甲醇残留量测定方法学研究

甲醇残留量测定方法学研究氢溴酸高乌甲素在提纯工艺中使用了甲醇，为保证用药的安全，有必要对用对甲醇残留量进行控制，建立了气相色谱法测定氢溴酸高乌甲素中甲醇的残留检测方法。1.检测仪器上海天美GC7890Ⅱ型气相色谱仪、北京中兴分析仪器HeadspaceSampler顶空进样器、T2000P工作站、北京东方精华苑SGH-300高纯氢发生器、SGK-2LB低噪音全自动空气发生器、色谱柱毛细管柱DG401填料，柱长30米2.试药与试剂甲醇：色谱纯（美国天地），水：针剂车间提供（注射用水）氢气：高纯（99.999%），氮气：高纯（99.999%），空气：空气发生器，高纯（99.999%）3.系统适应性试验试验要求：分离度：分离度≥1.5%；柱效：理论塔板数≥1000；经过多次实验，选择下列色谱条件可达到要求：检测器温度：250℃；柱温：150℃；进样口温度：200℃；进样瓶温度：110℃；进样管温度：120℃；平衡时间：10分钟；加压时间：0.1分钟；进样时间：1.0分钟进样量：顶空进样1mL；样品低流速震摇2分钟。试验操作：精密称取甲醇30.0mg,于事先加水70mL的100ml容量瓶，超声10分钟，用水稀释至刻度，摇匀。精密量取1.0mL于顶空瓶中，封瓶，按色谱条件，进样1ml。记录色谱图，分离度及柱效结果见表1（附图1）表1：分离度及柱效结果成分名保留时间分离度柱效甲醇1.6980.001688未知3.1084.2213354．线性关系考察要求：r≥0.98精密称甲醇，以水为溶剂，用超声处理，分别配制成不同浓度的标准溶液，分别取不同浓度的标准溶液1mL,封瓶，按色谱条件，进样1mL,记录色谱图，以峰面积积分值为纵坐标，甲醇含量为横坐标，绘制标准曲线。（见图2、3、4、5、6、7）由图可见，甲醇在0.1mg/mL-0.6mg/mL之间，峰面积与量呈线性关系。计算回归方程Y=11377X+25.606r=0.99962（见表2）表2甲醇线性关系考察结果对照(mg/mL)0.1000.2000.3000.4000.5000.600峰面积1250.350362237.076803497.387654494.711205676.381626915.536035、精密度试验要求：RSD≥2.0%精密称甲醇，以水为溶剂，用超声处理，分别配制成0.3mg/ml浓度的标准溶液，取标准溶液1ml,封瓶，按色谱条件，进样1ml,记录色谱图，重复进样6次。计算精密度，结果见表3（附图8、9、10、11、12、13）甲醇精密度试验结果进样序号峰面积积分值平均值RSD%13453.125993501.989131.2723486.5621133488.4579843505.5426653566.2356763573.256916.稳定性试验精密称甲醇，以水为溶剂，用超声处理，配制成0.3mg/ml甲醇溶液，密封存放，分别于0、8、24小时取标准溶液1ml,封瓶，按色谱条件，进样1ml,记录色谱图，结果见表4（附图14、15、16）甲醇稳定性试验结果进样时间(小时)0824平均RSD%加入标准量0.3mg/ml0.3mg/ml0.3mg/ml0.3mg/ml0.30峰面积3453.125993437.025593456.587923448.913177.回收率试验采用加样回收法，精密称050101批号样品(0.1g)9份，分别加入0.24mg/mL、0.3mg/mL、0.36mg/mL的标准溶液1ml，封瓶,，按色谱条件，进样1ml,记录色谱图，按标准曲线计算含量，计算回收率结果见表5（见图17、18、19、20、21、22、23、24、25）注050101批样品甲醇残留量是0.002%结果表明：本方法具有良好的回收率，甲醇平均回收率为100.0%；表5甲醇加样回收试验试验号加入量(mg/ml)测得峰面积测得量(mg/ml)回收量(mg/ml)回收率%平均%10.242782.286690.24230.2403100.1100.020.242763.467520.24060.238499.330.242783.548790.24240.2404100.240.303468.256890.30260.3006100.250.303458.128800.30170.299799.960.303470.456890.30270.3007100.270.364143.447730.36190.3599100.080.364132.756620.36100.359099.790.364158.256680.36320.3652100.38.检测限按色谱条件，逐级稀释0.3mg/ml的甲醇溶液，采用3倍信噪比为检测限，通过测定，甲醇的检测限为0.1ug/ml(附图26)；9.三批样品测定结果按质量标准草案进行三批样品的测定，测定结果见表6（附图26、27、28、29、30、31、32）结果表明三批样品均符合规定。表6三批样品测定结果批号甲醇残留量（％）20091101C0.0420091102C0.0620091103C0.05