组培考试复习重点

一、名词解释1、植物组织培养：植物的离体器官、组织或细胞在人工制备的培养基上进行无菌培养，并在人工控制的环境条件下，使其发育成完整植株的科学技术2、胚胎培养：指对植物的胚、胚胎、胚珠和子房的培养。3、愈伤组织：原本指植物在受伤后于其伤口表面形成的一团薄壁细胞。在组培中，则指人工培养基上由外植体形成的一团无序生长的薄壁细胞。4、植物细胞的全能性：指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。5、人工种子:指通过组织培养技术，将植物的体细胞诱导在形态上和生理上均与合子胚相似的体细胞胚，然后将它包埋于有一定营养成分和保护功能的介质中，组成便于播种的类似种子的单位。6、细胞分化：一个尚未特化的细胞发育出特征性结构和功能的过程。7、原生质体培养：脱去全部细胞壁的细胞叫原生质体，对离体植物的原生质体进行培养，形成完整植株的培养技术。8、植物分生组织培养：是指对植物的分生组织进行离体培养的技术，包括植物根尖、茎尖等顶端分生组织和形成层组织的培养。其中茎尖培养广泛应用于植物再生和脱病毒研究。9、初代培养：是指在组培过程中，最初建立的外植体无菌培养阶段。即无菌接种完成后，送入培养室的外植体在适宜的光、温、气等条件下被诱导成无菌短枝(或称茎梢)、不定芽(丛生芽)、胚状体或原球茎等中间繁殖体的过程。（将外植体进行第一次培养。）10、植物细胞培养：是指对植物器官或愈伤组织上分离出的单细胞（或小细胞团）进行离体培养，形成单细胞无性系或再生植株的技术。11、外植体：植物组织培养过程中从活体植株上切去下来的用于离体培养的一切材料。（如器官、组织、细胞、原生质体、种子等）12、脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。13、再分化：愈伤组织形成不定芽或不定根或胚状体。二、简答题1、简述茎尖作为外植体进行初代培养的培养基配方和培养环境特点？答：1、简述无菌操作的具体步骤？答：(1)在接种4h前用甲醛熏蒸接种室；(2)在接种前15-20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯；(3)接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；(4)上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。然后70%酒精喷雾降尘，并擦拭工作台面；(5)接种工具蘸95%酒精，灼烧；(6)接种时将瓶口斜着，使瓶口在酒精灯火焰上转动，灼烧数秒钟。接完种后，将瓶口在火焰上再灼烧数秒钟。(7)接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；(8)接种完毕后要清理干净并用酒精擦工作台。1)实验前20min将超净工作台的紫外灯打开，进行灭菌。试验时关闭紫外灯，避免人员被紫外线照射。2)用酒精喷壶或酒精棉将超净工作台消毒，然后实验操作者的手和小臂也用70％酒精消毒。实验器具用酒精喷壶消毒之后，放入装有95％酒精的广口瓶中。3)点燃超净工作台上的酒精灯，将广口瓶中的镊子和剪刀等器械取出，在酒精灯上灼烧，放置在灭菌支架上冷却后使用；镊子和剪刀等器械也可以用灭菌器灭菌，由于灭菌器温度为300℃，故器械在灭菌器中灭菌1-2min，然后放在灭菌支架上冷却后使用。4)需要接转的培养瓶或新培养瓶均应在酒精灯下方处打开瓶盖，且培养瓶的瓶口须在酒精灯上灼烧，然后用冷却的无菌器械将材料切割后，植入新培养基上，快速将瓶盖等封口材料在酒精灯上燎烧，盖上瓶盖等封口材料。记录材料类型和接种日期，放置培养架上2、简述茎尖作为外植体进行初代培养的培养基配方和培养环境特点？3、简述胚胎培养的应用领域？答：1)在远缘杂交育种中的应用:克服杂种胚不能正常发育2)克服珠心胚的干扰,提高育种效率3)缩短育种周期4)测定休眠种子的萌发率5)理论研究中的应用(一)克服远缘杂交不亲和性远缘杂交中由于胚乳发育不正常或杂种胚与胚乳之间生理上的不协调，造成杂种胚早期夭折。将早期幼胚进行离体培养进行胚挽救，可克服这种受精后障碍，产生远缘杂种。，(二)打破种子休眠。