第3次课天然产物研究实验室技术1(提取)

天然产物化学天然产物研究实验室技术ⅠNaturalProductChemistry生物科学与工程学院生化与分子生物学天然产物化学2019/12/202要求掌握的内容1、中药或民族药物防病治病的物质基础是天然药物中的活性成分；2、溶剂提取法的基本原理：相似相溶原理；3、掌握常用溶剂的极性大小及各自的特点；4、掌握溶剂极性梯度系统分离法；天然产物化学2019/12/2035、掌握两相溶剂萃取法的原理及影响因素；6、掌握分配色谱、吸附色谱、凝胶色谱和离子交换色谱的工作原理7、掌握提取分离过程中人工修饰物的常见条件和因素。8、天然产物结构鉴定方法天然产物化学NaturalProductChemistryCollegeofBiologicalSciencesandEngineering巴马亭粗品80-90%EtOH回流不溶物EtOH液加HCl调pH=2-3放置，过滤析晶滤液（盐酸巴马亭）加硫酸、锌粉，加热（干燥、氢化）不溶物热滤液冷却，过滤四氢巴马亭硫酸盐热溶75%EtOH中，趁热过滤不溶物滤液加氨水调pH=8.5-9，过滤四氢巴马亭天然产物化学NaturalProductChemistryCollegeofBiologicalSciencesandEngineering长春花全草（干粉80目）苯渗漉苯渗漉液药渣用酒石酸（6%）水液萃取苯液H+/H2O(pH=4)过滤，氨水碱化至pH=6~7CHCl3提取CHCl3(弱碱性Alk)H2O回收氯仿，蒸干，溶于无水乙醇加H2SO4调pH=3.8~4.1，Alk沉淀Alk硫酸盐溶于H2O，氨水碱化至pH=8~9CHCl3萃取CHCl3H2O回收氯仿游离Alk(混合碱)溶于苯：氯仿(1:2)液中通过Al2O3吸附柱用苯:氯仿(1:2)洗脱长春碱醛基长春碱有机溶剂提酸溶碱化除水杂除脂杂精制色谱法分离除脂杂除水杂碱性较强的被除去强碱成盐弱碱游离天然产物化学NaturalProductChemistryCollegeofBiologicalSciencesandEngineering总生物碱H+/H2O(2%H2SO4、2%酒石酸等)H+/H2O不溶物有机溶剂萃取(CHCl3、苯等)有机溶剂H+/H2O(弱碱性Alk)(中强、强碱性Alk)1~2%NaOH萃取氨水调pH=9~10有机溶剂萃取OH-/H2O有机溶剂NH4Cl/有机溶剂有机溶剂酚性弱碱性Alk非酚性弱碱性Alk有机溶剂OH-/H2O1~2%NaOH萃取OH-/H2O有机溶剂NH4Cl/CHCl3CHCl3pH12n-BuOH萃取酚性叔胺Alk非酚性叔胺Alkn-BuOH水溶性Alk酸化加生物碱沉淀剂过滤沉淀两种途径天然产物化学2019/12/207概述一、提取分离的意义：天然产物化学2019/12/208二、提取分离的前期工作天然产物化学2019/12/209三、综合运用多种分离方法和手段先运用不同溶剂提取分离，将主要成分或易分离的成分或有效部位提取出来，并结合简便有效的化学、色谱及生物检测手段指示追踪分离；对于含量低、活性高的成分则可通过柱色谱(CC)、制备薄层色谱（PTLC）、高效液相色谱（HPLC）等方法分离。天然产物化学2019/12/2010非洲卵叶美登木(Maytanusovatus)KB细胞为导向美登碱(maytansine)广西美登木(M.guangxiensis)天然产物化学2019/12/2011第三章（1）概述：成分复杂糖类、蛋白质、脂类、叶根素、树脂、鞣质、无机盐等（多为无效成分）生物碱、萜类、黄酮、香豆素等次生代谢产物含量低，但生物活性广泛。§1.有效成分的特征天然产物化学2019/12/2012麻黄（Ephedraequisetina）左旋麻黄素（l-ephedrine）止咳平喘天然产物化学2019/12/2013甘草（Glycyrrhizauralensis）甘草酸(glycyrrhizicacid)抗炎、抗过敏、治疗胃溃疡天然产物化学2019/12/2014第三章（2）生物活性多样性1.