细胞生物学期末考核实验报告

武汉生物工程学院细胞生物学期末考试自主实验设计实验报告系别：生物工程专业：生物工程班级：❤❤级生本❤班姓名：❤❤❤学号：❤实验课程：细胞生物学实验实验名称：不同金属离子对植物凝集素凝血作用的影响日期及节次：2012-6-1指导老师：❤❤❤实验室房间：生化405成绩：（可按实验目的、实验原理、实验用品、实验步骤、实验结果及处理、问题和讨论格式填写）一、实验目的：1、学会自主利用控制变量法设计实验2、掌握植物凝集素的凝血活性的影响因素二、实验原理：1、凝集素是一类具有糖专一性、可使细胞凝集的糖蛋白，它能与糖专一性、非共价可逆结合，广泛存在于植物、动物等生物细胞膜上、细胞质内和细胞外基质中，与细胞问的粘着、细菌的感染宿主、受体介导的胞饮、宿主巨噬细胞清除入侵细菌、胚胎发育和机体代谢的调节控制、精子与卵细胞的识别、分子或离子的传递、雌性受粉、共生固氮、植物防御病原体入侵和保护造血干细胞等生理过程密切相关。2、金属离子有从一价到多价，不同的离子对植物凝集素的影响也是不一样的，当凝集素遇到重金属时，由于其糖蛋白的本质，会发生变性，当遇到一价、二价、三价离子时也会对植物凝集素产生不同程度的影响。三、实验材料：1、器材：离心机、离心管、移液枪、枪头、96孔板2、试剂：生理盐水，PBS，KCl、AgNO3、NaCl、CuSO4、MgCl2、Cacl2、FeCl3、Alcl3溶液3、材料：鸡血（含肝素钠）四、实验步骤：1、制备鸡血红细胞悬液鸡血（含肝素钠）2ml+生理盐水8ml→1500rpm离心10min→弃上清，8ml生理盐水重新混匀→1500rpm离心10min→弃上清，8ml生理盐水重悬→1500rpm离心10min→弃上清，8ml生理盐水重悬至2%备用2、取洁净的干燥96孔板，向其中的10×6的孔板中各加入50ul的PBS缓冲液3、在1号孔中加入25ul植物凝集素，在2号孔中加入25ulPBS缓冲液，第一行和第二行其他孔中依次加入不同的离子溶液，按照KCl、AgNO3、NaCl、CuSO4、MgCl2、Cacl2、FeCl3、Alcl3的顺序每一列的第一二两个孔中各加入50ul4、从第二行往下进行梯度稀释，形成金属离子浓度的倍比梯度，待全部稀释完后，将第一行孔中的溶液混匀，吸弃50ul5、从第二行开始分别向3—10列的孔中加入25ul的植物凝集素，第一行的3—10孔中加入25ul的PBS缓冲液6、依次向所有的孔中快速加入25ul制备好的血细胞悬液，静置30min7、观察，记录并分析实验结果五、实验结果：阳性阴性K+Ag+Na+Cu2+Mg2+Ca2+Fe3+Al3++--++-++-++++++++实验组++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++注：+++最强凝血活性；++强凝血活性；+有凝血活性；-不凝血；H溶血六、结果分析：1、Ag+、Cu2+、Ca2+、Fe3+、Al3+这些金属离子对血细胞本身就有变性作用，未加凝集素时血细胞的变化程度较为明显，而K+、Na+、Mg2+这些金属离子对血细胞几乎不会产生使其变性的作用，但二价的Mg2+离子对血细胞的影响相对于一价的K+、Na+而言，又有一些些微的影响2、当金属离子的浓度倍比稀释到第三次时，由于金属离子对血细胞造成的的影响就可以忽略不计了，所以在以后的实验设计中要排除金属离子对血细胞的影响可以直接将金属离子倍比稀释三次，在进行相关实验的研究3、Cu2+和Ag+这些重金属离子对血细胞的影响比Ca2+、Fe3+和Al3+等这些生物体所含有的微量元素离子大一些，同时像K+、Na+、Mg2+这些生物体所含量相对大一些的元素离子对血细胞的影响则显得十分不明显4、对血细胞不会造成损伤的浓度的Cu2+、Ca2+、Fe3+、Al3+这些金属离子对植物凝集素凝血活性具有促进作用，能够提高其凝血活性，而K+、Na+的作用下植物凝集素的凝血活性则有所降低，Mg2+作用下植物凝集素的凝血活性几乎没有什么变化，Ag+处理后的凝集素对血细胞的凝血活性则大大降低，几乎看不到凝集的血细胞由右向左依次为1—10号由上到下依次为1—6号