组织培养复习题

细胞全能型：植物器官培养：愈伤组织培养：19世纪30年代，德国植物学家施莱登和德国动物学家施旺创立了细胞学说，根据这一学说，如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活。1902年，德国植物学家哈伯兰特在细胞全能性的理论是植物组培的理论基础。1958年，一个振奋人心的消息从美国传向世界各地，美国植物学家斯蒂瓦特等人，用胡萝卜韧皮部的细胞进行培养，终于得到了完整植株，并且这一植株能够开花结果，证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞全能的预言。植物组培的简单过程如下：剪接植物器官或组织——经过脱分化（也叫去分化）形成愈伤组织——再经过再分化形成组织或器官——经过培养发育成一颗完整的植株。植物组培的大致过程是：在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，用纤维素酶与果胶酶处理用以去掉细胞壁，使之露出原生质体，然后放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。不过这种组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞，叫做愈伤组织。在适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科编辑本段植物组织的培养培养方法1、非试管微组织快繁非试管微组织快繁技术是将外植体（一般要求带一叶一芽）放置在室内外普通沙子培养基上进行培养，利用植物腋芽自然倍增达到快速繁殖的目的。一般植物7～15天可以生长出根系。此技术投资低，操作环节少。2、试管组织培养试管组织培养是将外植体（即离体组织、器官或细胞）放置在组培瓶等器皿中在无菌的条件下进行组织培养获得组培瓶苗。培养步骤第一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。当然，最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10～30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。有一些特殊的材料，如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，以及主要取用内部的材料，则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下，待酒精蒸发后再剥除外层，取用内部材料。第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1—2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3-l0次左右。无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意：①酒精渗透性强，幼嫩材料易在酒精中失绿，所以浸泡时间要短，防止酒精杀死植物细胞。②老熟材料，特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些，如种子可以浸泡5分钟。③升汞的渗透力弱，一般浸泡10分钟左右，对植物材料的杀伤力不大。④漂白粉容易导致植物材料失绿，所以对于幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入浓度为0.08—0.12%的吐温20或80（一种湿润剂），可以降低植物材料表面的张力，达到更好的消毒效果。培养特点1、培养条件可以人为控制组培采用的植物材料完全是在人为提供的培养基和小气候环境条件下进行生长，摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响，且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产。2、生长周期短，繁殖率高组培是由于人为控制培养条件，根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比较小，往往20-30天为一个周期。所以，虽然组培需要一定设备及能源消耗，但由于植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗或脱病毒种苗。3、管理方便，利于工厂化生产和自动化控制植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激素等条件，极利于高度集约化和高密度工厂化生产，也利于自动化控制生产。它是未来农业工厂化育苗的发展方向。它与盆栽、田间栽培等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫等一系列繁杂劳动，可以大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地。培养优点1、占用空间小，不受地区、季节限制。2、培养脱毒作物3、培养周期短4、可用组培中的愈伤组织制取特殊的生化制品5、可短时间大量繁殖，用于拯救濒危植物6、可诱导之分化成需要的器官，如根和芽7、解决有些植物产种子少或无的难题，8、不存在变异，可保持原母本的一切遗传特征9、投资少，经济效益高10、繁殖方式多，试用品种多培养材料采集要根据培养目的适当选取材料，选择原则：易于诱导、带菌少。要选取植物组织内部无菌的材料。这一方面要从健壮的植株上取材料，不要取有伤口的或有病虫的材料。另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料，决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织，有自身消毒作用，这种组织一般是无菌的。培养材料的消毒从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一旦带人培养基，便会造成培养基污染。因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上。试剂·乙醇。·吲哚乙酸（IAA）或2，4–D（生长素类似物）。·氯化汞（升汞）或次氯酸钠。