牛人工授精技术培训.

牛人工授精技术员培训萨吾塔力.达吾肯伊犁畜牧科学研究所13565246918牛冷配改良技术要点•1、子宫解剖•2、发情鉴定•3、卵泡与黄体•4、输精时间•5、输精部位•6、难孕牛治疗1、子宫解剖2、发情鉴定3、卵泡与黄体牛冷冻精液配种的工作房间的要求(1)有3-5平方米的面积，能放下一个液氮罐和一张工作用桌；使用一间独立的房屋或在一个避静、卫生的房间选用一个角皆可。地面以水泥或砖地为好，易打扫，灰尘少。(2)房间应有水、电，房间及周围环境应干净、卫生、干燥、通风。(3)每日应打扫地面卫生，擦去桌面和器具的尘土，一周(至少一个月)应大扫除一次。(4)房间内不能存放有挥发性气味的药品，室内禁止吸烟、禁止堆放与工作无关的物品。牛冷冻精液解冻注意事项(1)所有直接接触冷冻精液的器具及容器都应是灭菌消毒过的。防止液氮罐内和解冻过程中的污染，如镊子、装解冻液和精液的容器等(2)32－38℃是适宜的解冻温度，温度低了影响精子的恢复，高于42℃会使精子迅速死亡；冷冻精液解冻后的存放注意事项(1)解冻后就应将精液从水浴中取出，长时间放在较高的温度下，会加速精子的衰竭；(2)解冻后尽快输精，常用的解冻液成分比较简单，不能长时间保存精液，解冻后输精越快越好，细管冷冻精液最多不能超过1小时，颗粒冷冻精液最多不能超过2小时；(3)解冻后不能再次急剧的升温或降温，否则会影响冻精的活力；(4)解冻后需要远距离运输的，可用10－15℃解冻，解冻后用棉花等包裹好，低温保存(5℃)和携带，可延长精子的存活时间数小时。用显微镜检查精液活力载玻片、盖玻片和其它接触精液的器具应预热，加热时又要注意不能超过40℃。注意使用器具的卫生和溶液的质量。显微镜物镜不要直接沾上了精液。对焦距时将显微镜镜头从下往上运动，先将镜头靠近盖玻片，再逐渐轻缓地上移聚焦，以免损坏镜头和载玻片。用放大100－200倍观察即可，视野大，可看到精液的总体情况，操作容易。输精时间发情开始后8—24h适宜输精时间发情开始发情结束01224排卵输精部位卵泡侧的子宫角基部子宫颈内口处的子宫体基部输精次数1---2次-直把输精操作技术(1)输精员在操作前戴好长臂手套或徒手涂以润滑剂，输精器按操作规程装好精液备用，配种牛保定牢靠；(2)将一只手（左手更方便些）伸入母牛直肠内，掏出粪便，清洗母牛外阴部并擦干。用伸入直肠的手隔着直肠壁找到子宫颈并轻握，主要用大拇指、食指和中指固定和调整子宫颈的位置。另一只手持输精器沿阴道上壁先斜向上，再平直向前，至子宫颈外口处；(3)双手凭感觉协同操作，主要靠伸入直肠的手调整转动子宫颈的方向通过子宫颈。输精器通过子宫颈的螺旋皱襞后，把精液输入刚过子宫颈内口的子宫体基部或卵泡侧子宫角内。直把输精操作注意事项(1)插入输精管时要小心谨慎，不可用力过猛，以防输精器穿破子宫颈或子宫壁(没必要输入太深)。(2)个别母牛努责，直肠壁收缩紧张，子宫颈也向后移。这时，可把手前伸，刺激肠壁，使其放松，然后握住子宫颈向前推，使阴道壁伸展，以便于输精管插入。(3)有些母牛子宫垂入腹腔，可用手握住子宫颈慢慢往上提，才便于输精管通过。(4)有时输精管已到达子宫颈口，就是不好插入，这可能是子宫颈开张不好，有炎症、颈口有疤痕等，或许是已孕母牛假发情，遇到这些情况要认真检查，诊断清楚，妊娠牛强行深部输精会引起流产。(5)操作时应主要靠直肠内的手调整子宫的位置，不能靠持输精器的手硬戳。(6)术者最好先将阴唇掰开(或由助手协助)，把输精器插入阴道后再将操作手伸入直肠，也可将伸入直肠的手臂往侧下压，使阴门裂张开，这样输精器头部不会碰到阴唇外部，不易被污染。牛配种时间不宜过早•母牛发情持续时间18-24小时排卵发情结束后的6-12小时精子在母牛生殖道的存活时间12-20小时精子在子宫和输卵管内获能需数小时卵子排出后能够保证正常受精的时间为数小时母牛发情适时输精时间母牛发情后的12-24小时是适宜的输精时间，6-27小时也可以。