药渣再次提取物中有效成分对比

广西科技大学1药渣再次提取物中有效成分对比******（广西科技大学生物与化学工程学院，广西柳州545006）指导老师：******摘要：本文采用了高效液相色谱法对纯正堂制药厂的中药渣、玉叶清火胶囊和玉叶金花药材中的豆甾醇、β-谷甾醇、阿魏酸和咖啡酸的含量。方法：采用Shim-packVP-ODS(150x4.6mmI.D)；流速0.8mL/min；柱温40℃；流动相甲醇-0.8%冰醋酸水溶液（35：65）；检测波长323nm；进样量20μL；检测阿魏酸和咖啡酸的含量。采用Shim-packVP-ODS(150x4.6mmI.D)；流速1.0mL/min；柱温40℃；流动相为甲醇；进样量20μL；检测波长210nm；检测豆甾醇和β-谷甾醇的含量。实验结果，玉叶金花中含有少量阿魏酸，咖啡酸，几乎不含有β-谷甾醇和豆甾醇。采用乙醇提取中药渣，所得的咖啡酸含量最高，但提取不出阿魏酸。采用50%乙醇提取中药渣，所得的阿魏酸含量最大，阿魏酸和咖啡酸的总含量也最大。综上所述，最优的提取条件是采用50%乙醇作提取剂。关键词：中药渣；玉叶金花；高效液相色谱法；豆甾醇;β-谷甾醇;阿魏酸;咖啡酸一直以来由于中药能够治疗许多的疑难杂症而闻名于世，虽然有时候其治愈病根的机理还不完全被人们所知，但随着人们逐渐认识到西医治疗存在一定的后遗症等副作用，对中药的治疗机理研究不断深入，中草药具有药性温和，副作用低，使用安全等优点，使得中药的治疗不断受到人们的青睐，因此，中草药的价格飞涨，生产量也在地不断攀升。中药类药材当中，植物类药材就占了87%以上。据统计，我国仅植物类药渣年排放量巨大。中药渣一般含水量较高且含有一定营养成分，极易腐败，会对环境造成严重的污染[1-2]。被废弃的中草药渣还残存各种营养物质及40%左右的原药药效，中药渣是低成本原料，如果能作为药物继续二次使用，必将可以提高中草药的使用价值，减少资源的浪费[3-6]。随着人们生活水平的提高，人们也越来越来关注食品的安全问题，许多食品的添加剂、蔬果的农药残留、畜禽饲料的药物添加等已经成为人们关注的健康话题[7-8]。特别是畜禽饲料的药物，人们主要担心药物在畜禽的添加会通过食用肉类而传到人体，影响身体健康。而中草药作为饲料添加剂添加到畜禽的饲料越来越受到人们的亲睐。以生产中药为主的制药企业在提取中药材的过程中，自然会产生大批的药渣。大部分中药制药企业对中药的有效成分提取率是60-70%，其药渣与原药相比一般残留不少的的药效成分[1]。如果将其再次利用，将可以增加药渣的附加值，减少环境污染。本实验正是基于这样的现状而开展的，对广西纯正堂制药厂中主要含玉叶金花的药渣进行回收提供理论依据。通过使用多种有机溶剂将药渣中的有效成分再次提取出来测定其含量，然后与玉叶金花胶囊和玉叶金花中药材的含量进行对比，确定其药渣中有效成分的含量，为中药渣的回收利用提供理论依据。广西科技大学2本研究主要通过高效液相色谱分析，对比药渣提取后的药渣中所含原药主要成分的含量，以确定中药渣是否有再次提取回收的依据。1材料与实验方法1.1材料、试剂与仪器中药渣、玉叶清火胶囊（广西纯正堂制药厂），玉叶金花药材（广西梧州）；甲醇、乙醇(分析纯，四川西陇化工)，甲醇、冰醋酸、阿魏酸、咖啡酸、谷甾醇、豆甾醇（色谱纯，上海）LC-20AT岛津高效液相色谱仪岛津企业管理（中国）有限公司；SHZ—CD循环水式多用真空泵上海普渡生化科技有限公司；SF-130高速粉碎机浙江省瑞安市东源医疗设备机械厂；DF-101S磁力搅拌器上海普渡生化科技有限公司；AB124CNAR124CN型电子分析天平奥豪斯仪器（上海）有限公司；800电动离心机金坛市医疗仪器厂；SZ-93自动双重纯水蒸馏器中国上海亚荣生化仪器厂；GM-0.33隔膜真空泵（津腾）；JJ300电子天平常熟双杰测试仪器厂1.2实验方法1.2.1色谱条件的选择不少研究中药渣成分的文献[9-12]应用高效液相色谱对豆甾醇和β-谷甾醇进行了分析，实验采用色谱柱为HypersilODS反相柱(4.6x50mm，5m)，流动相为甲醇，紫外检测波长为210nm,恒溶剂洗脱混合植物甾醇在10min内得到了很好的分离。