细胞株管理规定

细胞株管理规定目前负责人员：薛雪、张旭、蒋乔、马会利、马晓溦目前实验室拥有的细胞株：细胞株名称种类来源负责人现存位置KB-3-1人宫颈上皮癌细胞NIH薛雪Track5box1KB-CP20人口腔表皮癌顺铂抗性细胞(20μg/ml)NIH薛雪Track5box2.3BEL7404人肝癌细胞NIH张旭Track5box47404-CP20人肝癌顺铂抗性细胞(20μg/ml)NIH张旭Track5box5PC-3人前列腺癌细胞PaulWang蒋乔Track5box8PC3-R人前列腺癌顺铂抗性细胞(1μg/ml)王英泽筛选蒋乔Track4box3Hela人宫颈癌细胞来源广泛蒋乔Track3box1Hela-luc人宫颈癌细胞蒋乔Track3box2MCF-7人乳腺癌细胞孟洁马会利Track3box5MCF-7R人乳腺癌阿霉素细胞孟洁马会利Track4box4Caco-2人结肠癌细胞西安交大薛雪RTE大鼠气管上皮细胞协和细胞中心蒋乔Track1box5293T人胚肾细胞生物物理所张旭Track3box4HepG2人肝癌细胞聂广军组马会利Track3box6BHK小鼠肾细胞生物物理所马晓溦B16小鼠黑素瘤不明马晓溦H24小鼠肝癌不明马晓溦RAW巨噬细胞聂广军组马晓溦负责人职责：1.如有新进细胞株，请告知单姝娴，由单姝娴分配给专门负责人进行细胞的冻存保种；2.实验室任何人员需要复苏细胞，需要提前一个工作日通知该细胞株的负责人，经允许后方可使用；3.负责人需监督使用人员做好存取细胞记录，使用人员的细胞复苏情况必须反馈给负责人，并做好记录；4.定期整理细胞株：，负责人需对对半年以上未复苏的细胞株进行维护，重新复苏并做好细胞状态的记录；5.为防止细胞变异，负责人仅对复苏细胞的Y1-Y3代进行冻存，密度不小于1/4皿；对肿瘤细胞的形态，生长周期进行密切观察，如发生明显变化，则不做冻存处理；6.若复苏细胞人员复苏同一细胞株两次均未成活，需通知负责人进行检查和复苏，如贮存细胞确实出现问题，则及时清理。冻存条件及方法：冻存条件：建议采用40-50%FBS+8%-10%DMSO+该细胞株无血清培养基冻存方法：a)梯度冻存：4℃——1h；-20℃——30min；-80℃——过夜b)使用冻存盒：直接放入-80℃冰箱中过夜（有些细胞不适应此种方法）复苏方法：1)打开水浴，将培养基放入水浴中，待其稳定至37℃；2)细胞从液氮内取出后，应快速将细胞放于37℃水浴中，轻轻振摇，使其溶化，(尽量避免溶化前冻存管脱离水浴)；3)将溶化后将细胞冻存悬液离心，转速1000rpm，3min,后弃去上清，使细胞重悬在新鲜培养液中，进行培养；4)细胞在培养箱中贴壁24h后，更换新鲜培养基，待其长满，进行传代。液氮罐的使用：1)开启液氮罐时，请带好防护工具，防止冻伤；2)使用细胞的人员应做好复苏记录，格式如下：日期开启人/冻存人细胞株/位置开启原因复苏结果2010-5-10张旭/薛雪KB-3-1/蓝-2-3(5)目前培养细胞状态改变死亡3)负责人应做好细胞整理保藏记录，格式如下：细胞株冻存时间/负责人复苏时间/负责人取出位置冻存位置复苏结果KB-CP202009-08-07/王英泽2010-04-15/薛雪红-3-5(6)红-3-5(6-10)成活4)请使用细胞的同学珍惜冻存细胞同学的劳动，禁止短期内取用同一细胞株的多5)管冻存细胞，复苏后自行冻存细胞以供自己的实验使用，存于-80℃冰箱，必须写明细胞种类、冻存时间、冻存人等细节。细胞复苏记录日期开启人/冻存人细胞株/位置开启原因复苏结果细胞整理保藏记录细胞株冻存时间/负责人复苏时间/负责人取出位置冻存位置复苏结果