苯并芘检测

苯并芘1.高压液相色谱法1.1范围本标准规定了用高压液相色谱法测定生活饮用水及其水源水中的苯并芘本法适用于生活饮用水及其水源水中苯并芘的测定本法最低检测质量为0.07ng，若取500mL水样测定，本法最低检测质量浓度为1.4ng/L1.2原理水中苯并芘及其他芳烃能被环己烷萃取，萃取液经活性氧化铝吸附净化，以苯洗脱、浓缩后，可用液相色谱—荧光检测器定量1.3试剂和材料所用试剂和材料应进行空白试验，即通过全部操作过程，证明无干扰物质存在。所有试剂使用前均应采用0.45um过滤膜过滤。1.3.1活性氧化铝：取250g100目到200目层析用中性氧化铝于140℃活化4h，冷却后装瓶，储于干燥器内，备用。1.3.2盐酸溶液（1+19）：取5ml盐酸（ρ20=1.19g/ml），加至95ml纯水中，混匀。1.3.3玻璃棉：用盐酸溶液（1.3.2）浸泡过夜，然后用纯水洗至中性。用氢氧化钠溶液（1.3.10）浸泡过夜，再以纯水洗至中性，于105℃烘干备用。1.3.4甲醇：HPLC级。1.3.5超纯水：电阻率大于18.0MΩ1.3.6活性炭：取50g（20目~40目）活性炭用盐酸溶液（1.3.2）浸泡过夜，用纯水洗至中性，于105℃烘干。再用环己烷（1.3.7）浸泡过夜，滤干后在氮气流下于400℃活化4h，冷后储于磨口瓶中备用。1.3.7环己烷：通过活性炭层析柱后重蒸馏，取此环己烷70ml浓缩至1ml，浓缩液必须测不出苯并芘的存在，方可使用。1.3.8苯：重蒸馏1.3.9无水硫酸钠：400℃烘烤4h，冷却后储于磨口瓶中备用。1.3.10氢氧化钠溶液：称取5g氢氧化钠，用纯水溶解，并稀释至100ml。1.4仪器1.4.1高压液相色谱仪：1.4.1.1.荧光检测器。1.4.1.2记录仪。1.4.1.3色谱柱。A色谱柱类型:不锈钢柱，长150mm，内径3.9mmB填充物：用SpherisorbC18（5um）1.4.2微量注射器：25uL，针头锥度为90度1.4.3分液漏斗：1000mL1.4.4KD浓缩器1.4.5层析柱：玻璃柱，内径5mm，长10cm1.5样品1.5.1样品的稳定性苯并芘在水中不稳定，易分解。1.5.2水样采集储存方法在采样点采取水样时，水样应完全注满，不留有空气。采集水源水水样时，应将水样瓶（棕色瓶）浸入水面下再进行采样，以防表层水的污染。采集自来水水样做苯并芘分析，应在水龙头消毒之前采集，并在每升水样中加入0.5mL硫代硫酸钠溶液（100g/L）并混匀，以除去游离余氯。试样应放置暗处并尽快在采样后24h内进行萃取。萃取液在冰箱内可保存1w。1.5.3水样的预处理（须在暗室内，有微弱黄光下操作）1.5.3.1水样的萃取：取500ml均匀水样置于1000ml分液漏斗中，用70mL环己烷（1.3.7）分三次萃取（30mL，20mL和20mL），每次振摇5min，注意放气。放置15min，分出环己烷萃取液，合并三次萃取液于250mL具塞锥形瓶中，加入5g~10g无水硫酸钠（1.3.9）脱水。1.5.3.2萃取液的净化：A装氧化铝柱：将活性氧化铝（1.3.1）在不断振动下装入层析柱中，柱底部装有少许处理过的玻璃棉（1.3.3），氧化铝的高度为5cm~7cm,上面再装1cm~2cm高的无水硫酸钠（1.3.9），用少量环己烷（1.3.7）湿润，不得有气泡。B柱层析：将1.5.3.1中的环己烷萃取液注入氧化铝柱上，锥形瓶残存的无水硫酸钠用20mL环己烷（1.3.7）分次洗涤，洗涤液过柱。用10mL苯（1.3.8）洗氧化铝柱，收集苯洗脱液。1.5.3.3样品浓缩：将苯洗脱液（1.5.3.2.B）置KD浓缩器内，于60℃~70℃水浴中减压浓缩至0.1mL。1.6分析步骤1.6.1仪器的调整1.6.1.1柱温：30℃1.6.1.2流动相：甲醇+水（9+1）1.6.1.3流量：2mL/min1.6.1.4荧光检测器：Ex=303nm,Em=425nm1.6.1.5衰减：根据样品中被测组分含量调节记录器衰减。1.6.2校准1.6.2.1定量分析中的校准方法：外标法1.6.2.2标准样品A使用次数：每次分析样品时，用配置不超过1W的标准使用液绘制标准曲线B苯并芘标准储备溶液{ρ[B[a]P=100ug/mL}的制备：称取5mg苯并芘[简称B[a]P]，用少量苯溶解后，加环己烷定容至50mL。装入棕色瓶，储于冰箱内，可保存6个月。C苯并芘标准中间溶液{ρ[B[a]P=1ug/mL}的制备：吸取1mL苯并芘标准储备溶液（1.6.2.2.B）于100mL棕色容量瓶内，用环己烷（1.3.7）稀释。储于冰箱内，可保存1月。D苯并芘标准使用溶液：取5个10mL容量瓶，加入0、0.07、0.15、0.25、0.50mL苯并芘标准中间液（1.6.2.2.c），用环己烷稀释至刻度，苯并芘浓度分别为0、7、15、25和50ng/mL。1.6.2.3标准数据的表示：用标准曲线计算测定结果。各取10uL苯并芘标准使用溶液（1.6.2.2.D）注入色谱仪，记录色谱峰高。以峰高为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。1.6.3定量分析取10uL样品浓缩液（1.5.3.3）注入色谱仪，测量峰高。从标准曲线上查出水样苯并芘的含量。1.7计算水样中苯并芘的质量浓度计算式见式（2）VVPaB1000]][[11ρρ……………………（2）式中：ρ[B[a]P]——水样中苯并芘的质量浓度，单位为纳克每升（ng/L）ρ1——相当于标准曲线标准的苯并芘质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）V1——萃取液浓缩后的体积，单位为毫升（mL）V——谁氧体积，单位为毫升（mL）1.8精密度和准确度4个实验室重复测定加标水样，低浓度平均回收率为89.2%；相对标准偏差为4.1%；高浓度平均回收率为92.3%；相对标准偏差为4.5%。2.纸层析—荧光分光光度法