第三组培养基的制备

培养基的制备组员：王雯雯许帅刘腾张凯华一、目的要求了解并掌握培养基的配制、分装方法。学习微生物实验的一些准备方法（灭菌培养皿的准备、灭菌吸管的准备、无菌水的准备、培养基平板和斜面的准备等），为后续实验做准备。二、培养基的类型按培养基成分来源分类：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按培养基的物理状态分类：液体培养基、固体培养基、半固体培养基按培养基的用途分类：实验室用培养基、生产用培养基、根据所培养微生物的类群与营养类型区分实验室常用的培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）、马铃薯蔗糖琼脂（PSA）培养基、牛肉膏蛋白胨培养基（NA）、伊红美兰培养基、麦芽汁培养基、高氏I号培养基、察式合成培养基三、实验原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。四、实验器材试剂：蛋白胨、牛肉膏、NaCl、琼脂、乳糖、K2HPO4、猪胆盐、2％伊红Y溶液，0.65％美兰溶液，0.04％溴甲酚紫水溶液、15%NaOH溶液、5%HCl溶液。器皿及材料：天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸（7.2-7.4）、量筒（500ml、1000ml）、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶（500ml）、漏斗、分装架、移液管（2ml）、平皿、玻璃棒、烧杯、试管架、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱，杜氏小管等。五、操作方法1、培养基的制备a、营养琼脂培养基（1）配方：牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g琼脂15—20g蒸馏水1000mlpH7.2—7.4（2）制法：将称好的牛肉膏、蛋白胨及NaCl放入搪瓷缸中，加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，再加入15％氢氧化钠2ml，校正pH7.2－7.4，在石棉网上加热溶解。将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。（3）分装：取玻璃漏斗一个，放在铁架台上，将培养基分装进试管（18×180），其装量不超过管高的1/5，分装三角瓶的量不超过三角烧瓶容积的一半为宜。（4）加塞：培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以防止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。（5）包扎：加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。（6）灭菌：一般培养基是在1.05㎏/㎝121.3℃，15-30分钟高压蒸汽灭菌。（7）搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。b、伊红美蓝培养基（EMB培养基）（1）配方：蛋白胨10g乳糖10gK2HPO42g琼脂17g2%伊红水溶液20ml0.65％美蓝水溶液10ml蒸馏水1000mlpH7.1（2）制法：将称好的蛋白胨、乳糖及K2HPO4放入搪瓷缸中，加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，再加入15％氢氧化钠校正pH7.1。（3）分装：取玻璃漏斗一个，放在铁架台上，将培养基分装进分装进三角瓶，量不超过三角烧瓶容积的一半为宜。（4）包扎，同上（5）灭菌，同上C、乳糖胆盐发酵管（1）配方：蛋白胨20g猪胆盐5g乳糖10g0.04％溴甲酚紫水溶液25ml蒸馏水1000mlpH7.4（2）制法：将称好的蛋白胨、乳糖及猪胆盐放入搪瓷缸中，加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，再加入15％氢氧化钠校正pH7.1，再加入指示剂。（3）过滤和分装：取玻璃漏斗一个，在玻璃漏斗中放一层滤纸，放在铁架台上，将培养基分装进试管，每管10ml，并放入小倒管。（4）包扎，同上（5）灭菌，同上2、无菌检查将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。六、思考题1、微生物的培养基应具备哪些条件？为什么？2、制备培养基的一般程序是什么？3、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？谢谢观赏!