研究历史悠久：吗啡、毛地黄毒苷、麻黄碱，利血平是早期从民间药物中开发出来的；2.植物粗提物的活性优于单一成分（成分间的协同作用），说明复方研究的重要性。天然产物化学2019/12/2015第三章（3)有效成分可变性影响有效成分含量的因素有：植物器官、植物生长环境、生长季节、海拔等；采收、干燥、储存和提取分离方法对有效成分的含量也有影响。天然产物化学1文献2系统预试→化学成分种类3提取溶剂（根据目的成分选择）水（鞣质、糖类、蛋白质）冷水、热水HCl、NaOH→成盐溶出醇（乙醇、甲醇）95%→alkaloids60-70%→皂苷、黄酮苷40-50%→强心苷丙酮、乙酸乙酯、氯仿等（苷元）提取天然产物化学4提取方法（根据提取目的、要求和条件选择）冷浸法（3-4次）渗漉法：热不稳定物、可按极性梯度提取煎煮法（3-4次）回流提取（3-4次）连续回流提取法超临界流体萃取超声波提取微波提取天然产物化学天然产物化学天然产物化学NaturalProductChemistryCollegeofBiologicalSciencesandEngineering天然产物化学NaturalProductChemistryCollegeofBiologicalSciencesandEngineering天然产物化学粗分细分天然产物化学二、分离1分类粗分（部位分离）细分（部位分组）单离（单体成分分离）天然产物化学天然产物化学天然产物化学天然产物化学2方法色谱法（平面色谱、柱色谱、逆流色谱）结晶天然产物化学平面色谱薄层色谱TLC(ThinLayerChromatograph)功能：定性分析（预试、指导分离)对照—标准品种类：硅胶G,GF254、RP-18、聚酰胺显色：通用—碘、H2SO4/EtOH专属—alkaloids,flavonoids硅胶H-不含粘合剂；硅胶G-含煅石膏粘合剂；硅胶HF254-含荧光物质，可用于波长为254nm紫外光下观察荧光；硅胶GF254-既含煅石膏又含荧光剂.天然产物化学天然产物化学实例：紫杉醇和三尖杉宁碱分离中的跟踪检测展开剂：二氯甲烷－正己烷－甲醇－三乙胺（3.5:4.5:0.5:1）NHOOOOHOOOOHOOOHOOOH注意事项：多元展开剂不能反复使用，须即配即用；严格控制组分比例；预饱和10min，减少边缘效应天然产物化学天然产物化学制备薄层色谱PTLC（PreparativeTLC）功能：制备（达g级）1、吸附剂（adsorbents）材料：Silicagel尺寸：20*20,20*40cm厚度：0.5-2mm2、样品带手工、自动点样器样品带宽的解决方法：用极性流动相展开约2cm，使带变窄用带浓缩带的板子天然产物化学3、流动相选择三角形法则4、样品的收集洗脱显色：定位转移洗脱天然产物化学5、PTLC制备样品时引入的杂质粘合剂杂质指示剂Other(分解物)(Al2O3作吸附剂)解决办法：SephedexLH-20天然产物化学天然产物化学6、TLC技术的发展HPTLC巨形板TLC不锈钢板(60*60cm)；厚度：5mm上样量＞10g带浓缩带TLC二维TLC多次展开（同方向）双向展开天然产物化学加压薄层色谱OPLC（OverpressureLayerChromatography）又称OverpressureTLC(OPTLC)1、简介1979年，HPTLC吸收HPLC的某些特点：平面、细颗粒、蒸气相、恒流速天然产物化学2、特点与传统PTLC比较效率50mg~0.5g；1h3、制备型OPLC联机检测、分段收集4、应用氨基酸，多肽，胡萝卜素，生物碱等天然产物化学Clicktoeditcompanyslogan.NaturalProductChemistry