纤维素降解细菌的筛选及其培养基的优化

纤维素降解细菌的筛选及其培养基的优化自然界中能够降解和利用纤维素的微生物种类繁多，真菌、细菌、放线菌以及部分酵母菌等很多主要的微生物类群中都有，但长久以来人们一直以产酸性胞外纤维索酶的木霉、曲霉等真菌作为主要的研究对象。近年来，随着纤维素酶在洗涤剂、棉织品水洗抛光整理和制浆造纸等行业上的应用和发展，使得由细菌产生的中性以及碱性纤维素酶得到广泛重视，尤其是细菌产生的胞外纤维素酶拥有简化发酵工艺，节约资源的优势，正逐步显示出它良好的使用性能和巨大的工业价值。1材料与方法1．1材料1．1．1土壤样品采集造纸厂排水处附近中性偏碱性土壤。1．1．2培养基(1)筛选培养基A：蛋白胨10g，羧甲基纤维素钠10g，NaC15g，磷酸二氢钾1g，琼脂18g，水1000ml，pH值调至8。筛选培养基B：磷酸二氢钾2g，硫酸铵1．4g，硫酸镁0．3g，氯化钙0．3g，CMC20g，琼脂18g，水1000ml，pH值调至8。(2)斜面培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaC15g，琼脂15～20g，水1000ml，pH值7。(3)种子培养基：蛋白胨10g，酵母膏5g，NaC110g，水1000ml，pH值7。(4)基础培养基：羧甲基纤维素钠10g，蛋白胨10g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0．2g，NaC110g水1000ml，pH值7。1．2方法1．2．1刚果红染色鉴定法1．2．2粗酶液制备方法将发酵液于4500r／rain离心15rain，取其上清液收集保存。1．2．3酶活测定方法0．5的粗酶液加入1．5用柠檬酸缓冲液配制的0．51％的CMC．Na溶液，50℃作用15min，加入DNS1．5沸水浴5rain，540nm测光吸收，酶活力定义为每1h产生1g还原糖所需的酶量为一个纤维素酶活力单位用1U／ml表示。2．3培养基的优化2．3．1最佳碳源的确定改变基础培养基中碳源的种类和浓度，培养后测定酶活力。2．3．2最佳氮源的确定改变基础培养基中氮源的种类和浓度，培养后测定酶活力。2．3．3最优培养基的确定考虑到细菌的产酶除了碳源、氮源外，钾、镁、钠等无机离子对其也有影响，综合上述单项试验结果，选用麸皮作为碳源(A)，蛋白胨作为氮源(B)，磷酸二氢钾（C)，硫酸镁(D)，NaC1(E)作为无机盐进行L16(45)正交试验。因素水平表正交实验实施表试验号ABCDE1111112122223133334144445212346221437234128243219313421032431113312412342131341423144231415432411644132以上表所示的实验操作对实验所需的数据进行测定。便可确定实验所最适实验条件。水平A（%）B（%）C（%）D（%）E（%）11.00.50.50.050.2521.51.000.750.020.5032.01.501.000.030.7542.52.001.250.041.00