枳实提取物.

枳实提取物王凯顺民族药物化学来源•属芸香科植物酸橙及栽培变种或甜橙的干燥幼果。•拉丁名：CitrusaurantiumL.枳实介绍•中药材枳实，有“破气、化痰、消积、除痞”的功效，近年来药理研究表明，枳实浸提物辛弗林为肾上腺素α-受体兴奋剂，广泛地应用于医药、食品及功能性饮料之中；枳实中的橙皮甙具有预防和治疗心血管疾病，调节血糖，降低血脂及调理血压、消炎抗菌、抗病毒等功效；枳实浸提物川陈皮素有抗血栓形成、抗血细胞凝集、预防癌症、抑制真菌生长等功效。枳实主要化学成分•黄酮类成分枳实中的黄酮类成分含量较高,约占5%~28%。现已从枳实中分离出来的黄酮类成分主要为橙皮苷、橙皮素、柚皮苷、柚皮素、新橙皮苷、柚皮芸香苷、红橘素、异樱花素7-O-β-D-新橙皮糖苷、8-四甲氧基黄酮、野漆树苷、忍冬苷等。•生物碱类成分枳实中的生物碱成分有辛弗林、N-甲基酪胺、乙酰去甲辛弗林等,为其强心升压的主要有效成分。•挥发油类成分廖凤霞等采用水蒸汽蒸馏提取枳实挥发油,利用GC-MS对获得的挥发油进行了分析鉴定,鉴定出15个以单萜为主的化合物,包括α-水茴香萜、α-蒎烯、桧烯、β-蒎烯、β-香叶烯、α-松油烯、柠檬烯、3,7-二甲基-1,3,6-辛三烯、3-异丙基甲苯、γ-松油烯、异松香烯、芳樟醇、4-松油醇、α-松油醇、1,3,3-三甲基-2-乙烯基-环己烯,占挥发油总量的93·81%,柠檬烯、芳樟醇含量较高。•其他成分枳实还含有腺苷、柠檬苦素、去甲肾上腺素、脂肪、蛋白质、碳水化合物、胡萝卜素、核黄素、γ-氨基丁酸等枳实中主要活性成分——辛弗林•辛弗林是枳实中的一种生物碱，是枳实中起主要药理作用的有效成分，具有收缩血管、升高血压和较强的扩张气管和支气管的作用，近年来的研究发现辛弗林能够提高新陈代谢、增加能量水平，氧化脂肪，是一种天然兴奋剂，无副作用。因此辛弗林广泛应用于医药、食品、饮料等保健行业。辛弗林（synepHrine)分子式及分子量：C9H13NO2;167.20碱性条件下不稳定，辛弗林盐酸盐熔点151-152℃，辛弗林易溶于水，难溶于乙醇，几乎不溶于乙醚、氯仿。黄酮类：橙皮苷（Hesperidin）分子式：C28H34O15熔点：258-262℃生物黄酮类：川陈皮素分子式：C21H22O8分子量：402.39枳实中有效成分的提取挥发油的提取•取枳实粗粉,加入蒸馏器中,以水浸泡后,直接加热蒸馏,直到无油馏出,停止蒸馏，冷却，分层,收集油层将油相脱胶,脱色后得到淡黄色挥发油果胶的提取•提取挥发油后的渣以热水提取,果胶、辛弗林、柚皮苷、新橙皮苷溶于热水而被提取出。水液调pH=2后以732型阳离子交换树脂吸附,用水洗脱出不被树脂吸附的果胶、柚皮苷、新橙皮苷,而辛弗林成盐后形成阳离子被树脂吸附从而达到分离,水洗脱液浓缩,醇沉,将柚皮苷、新橙皮苷溶于醇液而沉淀出果胶。•粗果胶以水热溶后加入5%活性炭在80℃下保温30min,趁热过滤,滤液浓缩至干,真空干燥粉碎得白色胶粉。柚皮苷的提取•以上洗脱的醇液中含有柚皮苷和新橙皮苷,醇液浓缩回收乙醇得浸膏,利用柚皮苷和新橙皮苷在不同酸度下的溶解性差异将二者分离。•醇浸膏以澄清石灰水溶解、过滤,滤液以梯度酸沉淀将其分离,鞣质类成分与钙离子螯合。以pH=14的澄清石灰水8倍量(V/m)溶解可很好地溶解有效成分而去除杂质。