海洋植物木果楝种子化学成分的研究

海洋植物木果楝种子化学成分的研究霍长虹，尹宝伟，沈立茹，赵雷，董玫，史清文，王永利（河北医科大学药学院，河北石家庄050017）摘要:目的研究海洋植物木果楝XylocarpusgranatumKoenig种子的化学成分。方法采用色谱法分离，根据化合物理化性质和波谱分析鉴定其结构；用MTT法测定单体化合物的抗肿瘤活性。结果从木果楝种子中分离鉴定了16个化合物，分别为过氧化麦角甾醇(1)，xylocarpinG(2)，xylocarpinH(又名granaxylocarpinB,3)，xylogranatinC(4)，3β-detigloyoxy-2′-methylbutanoyloxyxylogranatinB(5)，xylogranatinD(6)，hispidolB(7)，东莨菪葶(8)，-谷甾醇(9)，胡萝卜苷(10)，xylomexicaninA(11)，odoratone(12)，xylomexicaninB(13)，piscidinolG(14)，spicatin(15)，7-deacetyl-7-oxogedunin(16)。结论化合物11和13为新化合物，化合物1，7，8，12和14为首次从木果楝属植物中分离得到，化合物16为首次从木果楝中分离得到。化合物3，4，11，14对人肿瘤细胞株HLE，Hela，KT显示了不同程度的抑制活性。关键词:木果楝；种子；化学成分；MTT木果楝XylocarpusgranatumKoenig为一种生长在热带沿海地带的海洋红树林植物，属楝科木果楝属，主要分布于亚洲和非洲的热带海岸及大洋洲北部，在我国海南省亦有分布。海南民间用其种皮治赤痢，种仁用作滋补品[1]。在东南亚国家民间用其治疗腹泻，霍乱和由疟疾引起的发烧，还可用做昆虫据食剂[2]。戴好富等报道木果楝的醋酸乙酯提取物对肿瘤HeLa细胞生长具有抑制活性[3]。为研究与开发该植物的有效成分，我们对其化学成分进行了研究，此论文报道从木果楝种子中分离并鉴定了16个化合物：过氧化麦角甾醇(1)，xylocarpinG(2)，xylocarpinH(又名granaxylocarpinB,3)，xylogranatinC(4)，3β-detigloyoxy-2′-methyl-butanoyloxyxylogranatinB(5)，xylogranatinD(6)，hispidolB(7)，东莨菪葶(8)，-谷甾醇（9），胡萝卜苷(10)，xylomexicaninA(11)，odoratone(12)，xylomexicaninB(13)，piscidinolG(14)，spicatin(15)，7-deacetyl-7-oxogedunin(16)。其中化合物11和13为新化合物，1，7，8，12和14为首次从木果楝属植物中分离得到，16为首次从木果楝中分离得到。同时采用MTT法评价了单体化合物对人肿瘤细胞株HLE，Hela，KT的抑制作用，3，4，11和14对上述细胞显示了不同程度的抑制活性。1仪器与材料X4型显微熔点测定仪（温度未校正）；APEXⅡ型傅立叶变换离子回旋质谱仪；VarianINOVA-500型核磁共振波谱仪（TMS为内标）；Waters制备高效液相色谱仪（600泵和2487紫外检测器，Whatmanpartisil10ODS-2，9.5×250mm）；薄层色谱及柱色谱用硅胶（青岛海洋化工厂产品）。木果楝种子采于海南省，由厦门大学生命科学学院王文卿教授鉴定为X.granatum。2提取与分离木果楝种子粗粉3kg，用95%乙醇渗漉提取，渗漉液减压浓缩后用适量水溶解，依次以石油醚、二氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇萃取，得到相应萃取物。二氯甲烷萃取物65.8g经硅胶柱色谱分离（石油醚-丙酮梯度洗脱），共得到10个部份（Fr.1~10）。Fr.2经反复重结晶得到化合物9（124.6mg）。