·6-苄基氨基腺嘌呤（6-BA）·MS培养基·0.1mol/LNaOH与0.1mol/LHCl配制培养基（1）愈伤组织诱导培养基：MS培养基（蔗糖含量为10g/L，2,4–D含量为2mg/L，琼脂10g/L）。（2）试验培养基：在MS培养基中加入IAA和6–BA。吲哚乙酸（IAA)先用少量0.1mol/LNaOH溶解，6-苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1mol/LHCl溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。仪器设备培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL），烧杯，量筒，组培瓶，组培盖或封口膜，棉线，接种箱或超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸。培养基灭菌将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH5.8，趁热分装于100mL组培瓶中，每瓶约20mL。待培养基冷却凝固后，盖上组培盖，或盖上封口膜并用棉线扎牢，然后在高压灭菌锅中121℃（1kg/cm2）下灭菌20min。取出组培瓶放在台子上，冷却后备用。接种操作所需的一切用具（如长镊子、解剖刀、剪刀等）及灭菌水，需同时灭菌。编辑本段组织培养分类1、胚胎培养指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养。2、器官培养指以植物的根、茎、叶、花、果等器官为外植体的离体无菌培养，如根的根尖和切段，茎的茎尖、茎节和切段，叶的叶原基、叶片、叶柄、叶鞘和子叶，花器的花瓣、雄蕊（花药、花丝）、胚珠、子房、果实等的离体无菌培养。3、组织培养指以分离出植物各部位的组织（如分生组织、形成层、木质部、韧皮部、表皮、皮层、胚乳组织、薄壁组织、髓部等），或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养。这是狭义的植物组织培养。4、细胞培养指以单个游离细胞（如用果酸酶从组织中分离的体细胞，或花粉细胞，卵细胞）为接种体的离体无菌培养。5、原生质体培养。指以除去细胞壁的原生质体为外植体的离体无菌培养。植物组织培养试题植物组织培养考试题5一、名词解释：（每小题3分，共15分）1．初代培养基；2．脱分化；3．液体培养；4．细胞全能性；5．再分化.二、填空（每空1分，共40分）1．植物组织培养过程中，最常用的培养基是，培养基的pH因外植体的来源不同而异，常用和调节pH，大多数植物的pH要求调节在范围内。2．可以通过、、、、等措施预防褐变的发生。3．植物组织培养时，外植体可以是、、、。4．应用微尖嫁接技术进行脱毒培养无病毒苗，主要程序为→→→→。5．组织培养植株的再生途径有两条：一是发生，另一是发生。6．在配制培养基时，可以在培养基中添加，利用其吸附能力，可以降低褐变的发生，但它对物质的吸附。7．培养基的灭菌要求压力为、温度为、维持时间为。8．组织培养中常用的生长素有吲哆乙酸（IAA），2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D），吲哆丁酸（IBA），萘乙酸（NAA），它们的作用强弱顺序为。9.茎尖微繁殖过程一般包括五个阶段，即、、、、。10．茎尖分生组织培养的目的主要是，其茎尖一般取毫米。为了使脱毒效果更好，可以将茎尖分生组织培养与结合起来。脱毒处理的试管苗，在用于生产之前，必须进行。11．污染的原因从病源菌上分析主要有两大类、。三、判断正误，并改错。（每小题2分，共20分）1．一般将微量元素母液均配制成10倍，在配制培养基时，使用量为10ml/L。细胞分裂素/生长素的比值较高时，有利于愈伤组织的诱导。2．对于金边虎尾兰等遗传学上的嵌合体植物，要是组织培养繁殖的植株保持原有的园艺价值，只能通过叶培养。3．植物生长调节物质使用不当时，材料也容易褐变，生长素有刺激多酚氧化酶活性提高的作用。4．利用茎尖分生组织进行脱毒培养时，茎尖外植体大小与脱毒效果成正比。5．某些植物通过愈伤组织培养可以获得无病毒苗。6．无病毒植株不具有抗病毒的能力，而且在清除病毒之后，体内营养和生理状况发生改变，因而对其他病毒和病原体的侵染更为敏感，因此在种植脱毒苗的一定要隔离种植。7．微繁不定芽的产生有两个途径，一是不定芽不通过愈伤组织由外植体直接产生，二是外植体诱导产生愈伤组织，由愈伤组织上产生不定芽。后一途径相对较为优越，因为通过愈伤组织不会出现一些突变。8．细胞的全能性，可以通过分裂细胞的脱分化和再分化过程得以体现。9．培养基中的铁盐，常用不易分解的乙二胺四乙酸铁螯合物，以防在pH较高时铁被氧化为不溶的氢氧化铁。四、简答题：（每小题5分，共15分）1．植物生长物质如何调控外植体形态发生？2．为什么要对脱毒苗进行多次检定？3．茎尖培养根据培养的目的和取材大小可分为哪几种类型？各有何特点？五、综述题（每小题10分，共10分）试管苗移栽时应注意哪些事项？答案5一、名词解释：（每小题3分，共15分）1．初代培养基：是指用来第一次接种外植体的培养基。2．脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。3．液体培养：指在进行培养时，培养基中不加琼脂等凝固剂，一般需要通过振荡等方法解决培养基的通气情况。4．细胞全能性：一个细胞能产生一个完整植株的固有能力，或植物细胞具有全部的遗传信息，不论是性细胞还是体细胞，在特定环境下，能进行表达而产生一个独立完整的个体。5．再分化：愈伤组织形成不定芽或不定根或胚状体。二、填空（每空1分，共40分）1．MS、HCL、NaOH、5.6~6.02．适宜外植体、最佳的培养基、连续转接、加抗氧化剂、加活性炭。3．器官、组织、细胞、去掉细胞壁的原生质体4．无菌砧木、茎尖准备、嫁接、嫁接苗培养、移植5．器官、胚胎6．活性炭、无选择性。7．1000~5000Lx、16h、25±2℃8．2，4-D、NAA、IBA、IAA9．无菌外植体的建立、芽的增殖、中间繁殖体的增殖、诱导生根、试管苗的移栽。10．脱毒、0.1热处理、病毒检定11．细菌、真菌三、判断正误，并改错。（每小题2分，共20分）1．×一般将微量元素母液均配制成100倍，在配制培养基时，使用量为10ml/L。2．×细胞分裂素/生长素的比