10u1，连续进样6次，按上述色谱条件测定色谱峰峰面积，计算RSD，要求RSD≤2.5%。1.6准确度试验取对照品溶液10ul进样，且连续进样5次，根据峰面积计算含量，并计算回收率。要求准确度在98.0%-102.0%之间。参考文献1．中国药典2010版2．药物分析第六版刘文英主编3．高效液相色谱法测定贝诺酯颗粒的含量张涛中国医药导报药品鉴定2009年9月第6卷第26期