Fr.3经反复硅胶柱色谱分离纯化得化合物1（4.6mg）。Fr.5析出白色晶体，再经制备HPLC（甲醇：水=60：40）纯化得到化合物3（35.0mg）和化合物11(10.0mg)。Fr.10经反复重结晶得到化合物10（216.0mg）。Fr.6经反复硅胶柱色谱和葡聚糖凝胶色谱分离纯化得化合物4（105.1mg），5（70.2mg），12（35.0mg）和16（38.1mg）。Fr.7经反复硅胶柱色谱和制备HPLC纯化得化合物2（7.6mg），6（14.7mg），13（3.2mg）。Fr.9经反复硅胶柱色谱和葡聚糖凝胶色谱分离纯化得化合物7（4.5mg），8（4.6mg），14（8.2mg），15（60.0mg）。3结构鉴定化合物1：白色针状晶体（丙酮）；1H-NMR（500MHz，CDCl3）δ：0.81(3H，s，H-18)，0.81(3H，d，J=6.8Hz，H-21)，0.83(3H，d，J=7.5Hz，H-27)，0.88(3H，s，H-19)，0.91(3H，d，J=7.0Hz，H-26)，1.00(3H，d，J=6.5Hz，H-28)，3.96(1H，m，H-3)，5.13(1H，dd，J=15.5，8.0Hz，H-22)，5.22(1H，dd，J=15.5，7.5Hz，H-23)，6.25(1H，d，J=8.5Hz，H-6)，6.51(1H，d，J=8.5Hz，H-7)。13C-NMR（125MHz，CDCl3）δ：34.6(C-1)，30.1(C-2)，66.4(C-3)，36.9(C-4)，82.1(C-5)，135.4(C-6)，130.7(C-7)，79.4(C-8)，51.0(C-9)，36.9(C-10)，23.4(C-11)，39.3(C-12)，44.5(C-13)，51.6(C-14)，20.6(C-15)，28.6(C-16)，56.1(C-17)，12.8(C-18)，18.2(C-19)，39.7(C-20)，20.9(C-21)，135.2(C-22)，132.3(C-23)，42.7(C-24)，33.0(C-25)，19.9(C-26)，19.6(C-27)，17.5(C-28)。以上数据与文献报道的过氧化麦角甾醇一致[4]。化合物2：白色粉末（甲醇），UV(甲醇)maxnm215；1H-NMR（500MHz，CDCl3）δ：0.82(3H，s，H-28)，1.07(3H，s，H-19)，1.21(3H，s，H-18)，1.26(3H，s，H-29)，1.40(1H，dd，J=13.5，8.5Hz，H-12β)，1.79(1H，m，H-11β)，1.80(3H，d，J=8.5Hz，H-4′)，1.78(3H，m，H-5′)，1.90(s，3-OCOCH3)，2.14(1H，m，H-9)，2.16(1H，d，J=16.5Hz，H-6b)，2.17(1H，m，H-12α)，2.38(1H，m，H-11α)，2.39(1H，dd，J=16.5，10.0Hz，H-6a)，2.70(1H，d，J=10.0Hz，H-5)，2.97(1H，dd，J=9.0，4.5Hz，H-2)，3.70(3H，s，7-OCH3)，4.98(1H，s，H-17)，5.10(1H，d，J=9.0Hz，H-3)，5.56(1H，d，J=4.5Hz，H-30)，6.03(1H，s，H-15)，6.42(1H，s，H-22)，6.84(1H，m，H-3′)，7.41(1H，s，H-23)，7.49(1H，s，H-21)。