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1多功能酶标仪基本操作规程一、可见与紫外光原始吸光值的直接测定方法1、首先打开连接酶标仪的电插板上的全部开关。打开酶标仪主机背面电源线上端的开关。2、再打开电脑开关。(注意,一定要先开仪器,后开电脑,以免仪器连接出现问题。)3、在电脑主屏幕上选择[Magellan6]。4、仪器自检后,酶标板托架自动伸出(注意仪器前部不要放置物品,以免档住托架的伸出)。将酶标板按数字正确的方向(A1位于左上角)放在托架上。5、点击仪器下部最右侧的[moveplatein]图标,酶标板将自动进入仪器中。(注意:千万不要用手将酶标板推入仪器,造成仪器损坏)。6、在屏幕上选Startmeasurement。点击绿色箭头。7、在SelectaFile窗口左上角选ObtainRawDate然后点击绿色箭头。8、在plate栏中的platedefinition下拉条中,对板的类型进行选择。酶标的吸光度测定,一般情况下选xxxxxxxFlatTransparent(x孔,平底,透明板)。(注意测定紫外吸收时要使用可以透过紫外光的透明板)如果板要加盖子,就要再选中Platewithcover。9、在Measurements栏内双击Absorbance,出现Absorbance的对话框。10、在Absorbance的对话框中:⑴在Wavelength栏中Measurement项输入测定波长值;Reference项,在需要扣除背景波长时选中并输入背景波长值。一般情况不选.⑵在Multiplereadperwell栏中对于吸光值的测定可不选⑶在Read栏中:Numberofflashes项一般选10;Settletime(使平静时间)项对于96或384孔板一般选0;对于其他孔数的板可考虑输入适当的值;孔数越少的板,Settletime设置时间要较长,以防止在测定过程中板移动距离大,对液面平稳的影响。⑷在Label栏中Name后输入你为此块板自定义的英文名;也可不设置。11、在Partofplate栏中,用鼠标左键拉框,选择要测定的样品孔(使待测定的样品孔变为黄色),(注意:待测孔只可横向或纵向连续选择,不可以被间断)。如果选择错误需要更改,不要做任何删除,只要再直接重新选择即可。点击本栏中的Detail对所选的样品孔进行确认后,点击OK,(如果选孔有错误,选择Cancel返回上页再重复以上操作。)12、点击OK后,箭头变绿,点击绿色箭头,在Measurement的workspace处输入(日、月、年-自定义文件名wsp)再点击Start,仪器开始自动测定。13、测定结束后,点击File选择print,直接打印测定参数与结果,或在最上方Edit选择CopytoExcel,然后打开下方出现的Excel表(显示为板式数据)并打印结果。14、关机,退出当前界面,点击左下角ExitMegellan回到主屏幕。关电脑,关仪器电源和插板电源。二、荧光值的直接测定方法1、首先打开连接酶标仪的电插板上的全部开关。打开酶标仪主机背面电源线上端的开关。2、再打开电脑开关。(注意,一定要先开仪器,后开电脑,以免仪器连接出现问题。)3、在电脑主屏幕上选择[Magellan6]。4、仪器自检后,酶标板托架自动伸出(注意仪器前部不要放置物品,以免档住托架的伸出)。将酶标板按数字正确的方向(A1位于左上角)放在托架上。5、点击仪器下部最右侧的[moveplatein]图标,酶标板将自动进入仪器中。(注意:千万不要用手将酶标板推入仪器,造成仪器损坏)。6、在屏幕上选Startmeasurement。点击绿色箭头。7、在SelectaFile窗口左上角选ObtainRawDate然后点击绿色箭头。8、在plate栏中的platedefinition下拉条中,对板的类型进行选择。荧光酶标的测定,一般情况下选xxxxxxxFlatblack(x孔,平底,黑板。6孔板测定时没有黑板可选,可选择6孔,平底,透明板)。2(注意在选择底部测定时模式时要选择底部透明的黑板)如果板要加盖子,就要再选中Platewithcover。9、在Measurements栏内双击FluorescenceIntensity,出现FluorescenceIntensity的对话框。10、在FluorescenceIntensity的对话框中:⑴在Wavelength栏中:Excitation项输入激发波长值;Emission项输入发射波长值⑵在Mode栏:根据被测物质的性质进行适当选择。Top为顶部测定,适合于透明均匀的液体的荧光测定Bottom为底部测定,适合于贴壁细胞类的荧光测定⑶在Integration栏:Logtime(滞后时间)除在做时间分辨荧光测定时需要选择,一般荧光测定时不选。Integrationtime(整体测定时间)一般在20~40µs范围内选择⑷在Multiplereadperwell栏:对于透明均匀的液体的荧光测定可不选。对于贴壁细胞类的荧光测定要选择。选择形式,参看栏目中的图形。⑸在Read栏中:Numberofflashes项一般可选3~5次;Settletime(使平静时间)项对于96或384孔板一般选0;对于其他孔数的板可考虑输入适当的值;孔数越少的板,Settletime设置时间要较长;以防止在测定过程中板移动距离大,对液面平稳的影响。⑹在Gain(增益)栏:根据实验要求的不同进行选择Manualgain(人工增益)项:要做多块板之间的数据比较时选择该项;固定一个合适的增益值,选择范围在1~225之间.Optimal(自动最佳)项:仪器根据实时测定时该板上的最强荧光值,自动给出合适的增益.一般在作单板内的数据比较时选择该项Calculatedformwell项:以一个孔内的阳性物荧光值为比较时,选择该项.在Label栏中Name后可输入你为此块板自定义的英文名;也可不设置。11、在Partofplate栏中,用鼠标左键拉框,选择要测定的样品孔(使待测定的样品孔变为黄色),(注意:待测孔只可横向或纵向连续选择,不可以被间断)。