浙江大学生物化学实验甲氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法

氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法1.1、原理1、纸层析原理纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。分配层析是利用不同物质在两个互不相溶的溶剂中分配情况（溶解度）的不同来分离混合物的一种技术。层析时展层溶剂由有机溶剂组成，吸附在滤纸上的一层水分子为层析的固定相，与固定相不相混溶的有机溶剂为层析的流动相。氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法进行分离时由于被分离物质的组分在两相中的分布不同，随着流动相的移动，物质将在两相间进行连续的、动态的不断分配，从而造成不同组分移动的速度也不相同。易溶于流动相中的组分移动快，在固定相中溶解度大的组分移动慢，于是得到分离。氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法物质分离后在滤纸上的位置可用比移值（Rf）来表示。展层后斑点中心与原点之间的距离（X）Rf=原点与溶剂前缘间的距离（Y）YX展层溶剂前沿样品层析斑点原点氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法Rf值的主要决定因素是分配系数，不同物质的分配系数不同，Rf值也不同。对某种特定的化合物，在特定的展层系统中，一定的温度下，Rf值是个常数。但溶质和溶剂的性质、滤纸的性质、展层的温度等都对Rf值有影响。此外，样品中的盐分、其它杂质以及点样过多等均会影响样品的有效分离。氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法用滤纸层析法分离氨基酸，是根据氨基酸样品的R基的化学结构或极性大小的不同，将样品氨基酸溶解在适当的溶剂（水、缓冲液或有机溶剂）中，点样在滤纸的一端，再选用适当的溶剂系统，通过毛细现象向另一端展层，展层完毕后，用茚三酮作为显色剂，即可得到氨基酸样品的分离图谱。氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法2、茚三酮的显色原理1.2、实验材料及试剂实验材料：氨基酸及氨基酸的混合物。实验试剂：试剂的配制及注意事项参P36。氨基酸+茚三酮紫红色复合物570nm处具特征光吸收，可据此定量测定各种氨基酸氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法1.3、实验步骤操作过程及注意事项参P36。1.4、实验结果及处理认真观察实验现象，计算各氨基酸的Rf值，并对层析后氨基酸的显色情况进行分析。