缩短育种周期许多植物的种子发育不完全或有抑制物存在而影响种胚发芽。通过幼胚培养，可促使这些植物的幼胚达到生理和形态上的成熟而提早萌发形成植株。(三)提高种子萌发率长期营养繁殖的植物，虽具有形成种子的能力，但其生活力较低，萌发成苗率低下，胚培养可促进这类种子萌发和形成幼苗。意义：①、克服远缘杂种的不育性②、使胚胎发育不完全的植株获得后代③、缩短育种年限，提高育种效率4、简述生长素的种类及其在组培中的主要生理作用？答：生长素类①IAA(吲哚乙酸)：是天然存在的生长素，亦可人工合成，其活力较低，是生长素中活力最弱的激素，对器官形成的副作用小，高温高压易被破坏，也易被细胞中的IAA分解酶降解，受光也易分解。②NAA(萘乙酸)：在组织培养中的起动能力要比IAA高出3-4倍，且由于可大批量人工合成，耐高温高压，不易被分解破坏，所以应用较普遍。NAA和IBA广泛用于生根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。③IBA(吲哚丁酸)：是促进发根能力较强的生长调节物质。④2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)：起动能力比IAA高10倍，特别在促进愈伤组织的形成上活力最高，但它强烈抑制芽的形成，影响器官的发育。适宜的用量范围较狭窄，过量常有毒效应。生长素配制可先用少量95％酒精助溶，2,4-D可用0.1mol／L的NaOH或KOH助溶。生长素常配成1mg/ml的溶液贮于冰箱中备用5、简述细胞分裂素的种类及其在组培中的主要生理作用？答：细胞分裂素：诱导不定芽分化和茎、苗的增殖（初代和继代培养中均需要）包括6-BA、Kt(kinetin)、玉米素ZT等。其中ZT活性最强，但非常昂贵，常用的是6-BA。细胞分裂素使用浓度：0.05-10mg／L。作用：①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。细胞分裂素与生长素相互作用，当组织内细胞分裂素／生长素的比值高时，诱导愈伤组织或器官分化出不定芽。②促进细胞分裂与扩大。细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化、茎、苗的增殖，③抑制根的分化。避免在生根培养时使用。6、以植物茎尖为外植体，简述外植体灭菌的一般过程？答：(1)将需要的材料用水洗干净。(2)表面灭菌：用70%酒精浸30-60s左右。(3)灭菌剂处理：0.1%升汞10分钟、或在2%次氯酸钠液中浸泡20-25分钟。(4)用无菌水冲洗3-5次左右7、简述植物组织培养与田间植株常规繁殖技术相比，具有哪些优越性表现？1)外植体遗传背景一致性高。再生植株的外植体可以来自细胞、组织、器官等，个体微小，可来源于同一植物体，遗传性状一致性高，试验精度得到提高。2)经济方便。外植体培养和繁殖为微型化和精密化，来源广泛，易管理，成本低。3)培养材料生长条件可控制。培养材料生长所需的条件，即培养基和环境条件均可处于人人工控制下，植株生长发育所需条件一致性高，试验误差低。4)生长周期短。外植体生长处于优化条件下，其生长和繁殖速度快。5)周年生长且规模化生产。不受季节影响，可周年进行工厂化大规模生产，保障了产品的质量和数量。8、简述铁皮石斛（或马铃薯）试管苗的移栽驯化操作技术程序？移栽前，打开瓶盖炼苗2-3天。当试管苗高约3㎝并有3-4条1㎝左右的新根时，即可进行移栽。移栽前，洗净组培苗根上的培养基，用0.1％灭菌灵消毒，以防止栽培后的石斛苗根腐烂。基质可采用经过灭菌处理的蛭石。移栽后最初几天，要将空气湿度保持在85％-95％，先进行遮阴，遮光率为60％，逐渐增加光照强度。环境温度控制在18-22℃。经1-2月的管理，即可定植于由泥炭、碎砖屑以体积3:2所配成的混合基质中。石斛喜湿润的土壤环境，在管理期间应多喷水。基质无需追肥。当小苗完全适应外界环境后，可每隔1-2周在其叶面喷施一次1/4MS培养基作为追肥。石斛喜温暖，怕低湿，最好将环境温度保持在15-25℃。基本操作步骤：炼苗（2周）→开瓶（1-2天）→掏取苗→去愈伤组织，洗净培养基→消毒→晾苗→移栽→控制条件（中温、高湿、低光）培养10-15天→大田移栽。9、简述MS培养基的特点？