果蔬中还原性维生素C的含量纯度测定

实习四果蔬中还原性维生素C的含量测定（一）目的学习和掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中抗坏血酸含量的原理与方法。（二）原理维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。2,6-二氯酚靛酚是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如下：当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。（三）实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料取新鲜水果（蔬菜）样品100g，加100g2％草酸溶液，用组织捣碎机打成匀浆。称取10g匀浆，移入100mL容量瓶，用1％草酸定容至刻度，摇匀后静置备用。CCCCCHCH2OHOOHOHHOHONO-OClClNOHOClCl+（蓝色）OH-H+抗坏血酸2,6-二氯酚靛酚（红色）CCCCCHCH2OHOOOHOHONOHOHClClH还原型2,6-二氯酚靛酚（无色）+脱氢抗坏血酸2．仪器（1）天平（2）组织捣碎机（3）容量瓶（50mL）（4）刻度吸管（5mL，10mL）（5）锥形瓶（100mL）（6）微量滴定管（10mL）3．试剂（1）2％草酸（2）1％草酸（3）标准抗坏血酸溶液（0.1mg/mL）：精确称取50.0mg抗坏血酸，用1％草酸溶液溶解并定容至500mL。临用现配。（4）2,6-二氯酚靛酚溶液：500mg2,6-二氯酚靛酚溶于2000mL含520mg碳酸氢钠（A.R）的热水中，冷却后再用蒸馏水稀释至2500mL，滤去不溶物，贮棕色瓶内，4℃保存一周有效。滴定样品前用标准抗坏血酸标定。（5）1%的淀粉溶液：称取可溶性淀粉10克，加税1滴，搅拌成糊状后倒入100ml沸水中，混匀，冷藏待用。（6）0.1000%mol/L碘酸钾标准储备液精确称取干燥的碘酸钾（AR）2.1400克，用蒸馏水溶解于100ml容量瓶中。（7）0.001%mol/L碘酸钾标准应用液取0.1000%mol/L碘酸钾标准储备液10ml稀释至1000ml，此液1.0ml相当于抗坏血酸0.088*6mg。（8）6%的KI溶液称取碘化钾6克溶解于100ml水中。临用现配。（四）操作步骤1.2,6-二氯酚靛酚溶液的标定：(1)抗坏血酸标准溶液的标定：确吸取2.0mL抗坏血酸标准液于100mL锥形瓶中，加5mL1％草酸溶液，6%的KI溶液0.5ml，1%的淀粉溶液2滴，再以0.001%mol/L碘酸钾标准应用液滴至淡蓝色。计算方法：抗坏血酸浓度（mg/ml）=（耗0.001%mol/L碘酸钾ml数*0.088*6）/2(2)二氯酚靛酚溶液的标定：吸取已标定过的抗坏血酸溶液5ml及1%的草酸5ml于锥形瓶中，以待标定的2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至溶液呈淡红色，在15``内不褪色为止。1ml染料相当于抗坏血酸的毫克数（记作T）。=（坏血酸浓度（mg/ml）*5）/滴定消耗染料毫升数2．样品测定：准确吸取样品提取液（上清液或滤液）两份，每份5.0mL，分别放入两个100mL锥形瓶中，按上面的操作进行滴定并记录所用染料溶液体（mL）。（五）结果计算取两份样品滴定所用染料体积平均值，代入下式计算100g样品中还原型抗坏血酸的含量：抗坏血酸含量（mg/100g样品）＝V×T×G×A×100W×G1×A1式中：V——滴定样品提取液消耗染料平均值（mL）T——每mL染料所能氧化抗坏血酸mg数G——匀浆总重量（g）G1——制备提取液取用匀浆重量（g）A——样品提取液定容体积（mL）A1——滴定时吸取样品提取液体积（mL）W——样品重量（g）