现代分离实验报告

金银花中绿原酸的提取与分离理学院应化133杨希佳2013015028摘要：利用索氏提取法提取金银花中绿原酸，后用硅胶吸附柱层析的办法分离，在利用旋转蒸发仪进行减压浓缩，在用薄层色谱法对所提物进行纯度检测，判断金银花中绿原酸含量的高低，进而判断金银花质量的优劣。一、研究背景：金银花，又名忍冬，为忍冬科多年生半常绿缠绕木质藤本植物。“金银花”一名出自《本草纲目》，是一种有着悠久药用历史的传统中药，金银花初开为白色，后转为黄色，因此得名金银花。药材金银花为忍冬科忍冬属植物忍冬及同属植物干燥花蕾或带初开的花。金银花自古被誉为清热解毒的良药。它性甘寒气芳香，甘寒清热而不伤胃，芳香透达又可祛邪。金银花既能宣散风热，还善清解血毒，用于各种热性病，如身热、发疹、发斑、热毒疮痈、咽喉肿痛等证，均效果显著。作为其中主要有效成分的绿原酸，具有抗氧化，清除自由基，抑制突变和抗肿瘤等药理作用，近年来受到广泛的关注。二、实验试剂和仪器：1、试剂：金银花（金银花花蕾和开放花的混合样品，烘房烘干）、硅胶GF254（薄层层析）、硅胶G（200—250目左右，柱层析）、无水乙醇、甲酸、乙酸乙酯、乙酸丁酯、0.5%羧甲基纤维素钠水溶液、蒸馏水（本实验所用有机、无机试剂均为分析纯）2、仪器：旋转蒸发仪、电热恒温鼓风干燥箱、三用紫外仪、电子分析天平、色谱柱、索氏提取器、烧杯50ml（15个）、500ml（1个）、100ml（2个）胶头滴管、玻璃棒、量筒10ml（1个）100ml（1个）、圆底烧瓶500ml（2个）、研钵、展开缸（2个，一个稍大）三、实验方法绿原酸四、实验步骤1、TLC板的制备与活化在干净的研钵内加入适量硅胶GF254，在轻轻研磨的同时按1：2.5的比例缓慢加入0.5%羧甲基纤维素钠水溶液。继续研磨只均匀，当体系粘稠度适宜时，即可进行铺板。将凉干后的薄板放入预先恒温到105～110℃的烘箱中活化30min。2、提取（索氏法）称取30.16g金银花粗粉，用75%乙醇采用索氏提取器回流处理4h，其提取液减压浓缩、60℃干燥得浸膏9.43g3、分离（1）粗分离取0.95g浸膏，加入0.96g200-300目硅胶拌样，晾干。称取50.04g粗硅胶，加入适量乙酸乙酯使其完全淹没硅胶，搅拌均匀，边加边装柱，干法上样，柱体依次用乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲酸-水（20∶1∶0.1）、乙酸乙酯-甲酸-水（10∶1∶0.1）洗脱。流速控制在每1/10柱体积即可。分部收集，每管约30ml。（2）粗分离过程中薄层检测粗分离过程中对柱子的洗脱情况随时进行薄层检测，展开剂为乙酸丁酯∶甲酸∶水（7∶2.5∶2.5）。从某个流份开始有绿原酸出现（λ254nm下出现暗斑）至几乎看不到暗斑，显示绿原酸已基本收集完全，将暗斑明显的流份与绿原酸做对比点样展开，比较RF值，将较纯的几个组分合并。将包括样品在内的所有组分与绿原酸标样点样展开，比较RF值。由于得到的样品杂质多，绿原酸含量少，所以未进行精制。五、结果与讨论绿原酸RF=1.0/3.50=0.29样品RF1=0.4/3.50=0.11RF2=1.0/3.50=0.29RF3=2.5/3.50=0.71RF4=3.25/3.50=0.93流份ARF1=0.8/3.50=0.23RF2=2.50/3.50=0.71RF3=3.25/3.50=0.93流份B\C斑点过淡，未测量提取率(9.43/30.16)*100%=31.27%样品中只含有少量的绿原酸，而洗脱液中几乎没有。绿原酸分子结构中有酯键、不饱和双键及多元酚三个不稳定部分，易于受热水解为异构体，可能是由于干燥浸膏时温度过高时间过长而发生绿原酸降解。另外，索氏提取器虹吸管略有些堵，造成提取不充分。