得到的淡黄色结晶物过滤,固形物以热乙醇溶解后,加入少量活性炭在60℃保温30min,趁热过滤,滤液澄清透明,减压浓缩至小体积,结晶,得类白色结晶新橙皮苷提取•以上沉淀出柚皮苷的液体再次调酸碱度,析出黄色新橙皮苷,结晶物以乙醇溶解,加入少量活性炭,在60℃下保温30min后趁热过滤,滤液浓压浓缩至适当体积,静置析出类白色结晶。辛弗林的提取•732型强酸性阳离子树脂吸附辛弗林,以氨水洗脱,薄层色谱(TLC)检查,直至无辛弗林洗出时为止,将含辛弗林的成分浓缩、结晶、重结晶,得白色晶物。•辛弗林属麻黄碱类,易溶于酸水中,因此在果胶的提取中与果胶同时提出,由于分子结构中存在酚羟基和氨基,具有两性,可与碱成盐,而游离的辛弗林不溶于水,易溶于有机溶剂,成盐后则易溶于水而难溶于有机溶剂,在离子交换树脂层析时易发生消旋。在辛弗林的提取中也可以分离出鲸鱼胺生物碱。橙皮苷的提取•枳实水提后的渣干燥后分别取50g以饱和石灰水提取,过滤提取液,以10%盐酸调至酸性后沉淀,过滤沉淀物,水洗至中性再将沉淀物溶于氢氧化钙液中,加热、保温、调酸性、搅拌、保温、降温至室温、过滤,滤饼以水洗至中性,烘干得橙皮苷柠檬苦素的提取•以碱液提取橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷后的渣晾干,以等量(V/m)丙酮在60℃下回流提取2次,滤液合并浓缩再以二氯甲烷萃取3次,合并二氯甲烷液,浓缩、析晶,将晶状物热溶于丙酮,加入少量活性炭,保温30min,趁热过滤,滤液浓缩并静置结晶,得白色结晶物。枳实黄酮的提取•以上的渣中含有枳实黄酮,以乙醇提取,提取液回收乙醇后喷雾干燥•工艺：乙醇体积分数为80%,料液15∶1(V/m),提取温度70℃,提取时间1.5h。枳实高蛋白饲料•中的枳实渣可制备高蛋白饲料,枳实渣含丰富的碳水化合物、维生素、矿物质、氨基酸,但蛋白质含量不高,经发酵后可产出高蛋白饲料。•工艺：提取黄酮后的枳实渣调pH=6~7,将枳实渣灭菌后按1.2%的质量分数接入黑曲霉⑰号和产朊假丝酵母iv号混合菌,温度40℃下发酵,用塑料薄膜密封发酵器皿,枳实渣表面长满菌丝后出料,70~80℃下烘干、粉碎、包装,收率达62%,检测粗蛋白含量(质量分数)为25.2%关于提取生物碱——辛弗林•生物碱是指存在于生物体中的一类除蛋白质，肽类、氨基酸及维生素B以外的含氮碱基的有机化合物，它们的构造中大多数有复杂的环状结构，并且氮原子在环内，有显著的生物活性，具有类似碱的性质，能与酸结合成盐。生物碱广泛分布于植物界，少数来自动物界，是植物中重要的有效成分之一。生物碱在生物体内的含量一般都很低，大多少于1％。•绝大多数生物碱是利用溶剂提取法进行提取。生物碱在溶剂中的溶解符合“相似相溶”的规律。极性强的生物碱易溶于极性溶剂，亲水性较强，弱极性生物碱易溶于弱极性溶剂，亲脂性较强。游离的生物碱大多亲脂性较强而生物碱盐一般亲水性较强。按极性强弱可将生物碱提取溶剂分为极性溶剂，半极性溶剂和非极性溶剂。•按具体操作可分为浸渍法、渗漉法，煎煮法，热回流法和连续回流法（索氏提取法）新技术的采用•微波辅助提取法在微波辅助提取过程中，一方面微波辐射过程是高频电磁波穿透溶剂，到达物料内部。由于吸收微波能，细胞内部温度迅速上升，使其细胞内部压力超过细胞壁的膨胀承受能力，导致细胞破裂，胞内有效成分自由流出,在较低的温度条件下被溶剂捕获并溶解。