酶活力计算公式

固态发酵漆酶活性测定：酶液制取：5g发酵样品以1:20（W/V）比例用蒸馏水悬浮，200r/min摇3h，之后5000r/min离心20min。（上清用0.45µm滤纸过滤，于-20℃保存滤液，取能整除的滤液体积用于漆酶活性测定。）酶活反应体系3.0mL（2.3mL0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液；pH=4.50.5mL粗酶液稀释液；0.2mL1mmol/L的ABTS）420nm处测定吸光值的变化。此实验固态发酵漆酶活性计算公式：5g0.5mL100mLLT36000V10)g(/U3420酶总ODVNN：酶液稀释倍数V总:漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）V酶:反应添加的酶液体积（mL）△OD420:t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值36000:420nm处ABTS氧化态的摩尔吸光系数(L/mol·cm)T：反应时间（min）L为比色皿的直径（cm）。100mL/(0.5mL×5g)：固态变成液态的稀释倍数液态发酵漆酶活性测定：酶活反应体系3.0mL（2.3mL0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液；pH=4.50.5mL粗酶液稀释液；0.2mL1mmol/L的ABTS）LT36000V10)g(/U酶3420总ODVNN：酶液稀释倍数V总:漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）V酶:反应添加的酶液体积（mL）△OD420:t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值36000:420nm处ABTS氧化态的摩尔吸光系数(L/mol·cm)T：反应时间（min）L为比色皿的直径（cm）。固态发酵锰过氧化物酶（MnP）活性测定：酶液制取：粗酶液制备发酵过程中每隔2d取5g发酵物于250mL三角瓶中，加入100mLH2O，在200r/min的摇床中振荡提取3h，之后5000r/min离心20min。（用滤纸过滤后，取滤液用于测定MnP酶活性。）在4mL反应体系中含50mmol/L(pH4～5)的乳酸钠缓冲液3.4mL，1.6mmol/L的硫酸锰溶液0.1mL，酶液0.4mL，预热至37℃时，加1.6mmol/L的H2O2溶液0.1mL启动反应。在238nm紫外光处，测定反应4min内OD238差值。在对照组中，以煮沸灭活15min酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液，其他反应物不变。每分钟使1μmol/L的Mn2+转化为Mn3+所需的酶量为1个酶活力单位(U)。(ε238=6.5mM-1.cm-1)此实验固态发酵MnP活性计算公式：5g0.4mL100mLLT6500V10)(/U3238酶总ODVNmLN：酶液稀释倍数V总:漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）V酶:反应添加的酶液体积（mL）△OD420:t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值6500:238nm处Mn2+转化为Mn3+摩尔吸光系数(L/mol·cm)T：反应时间（min）L：比色皿的直径（cm）100mL/(0.4mL×5g)：固态变成液态的稀释倍数液态发酵锰过氧化物酶（MnP）活性测定：锰过氧化物酶（MnP）活性测定在4mL反应体系中含50mmol/L(pH4～5)的乳酸钠缓冲液3.4mL，1.6mmol/L的硫酸锰溶液0.1mL，酶液0.4mL，预热至37℃时，加1.6mmol/L的H2O2溶液0.1mL启动反应。在238nm紫外光处，测定反应4min内OD238差值。在对照组中，以煮沸灭活15min酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液，其他反应物不变。每分钟使1μmol/L的Mn2+转化为Mn3+所需的酶量为1个酶活力单位(U)。(ε238=6.5mM-1.cm-1)此实验固态发酵MnP活性计算公式：LT6500V10)(/U酶3238总ODVNmLN：酶液稀释倍数V总:漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）V酶:反应添加的酶液体积（mL）△OD420:t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值6500:238nm处Mn2+转化为Mn3+摩尔吸光系数(L/mol·cm)T：反应时间（min）L：比色皿的直径（cm）固态发酵木质素过氧化物酶（LiP）活性测定：酶液制取：5g发酵样品以1:20（W/V）比例用蒸馏水悬浮，200r/min摇3h，之后5000r/min离心20min。（上清用0.45µm滤纸过滤，于-20℃保存滤液，取能整除的滤液体积用于木质素过氧化物酶活性测定。）测酶活：3mL反应混合液包括3.4mL酒石酸钠（250mM，pH3.0），0.1mL10mM藜芦醇，0.4mL酶样品。在30±1℃下温浴5min后，于反应加入0.1mL10mMH2O2启动酶促反应，以煮沸灭活15min酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液作对照，测OD310(ε310=9.3×103M−1cm−1)处反应5min前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）的定义：每min氧化藜芦醇生成1μM藜芦醛消耗的酶量。此实验固态发酵LiP活性计算公式：5g0.4mL100mLLT9300V10)(/U酶3310总ODVNmLN：酶液稀释倍数V总:漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）V酶:反应添加的酶液体积（mL）△OD420:t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值9300:310nm处摩尔吸光系数(L/mol·cm)T：反应时间（min）L：比色皿的直径（cm）100mL/(0.4mL×5g)：固态变成液态的稀释倍数液态发酵木质素过氧化物酶（LiP）活性测定：测酶活：3mL反应混合液包括3.4mL酒石酸钠（250mM，pH3.0），0.1mL10mM藜芦醇，0.4mL酶样品。在30±1℃下温浴5min后，于反应加入0.1mL10mMH2O2启动酶促反应，以煮沸灭活15min酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液作对照，测OD310(ε310=9.3×103M−1cm−1)处反应5min前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）的定义：每min氧化藜芦醇生成1μM藜芦醛消耗的酶量。此实验固态发酵LiP活性计算公式：LT9300V10)(/U酶3310总ODVNmLN：酶液稀释倍数V总:漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）V酶:反应添加的酶液体积（mL）△OD420:t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值9300:310nm处摩尔吸光系数(L/mol·cm)T：反应时间（min）L：比色皿的直径（cm）