凌晨或上午发情的牛可在下午或傍晚配种，下午或傍晚发情的牛可以在第二天上午配种。一次输精配种，在发情后18-24小时。有些发情持续时间长、排卵延迟的牛需第三次输精，以确保精卵能够结合受精。母牛一次发情输精次数有经验的技术员，在发情开始后的18-24小时一次输精即可达到满意地受胎率(≥60％)。两次输精法，即在母牛发情后约12小时(早晨或上午发情，在下午或傍晚配种，下午发情的牛第二天早配种)第一次输精，间隔约12小时第二次输精。发情时间延长的母牛需第三次输精。输精部位卵泡侧的子宫角基部。子宫颈内口处的子宫体基部两角及子宫体基部三点输精子宫颈难通过的牛也可输入子宫颈深部，当然这会损失一部分精液。常规操作轻缓地将精液输在刚通过子宫颈内口处的子宫体基部。可用食指在子宫颈内口和子宫体部轻轻触摸输精器的头部确定位置。为什么输精部位不能太深？直把输精不是越深越好。没有必要将精液送得超过子宫角的弯曲部，这是因为：(1)精子在发情母牛的子宫内运行的很快。十多分钟甚至几分钟即可到达输卵管，精子在子宫内运行有助于精子的获能。(2)子宫结构子宫角向下弯曲，发情时子宫水肿和充血，输精器插的太深容易损伤子宫内膜，影响了受胎。(3)准确输精如果是左手在直肠内操作，输精器很容易进入右侧子宫角内；如果是右手在直肠内操作，输精器容易进入左侧子宫角。盲目将精液输的太深，可能使排卵侧无精子而使卵子无法受精。细管冷冻精液的解冻和装枪细管取出后首先在空气中停留几秒，然后用32-38℃水浴升温水浴时间0.25ml细管停留约15秒钟，0.5ml装的细管停留约20秒钟。精液溶解后，从水浴中取出，用较干的酒精棉球或灭菌的棉花、卫生纸等擦干细管外壁，再用专用细管剪刀将细管的封口端垂直剪开，开口端朝前装入输精枪，钢芯对准细管棉塞部，法式卡苏枪将枪体放入塑料外套至头部，固定紧备用。日式金属输精枪无外套，将头部与体部旋紧即可。使用细管冷冻精液注意事项(1)不要在温水中浸泡时间太长。(2)水浴解冻的容器最好能将细管冻精解冻时横置，如果需将细管垂直放入，将棉塞端朝下。(3)细管冻精取出后不要急忙将细管放入水中，先在空气中放置几秒，让细管口内的液氮充分挥发，以防止细管“放炮”。(4)剪塑料细管封口时，应使用专用的细管剪刀，这样剪的口齐而且园，输精时精液不易倒流。(5)注意细管和细管剪刀的卫生，因为细管口部分要接触精液。(6)往输精枪里装细管时，将输精枪的钢芯先插入细管的棉塞端口内，以防推精液时钢芯走到细管外。如果推精液时阻力很大，可能就是钢芯跑到细管外了或是钢芯不直。(7)用法式卡苏枪将金属枪体放入塑料外套时要行至塑料外套的头部，否则输精时头部的塑料部分可能会打折。塑料外套长了，应剪去一段。(8)输精部位不能太深，尤其是使用有塑料外鞘的输精枪，许多塑料外鞘的头部不光滑，很容易损伤子宫内膜。(9)输精器枪体不要碰折，钢丝弯曲后推细管棉塞困难。(10)个别青年母牛或土杂种母牛子宫颈开口小，没有输精枪体的直径粗，无法通过子宫颈。碰到这种情况，可用颗粒精液输精，颗粒精液的输精器比细管输精枪细。没有颗粒精液时，可将细管精液推入试管内，加入近1毫升生理盐水或其它解冻液，用颗粒输精器输精。液氮罐在使用中需要注意什么问题？(1)液氮罐放置在荫凉避静处，室内通风。(2)运输和搬运中要防止震荡和碰撞。贮存罐不能作为运输罐使用。(3)罐外保持卫生，罐内注意无菌。许多病菌在液氮低温下不会死亡，液氮罐内也可能传播病菌，因此不要用不卫生的器具接触液氮，不要将不卫生的绳袋等放入罐内。每年应将罐内清洗一次，液氮罐停用时，应将罐内的颗粒等清理干净，否则罐内会生霉菌。(4)取冻精后及时盖罐塞。为了减少液氮消耗，罐口处可用塑料、胶皮等适当密封，但仍要留有通气的缝隙，不可绝对密封。(5)注意液氮面，绝对不能干罐，干罐后罐内保存的东西即报废，液面高度剩1/3时应补充液氮。如果添加不方便，应将精液沉至罐底，浸入液氮中。冷冻精液在取用中应注意什么问题？