植物与青贮饲料中可溶性糖的提取与测定

植物与青贮饲料中可溶性糖的提取与测定原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当糖的量在２０－２００mg范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可用比色定量。材料:过40目的植物或青贮饲料粉末(70度烘干48小时后,粉碎过筛)试剂:1)葡萄糖标准溶液:0.1000g葡萄糖(分析纯)溶于20ml蒸馏水中,定容于100ml.制标准曲线时,吸1ml此溶液,稀释10倍(密度为100ｕg/ml)2)蒽酮硫酸指示剂:称0.2000g蒽酮溶于100ml浓H2SO4(1.84)中,当日配制使用.步骤:1)样品中可溶性糖的提取:称取约0.3-0.5g(精确到0.0001g)样品倒入25ml试管中,再加15ml煮沸的蒸馏水,塞上塞子,在90度水浴中振荡提取40分钟,过滤，并用少量蒸馏水洗滤纸上的残渣，使WSC全部流到滤液中；对滤液再加入少许(约0.010g)活性碳,90度脱色30min,过滤,并用少量蒸馏水洗滤纸上的残残渣，将滤液用蒸馏水定容至50ml(视材料而定也可以是100ml或500ml).取1ml此糖提取液,加入4ml蒽酮硫酸试剂,在冰水中冷却(加盖防止蒸发).再在100度沸水中提取,当沸水重新沸起后,准确煮沸10分钟后取出,用流水冷却后,放置10分钟,在620nm下比色,测吸光值.2)标准曲线制作:取6只大试管,配制不同浓度的葡萄糖溶液编号012345蒸馏水ml1.00.80.60.40.20标准溶液添加量ml00.20.40.60.81葡萄糖糖含量ｕg/ml0204060801003)在支试管加入蒽酮硫酸试剂4.0ml,在冰水中冷却(加盖防止蒸发).再在100度沸水中提取,当沸水重新沸起后,准确煮沸10分钟,用流水流水冷却后,放置10分钟,在620nm下比色,测吸光值.最后以葡萄糖含量为横坐标,以吸光度为纵坐标,作出标准曲线.结果处理:样品中含糖量(%)=测出的糖量(ｕg)×稀释倍数×100/样品重量/1000000注意:试管与离心管,溶量瓶一定要洗干净;加热,比色时间要准确.