另一方面,微波所产生的电磁场加速了被提组分趋向溶剂界面的扩散速率，缩短有效成分的分子由物料内部扩散到溶剂界面的时间，从而使浸提速率提高数倍，同时还降低了浸提温度，最大限度地保证浸提的质量。•超声提取技术在超声场中，物料吸收声能温度升高，有效成分的溶解加速。超声空化产生的瞬间高压造成生物细胞壁及整个生物体破裂，同时超声波产生的振动作用加强了胞内物质的释放、扩散及溶解。被浸提的物质在被破碎瞬间生物活性保持不变，同时提高破碎速度和提取率。•超声提取技术具有提取时间短、产率高、无需加热、低温提取有利于有效成分的保护等优点。有关的工艺技术、工艺参数及超声波发生设备还有待于进一步的研究和开发。•酶法植物的细胞壁组成物质纤维素以及许多植物药材细胞内含的果胶等物质阻止胞内有效成分溶出,并造成提取液粘稠。酶法应用纤维素酶，果胶酶等作用于植物药材，使细胞壁及细胞质中的纤维素、果胶等物质降解，减小有效成分从胞内向提取介质扩散的传质阻力，促进有效成分的提取生物碱的纯化方法•使用不同提取方法得到的生物碱粗提液不仅含有生物碱及其盐类，还含有大量的脂溶性或水溶性杂质，因此必须进行分离纯化。生物碱的纯化方法有多种，并且随着近年来研究的深入，许多新技术也应用于生物碱的分离纯化工艺。•有机溶剂萃取法对于水或酸水提取液用碱液（氨水，石灰水或石灰乳）将其碱化，使其中的生物碱盐转变成为游离生物碱，再用有机溶剂（如乙醇，乙醚、氯仿等）把游离的生物碱萃取出来。•树脂色谱法树脂色谱法包括离子交换树脂法和大孔吸附树脂法。•超滤法超滤以分离膜孔径特征进行的分离，是根据液体中的分子大小和形状，以膜为过滤介质，依靠一定的压力和流速，通过膜的筛分作用，在分子水平上进行分离，迫使大分子杂质被截留，小分子的物质透过。超滤技术的应用给中药成分的分离带来了新的概念。近年来正逐渐地被用于中药成分的分离、纯化、精制。超滤法的优点在于不耗任何溶剂，操作简单，生物碱损失小，极大减少了纯化工序。•高速逆流色谱高速逆流色谱技术是液—液分配技术，其原理是基于组分在旋转螺族管内的相对移动而互不混溶的两相溶剂间分布不同而获得分离。•由于其固定相是液体，无需固体支持作载体，因此完全消除了气、液色谱中常见的吸附现象，特别适用于分离极性大的组分以及一些生物大分子；由于它独特的分离原理，使其在制备分离上显示出很大的优势。最近的研究表明，利用高速逆流色谱仪可以一次进样几十毫升，可以一次分离近10克的样品。生物碱辛弗林提取工艺优化枳实粗粉中加入两倍体积蒸馏水润湿时间12小时，使原料充分润湿，减小了后续过程中的传质阻力。之后加入3倍体积的0.2mol/l的盐酸浸泡两个小时，枳实中辛弗林完全转化为辛弗林盐酸盐，在溶液中达到平衡。在渗漉操作中，选取0.02mol/l的盐酸作为提取溶剂，渗漉盐酸料液比为1：9，渗漉流速为5ml/min。以此条件辛弗林的提取率可达95.4％，得到的提取液辛弗林浓度为0.77mg/ml。•以001×8强酸性阳离子交换树脂进行辛弗林的纯化研究。此树脂对辛弗林的吸附容量大，并且具有较好的解吸性能。辛弗林以0.77mg/ml浓度上柱，溶液pH值为2.4－2.8，上柱流速为6ml/min。洗脱剂为5％氨水，洗脱流速为3ml/min。最后得到浸膏纯度22.27％，纯化工艺辛弗林的收率达90.1％。结合渗漉工艺，整个提取工艺辛弗林的收率达86％,浸膏得率3.74％。