灰树花多糖物质的提取及体外抗氧化活性评价

天津天狮学院2016届本科生毕业设计（论文）开题报告课题题目灰树花多糖物质的提取及体外抗氧化活性评价学生姓名赵春艳学号121051220专业班级生物工程2班题目来源□科学技术√生产实践□社会经济□自拟□经典□其它题目性质□理论研究√应用研究□工程设计□软件设计□其他成果形式√论文□设计说明书□实物□软件□作品同组同学一、选题的依据及意义灰树花（Grifolafrondosa），担子菌亚门科，层菌菇，非褶菌目，多孔菌科，树花菌属，又名贝叶多孔菌，栗子蘑，佛菌，重菇等，日本俗称舞蘑[7]。灰树花常生长于夏秋季节的栗树周围，灰树花子实体内质柄短、呈珊瑚状分枝，外观似菊花;气味清香，沁人心脾;肉质脆嫩清爽，营养丰富具有很好的保健作用和很高的药用价值。灰树花在民间有较长的药用历史，早年日本学者著作《菌谱》记载了灰树花的药用价值“味甘、平、无毒，可治痔。”我国中医则认为灰树花有“扶正固本”之功效[17]。近年国外一些国家对灰树花药理作用的研究表明了:灰树花的药用活性物质为“灰树花多糖”，灰树花多糖具有显著的抗肿瘤[15]、抗HIV病毒、抗凝血、降血糖、降血脂、降压作用，对高血压、糖尿病有一定的疗效，能改善免疫功能以及抗肝炎等作用，且无任何毒副作用[14]。近年来，美国食品和药物管理局证实灰树花提取物可治疗晚期乳腺癌和前列腺癌，因此对于灰树花多糖类制剂或多糖类保健品的开发，具有很好的市场前景。由于提取条件的不同，对于灰树花多糖的提取及生物活性有着一定的影响。一般用单因素实验法和正交实验法对热水浸提、超声波辅助和微波辅助灰树花的多糖进行提取[1]，主要的提取方法有热水浸提法、酸提法、碱提法等[8]，其目的都是为了提高浸提效率，获得更多的灰树花多糖粗品[3,9]。本研究利用热水浸提法从灰树花中提取多糖，并进行了优化，以获得一种高效、经济的灰树花提取方法，同时对提取的多糖进行了抗氧化研究，为以后更好的开发利用灰树花资源奠定了一定的理论基础。二、国内外研究现状及发展趋势灰树花是当前开发的一种食、药兼用珍稀真菌，其发展前景广阔，国内已进行规模生产，由于富含大量生物活性物质而受到国际、国内菌物学家的关注。近20年的研究发现，灰树花的提取物中中含有一种抗艾滋病抗恶性肿瘤成份，大量的化学和药理分析表明，该成份具有明显的抗艾滋病病毒、调节血糖等作用[12]，对防止癌细胞的生成和转移，治疗艾滋病、肥胖症、糖尿病，以及免疫系统功能紊乱都有很好的疗效[5]。其抗癌作用基理是宿主介导的机体免疫调节作用，即通过增强巨噬细胞的吞噬作用，促进免疫球蛋白的形成，提高机体本身的抗病能力或增强机体对放疗和化疗的耐受性，是一种非直接杀伤癌细胞作用[6]。多糖广泛存在于自然界,是来自高等植物、动物细胞膜、微生物细胞壁中的天然大分子物质,是构成生命活动的四大基本物质之一,并与维持生命所需的多种生理功能密切相关。多糖具有复杂的的生物活性与功能[11],如作为其他海洋生物的营养物资源、降血脂及抗氧化作用、免疫调节活性、抗突变、抗病毒及抗肿瘤等,而且对正常的细胞没有毒副作用,已逐渐发展成为一种免疫疗法,越来越受到研究人员的重视[13]。多糖具有多种生物活性,在生物体内起着重要作用,现已成为国内外众多学科领域研究的热点之一。多糖又称多聚糖,是由单糖缩合成的多聚物,它是生物体内除蛋白质和核酸以外的又一类重要的信息分子[2]。研究表明多糖具有多种生物功能如:增强机体免疫功能、抗肿瘤、抗病毒、降血糖等[10],因此对多糖的研究愈来愈引起国内外生物学家、化学家和药理学家的兴趣,有关专家预言“21世纪将是多糖的时代”。灰树花多糖是灰树花中的一种提取物，是由葡萄糖、丰乳糖、木糖组成的杂多糖[16]。目前，国内对灰树花多糖的研究主要集中在其抗癌症、降血糖以及体外抗氧化性等方面[4]，虽然有一些相关文献对于灰树花多糖的提取以及纯化有相关的报道，但是对于这方面的研究相对较少的。学者们对于灰树花菌丝粉多糖物质的提取及体外抗氧化活性的研究已经有了比较深入的探讨，今后将会有更多的学者对此进行深入探讨和研究。并且会对人类未来医学上、生命学上有更进一步的提升。三、本课题研究内容采用热水浸提法，正交法优化灰树花子实体中多糖物质提取工艺。并对灰树花子实体中多糖提取物进行体外抗氧化活性评价。（一）灰树花子实体中多糖物质提取工艺研究1．单因素实验：分别考察提取温度、提取时间、料液比对灰树花子实体中多糖物质提取率的影响。2．正交实验：在单因素实验的基础上，设计三因素三水平的正交试验，建立灰树花子实体多糖物质含量测定方法，以多糖物质提取率为评价指标，得到最佳提取工艺条件。（二）灰树花子实体中多糖提取物的体外抗氧化活性评价分别测定灰树花子实体多糖还原力、对DPPH自由基、超氧阴离子、羟自由基的清除能力，对灰树花子实体多糖物质的体外抗氧化活性进行综合评价。四、本课题研究方法1.