正式论文刘刚

成石液：1%氯化铵和1%乙二醇溶液的配制应用电子天平称取氯化铵5g，用10mL规格的量筒量取5mL的乙二醇，同时用500mL的量筒量取500mL的自来水，一并倒入量杯中，并用玻璃棒混匀，倒入药瓶并标记[8]。金钱草水提取物的制备：原料（采回后，切碎，在真空干燥箱中60℃,0.08MPa真空干燥后，置于干燥器中备用）→水提（将粉碎后的称取100g，加入八倍水浸泡，置于超声波清洗器中进行超声提取，抽滤，滤渣再重复过滤两次，收集滤液，再用旋转蒸发仪浓缩至膏状，定容到200ml容量瓶里，置于冰箱中冷藏备用）→浓缩（将定容好的溶液脱水浓缩）→浸膏→喷雾干燥→粉碎1.2.3动物饲养大鼠饲养在苏州市新区枫桥净化设备厂生产的独立送排风笼具(IndividualVentitaledCage,IVC)中进行饲养，大鼠的饲养管理及饲养环境、用具的清洗、消毒均严格按照标准化操作规范进行。使用刨花作为大鼠垫料，垫料需经过在阳光下晒干，紫外灯照射3~4h，121℃高温蒸汽灭菌20min，60℃干燥箱内鼓风干燥后备用。成石组和金钱草组大鼠自由饮用配制好的成石液，对照组大鼠自由饮用自来水，都自由采食。环境温度20~24℃，湿度50~65%，光照12~13h，每周定期称重一次。大鼠给药采用灌胃方式，对照组和成石组灌胃生理盐水0.3g/kg，金钱草组灌胃金钱草水提取液0.3g/kg，在持续灌胃28天后称重并分别宰杀大鼠。试验过程中认真进行大鼠的一般检查记录大鼠的精神状态、采食、饮水、活动、临床症状、环境温度与湿度及通风等情况。1.3样品采集与处理在4w时，大鼠禁食12h，不禁水过夜，逐只称重，采血后的大鼠立即解剖去左右两侧肾和脾脏，并称重，用滤纸吸去脏器表面血液，去除包膜，称量肾脏和脾脏绝对重量（湿重），并按下式计算肾脏和脾脏的相对重量（肾体比和脾体比）：脏体比量（%）=脏器湿重（g）/宰前活重（g）×100。脾、右肾用4％中性甲醛固定，乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋。IEICA-RM-2128型切片机切片5~7μm，HE染色，中性树胶封片，显微镜下对各组织切片进行观察，选取结构典型的切片用OLYMPUS-CH30显微摄影系统拍摄。1.4数据统计分析所有试验数据均采用均数±标准差（M±SD）表示，P＜0.05差异显著，P＜0.01差异极显著。用spss17.0统计软件进行数据分析各数据之间的统计学差异。2结果2.1宰前活重和肾、脾脏指标的变化表128d各组宰前活重和肾、脾脏指标的变化组别宰前活重（g）肾体比（%）脾体比（%）对照组306.65±43.281.18±0.520.23±0.42成石组240.73±56.07*1.32±0.570.26±0.12金钱草组216.85±39.65*1.32±0.270.19±0.34注：与对照组比较*表示P0.05，**表示P0.01；与成石组比较△表示P0.05，△△表示P0.01，下同由表1可以看出，与对照组相比，成石组肾体比差异不显著(P＞0.05)，脾体比差异也不显著(P＞0.05)，成石组的宰前活重与对照组相比有所下降，并且差异显著（P＜0.05）；金钱草组宰前活重和与对照组相比有所降低，并且差异显著（P＜0.05）,但肾体比和脾体比差异都不显著（P＞0.05）；金钱草组和成石组相比，肾体比差不多，脾体比有所降低，但差异都不显著（P＞0.05）。2.2各组肾、脾脏切片观察图1对照组大鼠肾脏组织切片（HE，100×）图2对照组大鼠肾脏组织切片（HE，100×）图3成石组大鼠肾脏组织切片（HE，100图4成石组大鼠肾脏组织切片（HE，100×）图7金钱草组大鼠肾脏组织切片（HE，100×）图8金钱草组大鼠肾脏组织切片（HE，100×）图7对照组大鼠脾脏组织切片（HE，100×）图8对照组大鼠脾脏组织切片（HE，100×）由上图所示，对照组图1中肾小管排列紧密，细胞分布均匀，图2肾小球细胞核完整，与周围界限明显；成石组图3中大鼠肾脏切片能明显看见肾远曲小管（A）中存在不规则的晶体和规则的四方形晶体（二水合草酸钙）肾小管扩张，管壁破裂细胞核不完整，图4中可见肾小球细胞核破裂，囊肿，肾小管排列疏松，同时可见上皮细胞损伤，变性，脱落。由于尿酸不但可通过干扰尿液中酸性粘多糖(GAGs)的抑制活性引起草酸钙晶体沉积，而且尿酸晶体及尿酸结石碎片可以通过异相成核过程诱导草酸钙形成和生长，因此，尿酸晶体常会与草酸钙晶体互为附生生长，故而影像中可见。成石组图3、4与对照组图1、2比较，成石液对大鼠肾脏有损害作用，肾小球萎缩或囊腔水肿，同时肾小管能清晰可见透明不规则结晶体，成功的诱导成草酸结石大鼠模型。图7、8所示，肾小管排列紧密，但细胞核分布不均匀。肾小球基本恢复正常情况，但有少数肾小球损伤（D）。3讨论研究表明，我国泌尿系结石成分中90%以上都为草酸钙结石[11]。在我国一些地区，由于饲料资源紧缺，养殖场和养殖户用棉副产品饲喂动物，从而使动物易发生尿结石（特别在产棉地区），直接影响了畜牧业的发展和饲料资源的利用。乙二醇是草酸的前体物质，在机体内可转化为草酸，从肾脏分泌排泄，氯化铵可酸化尿液，具有肾毒作用，可损害肾小管，二者协同，可形成泌尿系统的草酸钙结晶[9]。正常对照组肾脏表面色泽均匀，切面鲜红色，草酸钙结石组小鼠肾脏肿大，但剖面未见异常。草酸钙结石在肾小管的管腔内和肾小管细胞内形成[17]，金钱草干预组肾小管的管腔中未见结晶体，可能与金钱草的利水排石和溶石功效有关系，金钱草通过增加肾盂、输尿管内压，促进输尿管蠕动[18]，利尿作用对肾小管起到机械性冲刷作用，可将结晶冲击变小，有利于随尿液排出体外，不利于结晶的形成，通过本试验的肾脏切片，可以看出金钱草在恢复肾小球萎缩，恢复肾小管的扩张方面起到良好的保护作用，有利于恢复草酸结石小鼠的肾脏组织结构。本试验中存在一些问题，测定的指标和肾脏切片缺乏阶段性采样和数据，不能阶段性地反映草酸钙结石的形成过程和金钱草的治疗过程。