陈军霞等[13]采用高效液相色谱法测定湿巾中咖啡酸的含量流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液（23：77）；检测波长为323nm,流速为1.0mL/min，结果发现咖啡酸的线性范围为0.052～0.26毫克。申睿等[14]采用高效液相色谱法同时测定活血止痛液中阿魏酸和咖啡酸的含量，流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液（17：83），流速为1.0mL/min,检测波长为320nm,结果发现阿魏酸和咖啡酸与其他杂质峰分离良好。因此，本实验采用的色谱条件如下表1。表1实验选用色谱条件色谱条件色谱柱柱温(℃)进样量（μL)检测波长（nm)流速(ml/min)流动相色谱条件1202101.0色谱条件2203230.8甲醇乙酸（：）ShShim-packVP-ODS150x4.6mmI.Dim-packVP-ODS150x4.6mmI.D4040-1%3565纯甲醇1.2.2流动相液体的准备用10ml的量筒取8ml冰醋酸（色谱纯）加入到1000ml容量瓶中，加二次蒸馏水至刻度。流动相包括甲醇、二次蒸馏水和0.8%冰醋酸都要用过虑膜过滤，进样量为20μL。广西科技大学31.2.3标准品溶液的配制称量适量的豆甾醇，β-谷甾醇，阿魏酸和咖啡酸标准品，配制成不同浓度的标准品溶液，使用高效液相色谱检测它们的保留时间，及波峰面积。1.2.4绘制标准曲线豆甾醇，β-谷甾醇标准品溶液分别在色谱条件1下进样，阿魏酸和咖啡酸标准品分别在色谱条件2下进样。分别记录保留时间和峰面积，再以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。1.2.5原料提取、制备溶液玉叶清火胶囊：去掉外壳，收集里面药粉，称取两份，每份1.77g，分别加入100ml纯甲醇和纯乙醇加热70℃回流提取2h，用布氏漏斗抽滤，得滤液分别加甲醇和乙醇定容至100ml容量瓶，制得试样1、2。玉叶金花药材：称取玉叶金花药材（已粉碎）两份，每份17g，分别加入100ml纯甲醇和纯乙醇在70℃下加热回流2h，抽滤，得滤液分别加甲醇和乙醇定容于100ml容量瓶中得试样3、4。中药渣：称取中药渣(已粉碎)4份，每份17g，分别加入150ml甲醇、50%甲醇、乙醇和50%乙醇，在70℃下加热回流2h，抽滤，把所得滤液定容到250ml的容量瓶中，得试样5、6、7、8。2结果与分析2.1绘制标准曲线由四个标准样品分别配制成不同浓度的溶液，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，所得标准曲线的方程式如下：豆甾醇标准曲线：y=2.6×105x+1.7×105,R2=0.9985β-谷甾醇标准曲线：y=2.1×106x+1.3×105,R2=0.9893阿魏酸标准曲线：y=5.8×106x-4.8×105,R2=0.9886咖啡酸标准曲线：y=6.5×106x+1.2×105,R2=0.9924其中x表示进样量,y表示峰面积，R2表示相差系数，将试样的峰面积y带入标准曲线，即可求出试样的含量。2.2试样的检测结果在色谱条件1下，在色谱图中13.8min和14.5min附近三种原料均没有检测出色谱峰。由此可知被检测溶液中不含有豆甾醇，β-谷甾醇，由此推测是在实验条件下提取不出豆甾醇，β-谷甾醇，或者含量太低检测不出。在色谱条件2下：在色谱图中，在14.4min和21.4min附近在高效液相色谱仪显示在该处有峰，并测定出该处的峰面积。根据测定得的峰面积y代入阿魏酸标准曲线公式和咖啡酸标准曲线公式，得出阿魏酸和咖啡酸含量，其结果如下表2。