纯净水检验操作规程

河南新乡亚洲啤酒有限公司纯净水检验操作规程净含量测定：容量法3.1仪器3.2量筒3.3玻璃铅笔(或记号笔)3.4分析步骤将瓶装纯净水置于(20±0.5)℃水浴中恒温30min。取出，擦干瓶外壁的水，用玻璃铅笔对准饮料的液面划一条细线，将水倒入量筒，测量水的体积，即为瓶装饮料的净含量(以mL或L表示)。电导率的测定Al方法提要电导率是距离1cm和截面积1cm2之两个电极间所测得电阻的倒数，由电导率仪直接读数。A2仪器和试剂A2.1仪器A2.1.1电导率仪(附配套电导电极)。A2-1-2恒温水浴锅。A2.1-3100mL或250mL烧杯。A2.2试剂0.0100mol/L氯化钾标准溶液:取少量氯化钾(优级纯)，在110'C烘箱内干燥2h，冷却后精确称取。.7456g,溶于新煮沸放冷的重蒸馏水中(电导率小于1PS/CM)，转移到1000mL容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液在25℃时的电导率为1411.83pS/cm,溶液储存在具有玻璃塞的硬质玻璃瓶中。A3分析步骤按电导率仪使用说明，选好电极和测量条件，并调校好电导率仪，将电极用待测溶液洗涤3次后，插入盛放待测溶液的烧杯(A2.1-2)中。选择适当量程，读出表上读数即可计算出待测溶液的电导率值。注1电极引线不要受潮，否则将影响测量的准确度。2盛放待测溶液的烧杯应用待测溶液清洗3次，以避免离子污染.A4精密度和准确度同一实验室对电导率为1.36WS/cm的水样，经10次测定，其相对标准偏差为1。%。A5电极常数的测定取未知电极常数的电极，用氯化钾标准溶液(A2.2)洗涤5次后，插人盛放氯化钾标准溶液(A2.2)的烧杯中，测量一定温度下的电导率，即可计算出电极的电极常数。电极常数=K/S··············”··…(AI)式中:K—一定温度下氯化钾标准溶液的电导率，可从GB6682附录A中查出。S—同一实验条件下，测出的氯化钾标准溶液的电导。注:有的电导率仪出厂时已标明配套电极的电极常数，可直接进行电极常数的补偿校正。若未知电极的电极常数，则可用本法Ali定菌落总数测定6.1设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：6.1.1恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃。6.1.2冰箱：2℃～5℃。6.1.3恒温水浴箱：46℃±1℃。6.1.4天平：感量0.1g。6.1.5均质器。6.1.6振荡器。6.1.7无菌吸管：1mL(具有0.01mL刻度)、10mL(具有0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。6.1.8无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。6.1.9无菌培养皿：直径90mm。6.1.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。6.1.11放大镜或(和)菌落计数器。6.2培养基和试剂6.2.1平板计数琼脂培养基。6.2.2磷酸盐缓冲液。6.2.3无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。6.2.41mol/L氢氧化钠(NaOH)：称取40g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中。6.2.51mol/L盐酸(HCl)：移取浓盐酸90mL，用蒸馏水稀释至1000mL。6.2.6菌落总数测试片和压板。6.3检验程序菌落总数的检验程序见下图。6.4操作步骤6.4.1样品的稀释6.4.1.1以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。6.4.1.2用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9ml稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。6.4.1.3按6.4.1.2操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用一次1mL无菌吸管或吸头。6.4.1.4根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)，在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液加入两个无菌平皿内。同时分别取1mL稀释液加入两个无菌平皿作空白对照。6.4.1.5及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。6.4.2培养6.4.2.1琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。6.4.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(4mL)，凝固后翻转平板，按6.4.2.1条件进行培养。6.4.3菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表示。6.4.3.1选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。检样25ml样品+225ml稀释液，均质10倍系列稀释选择2个～3个适宜样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养皿内每皿中加入15mL～20mL平板计数琼脂培养基，混匀计算菌落总数报告36℃±1℃48h±2h培养计算各平板菌落数6.4.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。6.4.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。6.5结果的表述6.5.1菌落总数的计算方法6.5.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克(或毫升)中菌落总数结果。6.5.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按下式计算：N＝∑C/(n1＋0.1n2)d式中：N——样品中菌落数；∑C——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和；n1——第一个适宜稀释度平板上的菌落数；n2——第二个适宜稀释度平板上的菌落数；d——稀释因子(第一稀释度)。6.5.1.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。6.5.1.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.5.1.5若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。6.5.1.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30～300之间，其中一部分小于30或大于300时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.5.2菌落总数的报告6.5.2.1菌落数在100以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。6.5.2.2大于或等于100时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前两位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。6.5.2.3若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。6.5.2.4若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。6.5.2.5称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。7大肠菌群计数7.1设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：7.1.1恒温培养箱：36℃±1℃。7.1.2冰箱：2℃～5℃。7.1.3恒温水浴箱：46℃±1℃。7.1.4天平：感量0.1g。7.1.5均质器。7.1.6振荡器。7.1.7无菌吸管：1mL(具有0.01mL刻度)、10mL(具有0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。7.1.8无菌锥形瓶：容量500mL。7.1.9无菌培养皿：直径90mm。7.1.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。7.1.11菌落计数器。7.2培养基和试剂7.2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤。7.2.2煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤。7.2.3结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)。7.2.4磷酸盐缓冲液。7.2.5无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。7.2.61mol/L氢氧化钠(NaOH)：称取40g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中。7.2.71mol/L盐酸(HCl)：移取浓盐酸90mL，用蒸馏水稀释至1000mL。7.3检验程序大肠菌群MPN计数的检验程序见下图。7.4操作步骤7.4.1样品的稀释7.4.1.1液体样品，以以无菌吸管吸取25mL样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制检样25ml样品+225ml稀释液，均质10倍系列稀释36℃±1℃48h±2h选择适宜三个连续稀释度的样品匀液，接种LST肉汤管。不产气产气36℃±1℃48h±2h不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性查MPN表报告结果BGLB肉汤成1：10的样品匀液。7.4.1.2样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/L氢氧化钠(NaOH)或1mol/L盐酸(HCl)调节。7.4.1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注入9ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。7.4.1.5根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。7.4.2初发酵试验每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液)，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤，每管接种1mL(如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤)，36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h±2h。记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。7.4.3复发酵试验用接种环从所有48h±2h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中，36℃±1℃培养48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。7.4.4大肠菌群最可能数(MPN)的报告根据大肠菌群阳性管数，检索MPN表，报告每毫升样品中大肠菌群的MPN值。