在临床应用中金钱草主要是复方应用，也有提取黄酮类成分应用，给药途径多为灌服，注射应用较少，王涌泉等[19]采用尾静脉注射金钱草提取液，其效果相对于口服给药，用药用量小、肾结石形成率相对低，肾中草酸和钙相对降低，注射液静脉给药消除了胃肠吸收分解，其有效成分能更直接发挥防石作用有关，但金钱草静脉注射给药在临床上推广和应用有一定难度。草酸钙结石的形成是复杂的病理过程，受多种因素影响，金钱草中所含多种成分均可干预草酸钙结石的形成，且金钱草的不同给药剂量和给药途径的效果也不同。金钱草所含成分较多，发挥溶石和排石作用与其利尿作用、影响钙和草酸代谢有关，金钱草中的黄酮类化合物可能是发挥排石作用的主要成分[20]，此外金钱草多糖可能发挥溶石作用。此外，金钱草具有抗炎[21]、抗氧化[22-23]和护肾作用。金钱草所含多种化学成分均可通过不同作用途径和功效防治泌尿系统草酸结石的形成，所以治疗结石具有多方面的综合性优势。在临床应用中可合理利用金钱草与利水通淋、化瘀散结、益气补肾等中药材的配伍，以加强溶石和排石效果，起到防止结石复发，加强治疗细小结石和泥沙样结石的效果。3.1试验过程中小鼠的精神状态以及成石液对机体的影响效果试验过程中，对照组小鼠的精神状态较好，刺激小鼠有很强的应激；成石组和金钱草组小鼠的精神萎靡，不愿活动，毛色发黄，成石组主要由于成石液对机体的肾脏造成结晶损害，金钱草组主要是成石液和药液对小鼠的胃黏膜以及肾脏刺激作用，使得这两组小鼠的精神状态较差。本试验采用1%乙二醇和1%氯化铵饮水诱导小鼠形成尿酸结石模型，由表1可知，成石组小鼠宰前活重较对照组有所降低，但不显著。图3、4所示成石液对机体有损害作用，肾小管上皮细胞损伤，变性，脱落，内黏附结晶，通过肾脏的绝对重以及图3、4成石组肾脏切片可以得出本次试验成功的诱导了小鼠结石的形成。3.2金钱草可能发挥的抗结石成分以及对肾、脾脏的保护作用本科生毕业论文（设计）题目:金钱草提取物对草酸结石大鼠脾、肾组织结构的影响姓名:刘刚学院:动物科学学院专业:动物医学班级:2011级动医3班学号:1222110312指导教师:李立顺职称:副教授2015年5月25日安徽科技学院教务处制目录摘要...........................................................1关键词........................................................1引言...........................................................11试验材料与方法................................................21.1试验材料....................................................21.1.1试验动物..................................................21.1.2试剂及药品................................................21.1.3试验饲料.................................................21.1.4试验仪器和器材............................................21.2试验方法..................................................31.2.1动物分组..................................................31.2.2试验药品配制.............................................31.2.3动物饲养................................................31.3样品采集与处理..............................................31.4数据统计分析................................................42结果与分析....................................................42.1宰前活重和肾脏指标的变化....................................42.2金钱草对4w和6w草酸结石大鼠肾组织匀浆Ca含量的影响...........52.3金钱草对4w和6w草酸结石大鼠血清P、尿酸、尿素氮和肌酐的影响...52.4各组肾脏切片观察............................................63讨论..........................................................73.1金钱草对草酸钙结石大鼠肾体比的影响..........................73.2金钱草对草酸钙结石大鼠肾组织匀浆Ca的影响....................83.3金钱草对草酸钙结石大鼠血清P、尿酸、尿素氮、肌酐的影响..........84结论..........................................................9致谢...........................................................9参考文献.......................................................9英文摘要.......................................................11英文关键词......................