血库操作规程2013版

北川羌族自治县人民医院血库标准操作规程文件编号：BC-2-2013编制：吕强审核：施伟批准：施伟生效日期：2013年4月14日北川县人民医院血库作业指导书文件编号：BC-2-2013版本/修订号：BC/2主题内容目录生效日期：20130414第1页共13页目录序号主题内容页号目录11ABO血型鉴定（正定型）12Rh（抗D）血型鉴定3凝聚胺介质交叉配血4离心机操作标准操作程序5离心机维护保养操作程序6血库冰箱维护保养操作程序7移动紫外消毒车使用操作程序8电热恒温水浴箱操作规程9101112北川县人民医院血库作业指导书文件编号：BC-2-2013版本/修订号：BC/2主题内容ABO血型鉴定（正定型）生效日期：20130414第2页共13页ABO血型鉴定（正定型）1、实验原理根据红细胞上有或无A抗原或（和）B抗原，将血型分为A型、B型、AB型和O型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原；所谓反定型，是用已知A红细胞B红细胞来测定血清中有无相应的抗A或（和）抗B。2、使用的标本种类和收集方法2.1、受检者5％红细胞悬液红细胞悬液制备：采取受检者的红细胞，经盐水洗涤3次，取压积红细胞1滴加入生理盐水16滴（0.8ml）配成5％的红细胞悬液。2.2、受检者血清采取受检着静脉血2-3ml，置水浴箱中至完全凝固，3000转/分钟离心5分钟，分离上层血清备用。2.3、标本接收2.3.1、血型鉴定不接收临床送检标本（除外2.3.2规定内容）。2.3.2、特殊急诊检验人员无法采血时，接收临床送检标本需登记采血护士姓名及送检护士姓名、并查对标本标签和检验单内容是否相符，如有不符可以拒收标本。2.4、标本容器要求：洁净一次性塑料试管3、使用的试剂3.1、抗A、抗B定型试剂（单克隆抗体）3.1.1、批准文号：国药准字S109800593.1.2、生产厂家：上海血液生物医药有限公司3.1.3、保存条件：2-8℃避光保存，有效期内使用。2．5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液2.5.1、制备方法分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，经盐水洗涤3次，取压积红细胞1滴加入生理盐水16滴（0.8ml）配成5％的红细胞悬液。2.5.2、保存条件：配制好的5％的红细胞悬液在试管上注明红细胞血型及配制时间，2-8℃避光保存，有效期3天。4、仪器：4.1、仪器型号：ＴＤＬ－５Ｃ型医用离心机4.2、仪器厂家：北京菲恰尔医疗器械有限公司4.3、许可证号：京药管械（试）字2001第2030436号北川县人民医院血库作业指导书文件编号：BC-2-2013版本/修订号：BC/2主题内容ABO血型鉴定（正定型）生效日期：20130414第3页共13页4.4、仪器使用具体要求见离心机使用维护程序。5、操作步骤、报告结果5.1、正定型：取清洁试管2支作好标记，分别加入抗A（蓝色）和抗B（黄色）标准血清各2滴。每管加入被检者5％红细胞悬液各2滴，混匀，1000转/分钟离心一分钟或在室温放置1小时，轻轻摇匀，涂至载玻片上，用显微镜观察是否凝集。5.2、反定型：取清洁试管2支作好标记。用滴管分别加入被检者血清各2滴，A和B型5％标准红细胞悬液各2滴。混合。立即以1000转/分钟离心1分钟，轻轻摇匀，涂至载玻片上，用显微镜观察是否凝集。5.3、结果见下表：抗A抗B血型A细胞B细胞+-A-+-+B+---O++++AB--注：（＋）凝集（－）不凝集6、注意事项6.1、标准血清质量应符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。如出现混浊或变色则不能使用。6.2、试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤3次，以除去存在于血清中的抗体及可溶性抗原。6.3、试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。6.4、操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。6.5、离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。6.6、观察时应注意区别真假凝集。6.7、判断结果后应仔细核对，记录，避免笔误。7、临床意义输血已成为临床上必不可少的治疗手段，输血必须输入ABO同型血，如输入异型血，输入的红细胞可能迅速破坏，导致严重的溶血反应，常常威胁生命甚至造成死亡。8、方法的局限性：本方法不能检测出亚型。北川县人民医院血库作业指导书文件编号：BC-2-2013版本/修订号：BC/2主题内容Rh（抗D）血型鉴定生效日期：20130414第4页共13页Rh（抗D）血型鉴定1.原理：Rh血型系统通过输血或妊娠可产生免疫性抗体，当遇有相应抗原，可致溶血反应或新生儿溶血病。若误诊误治，可导致患者残废或死亡。有条件者应作此检查。目前，一般应用5种分型血清来检查红细胞抗原。临床上，凡带有D抗原者，称为Rh阳性，不带D抗原者，称为Rh阴性。2、使用的标本种类和收集方法2.1、受检者2-3％红细胞悬液红细胞悬液制备：采取受检者的红细胞，经盐水洗涤3次，取压积红细胞1滴加入生理盐水32滴（1.6ml）配成2-3％的红细胞悬液。2.2、标本接收2.2.1、血型鉴定不接收临床送检标本（除外2.3.2规定内容）。2.2.2、特殊急诊检验人员无法采血时，接收临床送检标本需登记采血护士姓名及送检护士姓名、并查对标本标签和检验单内容是否相符，如有不符可以拒收标本。2.3、标本容器要求：洁净一次性塑料试管3.仪器和试剂：3.1、仪器型号：ＴＤＬ－５Ｃ型医用离心机3.2、仪器厂家：北京菲恰尔医疗器械有限公司3.3、许可证号：京药管械（试）字2001第2030436号3.4、仪器使用具体要求见离心机使用维护程序3.5、Rh抗血清本科使用上海血液生物医药有限公司生产的Rh抗血清试剂产品注册号:国食药监械(准)字2009第3400648号4.操作4.1取小试管2支,用蜡笔标记，分别加上述Rh抗血清1滴,再加2-3%受检者红细胞盐水悬液2滴,混匀。离心：3200-3400转/min,15--30秒4.2结果判断:轻摇试管，观察结果：如受检管凝集,即表示阳性；受检管不凝集,即表示阴性。