无机盐浓度高，特别是硝酸盐、钾离子和铵离子含量丰富；元素平衡较好，缓冲性能好；微量元素和有机成分含量齐全且较丰富，是目前使用最广泛的培养基。为较稳定的平衡浓度，是通用型培养基。10、简述茎尖培养的优越性？茎尖生长速度快，繁殖率高，不容易产生遗传变异，而且茎尖培养时获得无病毒苗木的有效途径。所以茎尖培养是植物组织培养最常用的试才之一，分为微茎尖培养和普通茎尖培养，微茎尖培养可以做到脱毒。三、论述题1、综合分析产生植物组培室污染的原因，并提出控制污染的措施？a)培养基及各种接种器皿灭菌不彻底b)外植体灭菌不彻底c)操作时认为带入d)环境不清洁e)超净工作区域不清洁f)环境湿度过大措施：a)灭菌前充分排尽灭菌锅内冷空气，当灭菌锅压强达1.03X105-1.38X105Pa、温度为121-126℃时，应保持灭菌时间20-30分钟b)接种器具每次使用后应有酒精灼烧或灭菌器灭菌c)污染的外植体材料应及时淘汰，若果种源有限，对外植体材料可进行二次灭菌d)操作人员接种时应用75％酒精擦拭双手和培养瓶表面，操作室内不要放入过多待用培养瓶，防止气流被挡住e)接种环境应定期用福尔马林等熏蒸灭菌，经常打开紫外灯照射灭菌f)超净工作台应定期对初过滤器清洗和更换，提前15-20分钟打开紫外灯，并用75％酒精擦拭整个工作台g)控制环境湿度2、综合论述植物组织培养在生产中的应用领域？答：（1）快速繁殖运用组织培养的途径，一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株；（2）种苗脱毒针对病毒对农作物造成的严重危害，通过组织培养可以有效地培育出大量的无病毒种苗；（3）培育和创制新品种利用组织培养可以使难度很大的远缘杂交取得成功，从而育成一些罕见的新物种；（4）大量生产次生代谢物质通过植物细胞培养获得的生物碱、维生素、色素、抗生素以及抗肿瘤药物不下50多个大类，其中已有30多种次生物质的含量在人工培养时已达到或超过亲本植物的水平。植物细胞次生物质的研制与生产硕果累累，后来居上。5）植物种质资源的离体保存植物组织培养结合超低温保存技术，可以给植物种质保存带来一次大的飞跃。因为保存一个细胞就相当于保存一粒种子，但所占的空间仅为原来的几万分之一，而且在-193度的液氮中可以长时间保存，不像种子那样需要年年更新或经常更新。（6）人工种子人工种子便于贮藏和运输，适合机械化播种；繁殖速度快，不受季节和环境限制，利于工厂化生产；体细胞胚由无性繁殖体系产生，可以固定杂种优势。一）快速繁殖种苗用组织培养的方法进行快速繁殖是生产上最有潜力的应用，包括花卉观赏植物、蔬菜、果树、大田作物及其他经济作物。快繁技术不受季节等条件的限制，生长周期短，而且能使不能或很难繁殖的植物进行增殖。（二）无病毒苗的培养植物在生长过程中几乎都要遭受到病毒病不同程度的危害，有的种类甚至同时受到数种病毒病的危害，尤其是很多园艺植物靠无性方法来增殖，若蒙受病毒病，代代相传，越染越重，甚至会造成极严重的后果。三）在育种上的应用植物组织培养技术为育种提供了许多手段和方法，使育种工作在新的条件下更有效的进行（四）人工种子人工种子，是指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽，被包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中，从而形成能发芽出苗颗粒体。（五）工厂化育苗是指以植物组织培养为基础，将外植体接种在人工配制的培养基上，通过控制环境条件，使细胞脱分化、再分化成新的组织、器官，进而培育出与母株一样的批量幼苗的方法。具有这些优点：繁殖快，整齐、一致，无病虫害，周期短，周年生产，性状稳定2、综合论述如何实现组培厂的提质增效？答：a)提高劳动生产率：按工作性质进行操作人员分工，实行岗位责任制，或定额管理计件工资b)减少设备投资，延长使用寿命：定期检查设备，及时维修c)降低消耗：用耐高温的器皿、尽量使用自然光照和温度，充分利用培养室空间d)降低污染，提高繁殖率和成活率：e)简化培养基：白糖代替蔗糖，自来水代替蒸馏水3、综合论述培养基的制备操作步骤？答：（1）确定培养基的配方。（2）贮备液（或母液）的配制与保存配一些浓溶液，用时稀释，这种浓溶液叫贮备液或母