(1)取冻精时，提筒只允许提至液氮罐颈口水平线下，严禁提出罐口，而且停留时间不能超过10秒，需要继续操作时，应将提筒浸入液氮后再提起操作。(2)向另一液氮罐转移冻精时，提筒离开液氮面的时间不能超过5秒；(3)颗粒冻精要放入系口的纱布袋内，不能直接放入提筒内，否则取冻精后提筒再次入液氮时，提筒内液氮沸腾，冻精会漂出提筒，可将纱布袋口线绳系一个可滑动的活扣，易开易合，取用方便。(4)取冻精的镊子，拴冻精袋的线绳等接触冻精和液氮的物品要卫生。(5)取颗粒冻精时，用止血钳比镊子好，冻精不易滑落。6、难孕牛治疗难孕牛的概念母牛不孕症为暂时性或永久性的繁殖障碍。繁殖率降低，则产奶量下降，饲养管理和治疗及配种开支增大。诊断标准为全年配种牛的纯种奶牛，一般产奶量的母牛产后80天、高产奶牛120天，青年牛20月龄、超过这个时间即属难孕牛。农牧区饲养的牛，由于季节和饲养管理条件的限制，常季节性发情，正常配种3个情期不孕的牛或参加配种70天未受胎的牛为难孕牛。难孕牛诊断(1)调查病史，查明原因、症状、发病头数、年龄、饲养管理、精液品质、输精技术、繁殖史、既往症等。(2)临床检查全身、阴道、直肠检查。(3)实验室检查在实验室做微生物、子宫内膜活组织和激素测定等。先天性不孕症治疗(1)幼稚病—生殖器官发育不全；治疗：公畜刺激；按摩卵巢子宫；激光穴位照射。激素治疗法有：HCG静脉注射或肌肉注射2500-5000单位；PMSG1500IU肌肉注射；雌二醇或苯甲酸雌二醇5-20mg；已烯雌酚5-20mg。(2)两性畸形(雌雄间体，半阴阳)─无法治疗、淘汰；(3)异性孪生不孕—受雄激素影响在性分化中造成，染色体异常，直检时摸不出正常的子宫和卵巢，阴道短小，为盲端，输精器无法插入；这种母牛应淘汰。(4)生殖道畸形单子宫角子宫颈闭锁双颈双口膣肛后天性不孕症治疗(1)营养性：瘦弱、过肥、饲料不全价、品质不良。①VitA10-20万单位，间隔5-7天，用3-4次；②VitD2.5-10万单位，间隔7天用3-4次，同时加强运动和光照；③VitE100-200ml，间隔5-7天使用3次；④日粮中补充比例适当的矿物质和微量元素。(2)气候性：严冬、酷暑。(3)管理性：高产、使役过度。(4)繁殖技术性：漏配，技术操作不过关。(5)衰老性：绝情期13-15岁。休情母牛常用的治疗方法FSH100-200单位生理盐水稀释3-4ml，肌肉注射；LH100-200单位生理盐水稀释3-4ml，肌肉注射；HCG静脉注射2500-5000单位，肌肉注射5000-20000单位；LHRH-A200-1000微克肌肉注射；PMSG1000-2000IU肌肉注射；孕激素注射、埋植或阴道栓法处理9－12天；雌二醇20-30mg一次肌肉注射。三合激素按1ml/100kg肌肉注射；LHRH-A25-100μg，隔9天后PGF2α；电针、激光或催情的中药方剂；垂体后叶素；胎盘组织液20ml；浓盐水灌注子宫。持久黄体的诊断和治疗未妊娠，近期也未配种的母牛，经2-3次检查，同部位存在着同一黄体20天以上可确诊为持久黄体。治疗方法：PGF2α类似物，宫注1支，肌注2-3支。母牛排卵延迟治疗方法排卵延迟是因为LH分泌不足。治疗方法在配种输精时，肌肉注射LHRH-A25μg-100μg或LH200单位或hCG2000-3000单位。在下一次发情配种时应及时用药治疗，以促进卵泡成熟和排卵。母牛卵泡囊肿治疗母牛发生卵泡囊肿是因为LH分泌不足。严重时发展为“慕雄狂”。治疗方法：LHRH-A25-100μg一次肌注；LH200单位一次肌注。HCG2000-3000单位一次肌注或静注；黄体酮50-100mg连续5-7天，肌注；孕激素类避孕药注射、埋植；地塞米松10-20mg肌注；FSH200-400单位，使卵泡成熟排卵；挤破效果不佳，往往会复发；穿刺注射，通过尻部或穹隆部穿剌直接将药注入卵泡；摘除卵巢。母牛黄体囊肿治疗黄体囊肿：未排卵的卵泡黄体化，卵泡直径≥2.5cm，体内ＬＨ不足所致，但母牛表现安静，体内孕激素水平高。这是与卵泡囊肿的主要区