13C-NMR（125MHz，CDCl3）δ：107.4(C-1)，53.1(C-2)，74.0(C-3)，37.6(C-4)，40.8(C-5)，32.0(C-6)，174.0(C-7)，81.2(C-8)，51.5(C-9)，42.9(C-10)，14.8(C-11)，24.9(C-12)，39.0(C-13)，160.1(C-14)，117.4(C-15)，163.8(C-16)，81.5(C-17)，19.4(C-18)，20.9(C-19)，119.9(C-20)，141.2(C-21)，109.9(C-22)，142.8(C-23)，24.5(C-28)，21.9(C-29)，76.5(C-30)，51.9(7-OCH3)，166.9(C-1′)，127.8(C-2′)，138.6(C-3′)，11.9(C-4′)，14.5(C-5′)，170.2(3-OCOCH3)，20.4(3-OCOCH3)。以上数据与文献报道的xylocarpinG一致[5]。化合物3：白色针状晶体（丙酮）；UV(甲醇)maxnm215；HREI-MSm/z582.2471(calcdfor[M]+582.2465)。1H-NMR（500MHz，CDCl3）δ：0.97(3H，s，H-18)，1.03(3H，d，J=5.0Hz，H-19)，1.13(3H，s，H-29)，1.20(3H，s，H-28)，1.63(1H，m，H-12α)，1.83(3H，d，J=7.5Hz，H-4′)，1.85(3H，s，H-5′)，2.28(1H，m，H-6a)，2.30(1H，m，H-5)，2.30(1H，m，H-10)，2.47(1H，m，H-6b)，2.53(1H，m，H-11α)，2.69(1H，m，H-12β)，3.08(1H，dd，J=17.5，7.0Hz，H-11β)，3.69(3H，s，7-OCH3)，3.89(1H，s，8-OH)，5.34(1H，s，H-17)，6.09(1H，s，H-15)，6.47(1H，s，H-22)，6.60(1H，s，H-30)，6.96(1H，m，H-3′)，7.01(1H，s，H-3)，7.45(1H，s，H-23)，7.56(1H，s，H-21)。13C-NMR（125MHz，CDCl3）δ：198.8(C-1)，128.8(C-2)，161.9(C-3)，36.8(C-4)，45.2(C-5)，34.6(C-6)，173.4(C-7)，80.3(C-8)，208.8(C-9)，42.8(C-10)，33.0(C-11)，25.5(C-12)，38.3(C-13)，163.5(C-14)，118.4(C-15)，163.3(C-16)，80.1(C-17)，18.5(C-18)，11.6(C-19)，119.7(C-20)，141.4(C-21)，109.8(C-22)，143.2(C-23)，27.9(C-28)，20.5(C-29)，67.5(C-30)，52.0(7-OCH3)，166.8(C-1′)，127.7(C-2′)，139.9(C-3′)，12.1(C-4′)，14.7(C-5′)。以上数据与文献报道的xylocarpinH(在文献[6]中命名为granaxylocarpinB)一致[5]。化合物4：白色晶体（甲醇），UV(甲醇)maxnm214；1H-NMR（500MHz，CDCl3）δ：0.98(3H，s，H-18)，1.04(3H，d，J=6.0Hz，H-19)，1.12(3H，s，H-29)，1.21(3H，s，H-28)，1.65(1H，dd，J=13.5，7.0Hz，H-12α)，2.11(3H，s，30-OCOCH3)，2.27(1H，m，H-6a)，2.28(1H，m，H-10)，2.29(1H，m，H-5)，2.47(1H，m，H-6b)，2.51(1H，m，H-11α)，2.61(1H，m，H-12β)，3.03(1H，dd，J=19.5，6.0Hz，H-11β)，3.69(3H，s，7-OCH3)，3.89(1H，s，8-OH)，5.34(1H，s，H-17)，6.18(1H，s，H-15)，6.46(1H，d，J=1.5Hz，H-22)，6.54(1H，s，H-30)，7.00(1H，s，H-3)，7.44(1H，d，J=1.5Hz，H-23)，7.55(1H，s，H-21)。13C-NMR（125MHz，CDCl3）δ：198.8(C-1)