本次实验先采用单因素实验法，热水浸提法提取苦瓜多糖的关键影响因素具体步骤如下：灰树花子实体→加入蒸馏水→微波处理→热水浸提→离心→干燥→去蛋白→无水乙醇沉淀→离心→去沉淀→乙醇洗涤沉淀→干燥→灰树花多糖（粗多糖）在操作过程中影响实验结果的有几个单因素：⑴提取时间；⑵提取温度；⑶料液比。2.采用正交实验方法，以灰树花多糖提取率为指标，确定提取的最佳工艺条件。3.采用苯酚-硫酸法测定灰树花粗多糖中的多糖含量。4.利用灰树花子实体多糖还原力、对DPPH自由基、超氧阴离子、羟自由基的清除能力，对灰树花子实体多糖物质的体外抗氧化活性进行综合评价。五、研究目标、主要特色（创新）及工作进度研究目标：通过研究，可以深入了解小学语文教学目标及教学方法，理解在小学教学中培养学生感受儿童文学的重要意义，掌握培养学生提高儿童文学素养方法与途径，为今后学习语文教学工作打下良好的理论基础。主要特色：本课题将以前人的研究为基础，结合实习中的调查研究和本人的阅读学习，努力把握比较前沿的教学理论，从培养学生的审美感受力入手，培养学生的综合语言能力。工作进度：第一阶段：2015年11月13日至2016年1月22日，查阅中英文文献，完成开题报告，进行开题答辩，完成文献综述；第二阶段：2016年2月29日至3月6日，实验准备工作；第三阶段：2016年3月7日至3月27日，灰树花子实体多糖物质提取单因素实验；第四阶段：2016年3月28日至4月10日，灰树花子实体多糖物质提取正交实验，确定最佳提取工艺；第五阶段：2016年4月11日至4月24日，灰树花子实体多糖提取物的体外抗氧化活性测定；第六阶段：2016年4月25日至5月8日，整理数据，准备撰写论文，完成中期检查报告；第七阶段：2016年5月9日至6月5日，撰写、修改论文，论文定稿；第八阶段：2016年6月6日至6月17日，准备答辩，答辩六、参考文献[1]王雪冰,赵天瑞,樊建.食用菌多糖提取技术研究概况[J].中国食用菌,2010,29(2):3-6[2]朱晓霞,罗学刚.多糖提取与纯化技术应用进展[J].食品研究与开发,2007,28(3):186-189[3]张万秋,朱大勇,林治华.生物多糖的研究进展[J].重庆工学院学报:自然科学版,2008,22(2):39-43[4]边杉,叶波平,吴梧桐,等.灰树花多糖的研究进展.[J].药物生物技术,2004，11(1):60-63[5]茅仁刚,林东昊,洪筱坤,等.灰树花活性多糖的研究进展[J].中草药,2003，34(2):附2-附5[6]李磊,王卫国,郭彦亮,郭家瑞.灰树花多糖的制备及生物活性研究进展[期刊论文]-食品工业科技2009(11)[7]刘振伟,史秀娟.灰树花的研究开发现状[期刊论文]-食用菌2001(4)[8]郑亚凤,谢宝贵,徐培雄,蔡而以，郑金贵.正交法优化三种灰树花多糖提取工艺[期刊论文]-食用菌2008,30（5）[9]YasserF.MKishk_,HananMA,Al-Sayed.Free-radicalscavengingandantionxidativeactivitiesofsomepolysaccharidesinemulsions[J].Articleinpress,2005.11:1-6[10]王健,龚兴国.多糖的抗肿瘤及免疫调节作用研究进展[J].中国生化药物杂志,2001，22(1):52-54[11]尹艳，高文宏，于淑娟．多糖提取技术的研究进展[J]．食品工业科技．2007，(2)：248-250．[12]刘小兵，朴建华．生物活性物质的抗氧化能力评价方法及其研究进展［J］．中国食品卫生杂志，2015，20（5）：440－444．[13]DengG，LinH，SeidmanA，etal.AphaseI/IItrialofapolysaccharideextractfromGrifolafrondosa(Maitakemushroom)inbreastcancerpatients：immunologicaleffects[J].JCancerResClinOncol，2009，135（9）：1215-1221.[14]周国英,兰贵红,何小燕.食用菌多糖研究开发进展[J].实用预防医学,2004，11(1):203-204[15]李小定,荣建华,吴谋成,等.灰树花多糖的抗肿瘤活性及免疫功能的影响[J].中药材,2003，26(1):31-32[16]马迅,雷红,李谦,等.灰树花子实体多糖的分子组成与降血糖作用[J].药物生物技术,2007,14(5):328-333[17]林志彬.灰树花的化学物质与药理作用[C].首届中国食用菌养生研讨会交流材料,2003指导教师意见（课题难度是否适中、工作量是否饱满、进度安排是否合理、工作条件是否具备等）指导教师签名：年月日教研室及二级学院意见（选题是否适宜、各项内容是否达到毕业设计（论文）大纲要求、整改意见等）教研室主任签字：二级学院院长签字（章）：年月日