5、注意事项5.1、Rh抗血清质量应符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。如出现混浊或变色则不能使用。5.2、。试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。5.3、操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。5.4、离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。5.5、观察时应注意区别真假凝集。北川县人民医院血库作业指导书文件编号：BC-2-2013版本/修订号：BC/2主题内容Rh（抗D）血型鉴定生效日期：20130414第5页共13页5.6、判断结果后应仔细核对，记录，避免笔误。5.7、当用未经洗涤的细胞作试验时，试样中的自身凝集和异常蛋白质可能引起假阳性结果。北川县人民医院血库作业指导书文件编号：BC-2-2013版本/修订号：BC/2主题内容凝聚胺介质交叉配血生效日期：20130414第6页共13页凝聚胺介质交叉配血原理红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发生聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕，而形成Zeta电位，决定红细胞之间的排斥作用。凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM），降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。其后，加入凝聚胺（溶液，它是一种高阶阳离子多聚物，肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝聚。最后，加入凝聚胺(Resuspending),Resuspending具有中和凝聚胺（Polybrene）的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验旨果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。试剂本科使用珠海贝索生物技术有限公司生产的凝聚胺介质试剂产品注册号:国食药监械(准)字2004第3400397号套组内容：150T装量（BA-1003）主要成份1．LIM(LowIonicMediun)1瓶×55ml葡萄糖、EDTA（2Na）2、PolybreneSolution1瓶×7.5mlPolybrene、氯化钠3.ResuspendingSolution1瓶×7.5ml柠檬酸钠、葡萄糖3、试验步骤3.1取试管二支，标主次侧，主侧管加病人血清（血浆）2滴，加供血者3-5%红细胞悬液（洗涤或不洗涤均可）1滴，次侧管反之。3.2各加LIM０．６５ml,混合均匀后,再各加Polybrene2滴,并混合均匀.3.3用血库离心机3400转/分离心10秒,然后把上清液倒掉,不要沥干,让管底残留约液体.3.4轻轻摇动试管,目测红细胞有无凝集,如无凝集,则必须重做.3.5最后加入Resuspending2滴,轻轻转动试管混合并涂片,显微镜下观察结果：在30秒-1分钟内凝集散开,代表是由Polybrene引起的非特异性聚集,配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。3.6。配学相合后，认真填写配血纪录单和登记本，并通知临床取血。4、注意事项：4.1可以用含EDTA之血浆代替血清使用。4.2若病人血清（血浆）含肝素，如洗肾患者，须多加4-6滴Polybrene溶液以中和肝素。4.3本试剂盒的操作方法也适用于抗体鉴定。北北川县人民医院血库作业指导书文件编号：BC-2-2013版本/修订号：BC/2主题内容凝聚胺介质交叉配血生效日期：20130414第7页共13页4.4试剂使用前请回复室温再行操作。4.5加做辅助性抗球蛋白试验，目的是增加检测抗-K的敏感性，对检测其他红细胞抗体无帮助。4.6在冬天室温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清中可能含有寒冷凝集素等因素，面导致假阳性的结果出现。若有此怀疑，建议在最后滴入Resuspending时，将试管立即置入37摄氏度水浴中，轻轻转动试管混合，并在30秒内观察结果。北川县人民医院血库作业指导书文件编号：BC-2-2013版本/修订号：BC/2主题内容离心机操作标准操作程序生效日期：20130414第8页共13页离心机操作标准操作程序1、目的：使每个工作人员能正确地使用本仪器。2、范围：本SOP仅适用于本室普通离心机。3、职责：3.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。3.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。4、操作：4.1开机：接通电源，打开仪器电源开关，离心机自检。4.2按“Open”键，打开机盖，旋开转子盖，平衡放入离心管，旋紧转子盖，关上机盖，此时“Open”键的指标灯亮。（如果接通电源后，机盖为开的状态，则无需此步操作）。4.3离心条件的设定：通过按“Temp”、“Speed”、“Time”键的上下箭头分别设定离心的温度、速度和时间。其中离心速度可分为每分钟转速（rpm）和离心力（cfg）两种，可通过同时按下“Speed”键的上下键头相互转换。4.4运行：离心条件设定好后，按“Start/Stop”键，离心机启动，“Open”键的指标灯灭。当达到设定的时间后，离心机自动停止，并发出提示音，“Open”键的指标灯亮，按“Open”键，打开机盖，旋开转子盖，取出离心管。若需在离心过程中停止离心，则需再按一次“Start/Stop”键。4.5关机：离心完毕后，应及时用干的软布拭去离心室的冷凝水，关闭离心机电源，并记录离记机使用情况。北川县人民医院血库作业指导书文件编号：BC-2-2013版本/修订号：BC/2主题内容离心机维护保养操作程序生效日期：20130414第9页共13页离心机维护保养操作程序1、目的：对离心机进行正确的维护，以保证仪器正常运转。2、适用范围：本SOP仅适用于本室使用的离心机。3、职