如果选择错误需要更改,不要做任何删除,只要再直接重新选择即可。点击本栏中的Detail对所选的样品孔进行确认后,点击OK,(如果选孔有错误,选择Cancel返回上页再重复以上操作。)12、点击OK后,箭头变绿,点击绿色箭头,在Measurement的workspace处输入(日、月、年-自定义文件名wsp)再点击Start,仪器开始自动测定。13、测定结束后,点击File选择print,直接打印测定参数与结果,或在最上方Edit选择CopytoExcel,然后打开下方出现的Excel表(显示为板式数据)并打印结果。14、关机,退出当前界面,点击左下角处ExitMegellan退回到电脑主屏幕。15、关电脑,关仪器电源和电插板电源。三、可见、紫外、荧光测定的标准曲线法1、开机:首先打开电插板上的全部开关。打开酶标仪主机背面电源线上端的开关。打开电脑开关。(注意,一定要先开仪器,后开电脑,以免仪器连接出现问题。)2、在电脑主屏幕上选择[Magellan6]。3、放酶标板:仪器自检后,酶标板托架自动伸出(注意仪器前部不要放置物品,以免档住托架的伸出)。将酶标板按数字正确的方向(A1位于左上角)放在托架上。点击仪器下部最右侧的[moveplatein]图标,酶标板将自动进入仪器中。(注意:千万不要用手将酶标板推入仪器,造成仪器损坏)。4、创建方法:4.1在屏幕上选。Create/editamethod点击绿色箭头,34.2选New然后点击绿色箭头。4.3选板型:在plate栏中的platedefinition下拉条中,①可见、紫外吸光度的酶标测定,一般情况下选xxxxxxxFlatTransparent(x孔,平底,透明板)。(注意测定紫外吸收时要使用可以透过紫外光的透明板)如果板要加盖子,还要选中Platewithcover。②荧光的酶标测定,一般情况下选xxxxxxxFlatblack(x孔,平底,黑板。6孔板测定时没有黑板可选,可选择6孔,平底,透明板)。(注意在选择底部测定模式时要选择底部透明的黑板)如果板要加盖子,就要再选中Platewithcover。5、测定方法和参数的选择:在Measurements栏内⑴选择可见、紫外吸光度的酶标测定:双击Absorbance出现Absorbance的对话框。在Absorbance的对话框中:①在Wavelength栏中Measurement项输入测定波长值;Reference项,在需要扣除背景波长时选中并输入背景波长值。一般情况不选.②在Multiplereadperwell栏中对于吸光值的测定可不选③在Read栏中:Numberofflashes项一般选10;Settletime(使平静时间)项对于96或384孔板一般选0;对于其他孔数的板可考虑输入适当的值;孔数越少的板,Settletime设置时间要较长,以防止在测定过程中板移动距离大,对液面平稳的影响。④在Label栏中Name后输入你为此块板自定义的英文名;也可不设置。⑵选择荧光的酶标测定:双击FluorescenceIntensity,出现FluorescenceIntensity的对话框。在FluorescenceIntensity的对话框中:①在Wavelength栏中:Excitation项输入激发波长值;Emission项输入发射波长值②在Mode栏:根据被测物质的性质进行适当选择。Top为顶部测定,适合于透明均匀的液体的荧光测定Bottom为底部测定,适合于贴壁细胞类的荧光测定③在Integration栏:Logtime(滞后时间)除在做时间分辨荧光测定时需要选择,一般荧光测定时不选。Integrationtime(整体测定时间)一般在20~40µs范围内选择④在Multiplereadperwell栏:对于透明均匀的液体的荧光测定可不选。对于贴壁细胞类的荧光测定要选择。选择形式,参看栏目中的图形。⑤在Read栏中:Numberofflashes项一般可选3~5次;Settletime(使平静时间)项对于96或384孔板一般选0;对于其他孔数的板可考虑输入适当的值;孔数越少的板,Settletime设置时间要较长;以防止在测定过程中板移动距离大,对液面平稳的影响。⑥在Gain(增益)栏:根据实验要求的不同进行选择Manualgain(人工增益)项:要做多块板之间的数据比较时选择该项;固定一个合适的增益值选择范围在1~225之间.Optimal(自动最佳)项:仪器根据实时测定时该板上的最强荧光值,自动给出合适的增益.一般在作单板内的数据比较时选择该项Calculatedformwell项:以一个孔内的阳性物荧光值为比较时,选择该项.⑦在Label栏中Name后可输入你为此块板自定义的英文名;也可不设置。6、酶标板的样本布局①在WellAssign对话框中各个符号所表示的意义:SM(Sample)样品BL(Blank)空白ST(Standard)标准PC(Positivecontrol)阳性对照4NC(Negativecontrol)阴性对照LPC(LowPositivecontrol)弱阳性对照HPC(HighPositivecontrol)强阳性对照BF(Polarizationreferencebuffer)偏振参照缓冲液RF(Polarizationreference)偏振参照CL(Calibrator)校正因子②在Partofplate栏中,首先用鼠标左键拉框,选择要测定的不同物质预备放置的孔(使待放置的孔变为黄色),确认Expgroup号(同一类型的实验或一个系列的标曲为一组)和Fixnumbe-复孔数,然后单击以上相应的表达符号,鼠标右键选Fillselection使该孔加上相应的标记。(例:某些孔准备放置标准品,在选孔后,单击WellAssign对话框中ST,标右键选Fillselection这些孔就被加上了ST的标记)孔中的符号表示:
本文标题:多功能酶标仪基本操作规程
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