广西科技大学4表2不同原料、不同条件下的提取结果实验组原料咖啡酸阿魏酸提取剂保留时间/min峰面积含量/μg保留时间/mim峰面积含量/μg第1组玉叶清火胶囊甲醇14.191744930.024621.3921075350.0977第2组玉叶清火胶囊乙醇14.191315040.0181---第3组玉叶金花药材甲醇14.201205930.0165---第4组玉叶金花药材乙醇---21.3528267900.2176第5组中药渣甲醇14.231575260.022021.298174000.0827第6组中药渣50%甲醇14.252202950.031621.465224250.0835第7组中药渣乙醇14.202309500.0332---第8组中药渣50%乙醇14.221881750.026721.337596450.089700.050.10.150.20.25第1组第2组第3组第4组第5组第6组第7组第8组有效成分含量0.02460.01810.01650.0220.03160.03320.02670.09770.21760.08270.08350.0897实验组质量（μg)咖啡酸阿魏酸图1有效成分含量提取结果从表2、图1中可以可知：（1）中药渣、玉叶清火胶囊、玉叶金花药材中含有少量阿魏酸和咖啡酸，检测不出含有豆甾醇或β-谷甾醇（2）第5、6、8组可知提取量相差不大。即用甲醇、50%甲醇和50%乙醇提取中药渣，得到的阿魏酸含量相差不大，但提取量最大的是第8组。阿魏酸最优提取条件是第8组，即用50%乙醇提取。(3)比较第5、6、7、8组，第7组提取的咖啡酸含量最大，即用乙醇提取咖啡酸条件最优。（4）综合第5、6、7、8组，对中药渣的咖啡酸和阿魏酸的提取结果，两者同时提广西科技大学5取的最佳条件为第8组，即用50%乙醇作提取剂，能较好的提取出咖啡酸和阿魏酸。（5）通过第3、4组可计算出玉叶金花药材中咖啡酸和阿魏酸的含量分别为：0.48%和6.4%，通过通过第2、3、7组可知，用乙醇提取不出玉叶金花胶囊和中药渣中的阿魏酸；用甲醇提取不出玉叶金花药材的阿魏酸。综上所述，比较5、6、7、8组，第8组咖啡酸和阿魏酸总含量最高。3结论与展望3.1结论本实验以中药渣作为原料，利用有机溶剂浸提出药渣里面的药效成分，采用高效液相色谱法测定所浸提出溶液的含量。通过各种不同条件下的浸提效果，从而确定出最佳的浸提方案，从实验结果可以看出，在不同有机溶剂、有机溶剂不同用量，所提取出药物有效成分有一定的差异。在所供试品中，检测不出豆甾醇和β-谷甾醇，中药渣、玉叶清火胶囊、玉叶金花药材中含有少量阿魏酸和咖啡酸。采用纯乙醇提取中药渣，所得的咖啡酸含量最高，但提取不出阿魏酸。采用50%乙醇提取中药渣，所得的阿魏酸含量最大，总含量也最大。综上所述，最优的提取条件是采用50%乙醇作提取剂。3.2展望随着中医药的医疗效果不断取得喜人的成绩，中医治疗日益受到人们的青睐，由此产生的中药渣而带来的处理问题必将受到人们的极大的关注，中药渣是低成本原料，如果能作为药物继续二次使用，必将可以提高中草药的使用价值，减少资源的浪费。随着人们生活水平的提高，人们也越来越来关注食品的安全问题，许多食品的添加剂、蔬果的农药残留、畜禽饲料的药物添加等已经成为人们关注的健康话题。特别是畜禽饲料的药物，人们主要担心药物在畜禽的添加会通过食用肉类而传到人体，影响身体健康。而中草药作为饲料添加剂添加到畜禽的饲料更是越来越受到人们的认可。由于药渣是经过一次提取后所得废渣，但其有效药物成分还残留有很多在里面，而对于玉叶金花药渣中有效药物成分的研究还未见有报道，而利用广西纯正堂的玉叶金花的药渣作为中药渣微生态发酵清瘟解毒动物饲料添加剂的研究已经有在进行中，本实验正是在这样的一个应用的基础上而进行，为药渣的再次提取有用药效成分，或者使用其他中药渣来作为培养食用菌、微生物发酵作为饲料提供了一个可以参考的提取条件，添加剂相信本实验所得结果为其药渣的利用将提供一个很好的理论依据。参考文献[1]李艳军，谷子林,刘亚娟.中药渣饲料资源的开发利用[J].添加剂世界,2010,(4):25-26[2]邹盛勤，批把叶药渣中乌索酸的提取分离及乌索酸标准样品的制备研究[D]。南昌：南昌大学，2009。广西科技大学6[3]于杰，安钢，赵自立等，中药