纳豆激酶活性测定

纳豆激酶检测方法目前行业内流行的纳豆激酶检测大致有三种方法，其原理、利弊简介如下：一、IU纤维蛋白平板法：以尿激酶为对照，与纳豆激酶样品同时在纤维蛋白平板特定条件下所形成水解圈，测量各自水解圈直径，通过计算取得相应纳豆激酶活力。由于对水解圈直径的认定的认定存在经验人员视觉差异，导致测定粗放，数据波动性强，重复性差，不具权威依据。二、FU紫外分光法：纳豆激酶与纤维蛋白在一定条件下作用会产生可溶性低分子物质，通过紫外分光技术检测其浓度，通过计算取得相应纳豆激酶活力，数据稳定，重复性强。测定硬件条件苛刻，测定成本高，不具权威性依据。三、U中性蛋白酶法：纳豆激酶与酪蛋白在一定条件下作用会产生可溶性低分子物质，通过普通比色计检测其浓度，计算取得相应纳豆激酶活力，数据稳定，重复性强。测定简单，检测成本低，有国家标准为依据。1）琼脂糖一纤维蛋白平板法是，是目前最常用的纤溶酶溶栓活力测定方法，此法的原理是用琼脂糖作为固体支持，以凝血酶和纤维蛋白原制做人工血栓平板，注入NK，用溶解圈垂直直径的乘积(mm2)表示纤溶活力，以标准UK或纤溶酶为标准品作标准曲线，计算出NK的活性相当于标准品的单位数。此法简便易行，并可同时测定多个样品，但由于溶解圈面积受恒温反应时间的影响很大，所以对恒温时间的控制十分重要，且恒温时间对粗制酶活性测定的影响比对NK精制产品活性测定的影响大。2）在直径15mm的硅化试管中依次加入pH值为7.7的咪唑缓冲液、纳豆激酶收集液、凝血酶和纤维蛋白原，立即振摇数秒，使之产生絮状物，置38℃水浴30min，置冰水中终止反应。用100目尼龙网过滤试管中未溶解的纤维蛋白，滤纸吸干，用蒸馏水漂洗，再用滤纸吸干，放入小试管中，再加3mL浓度为O．2mol/L的NaOH溶液，在沸水中煮15min，冷却。用分光光度计测定溶液在280nm处的吸光值，并根据活力计算公式计算纤溶活力。纳豆激酶活力对照样