凝胶电泳配胶配方

8%Gel30-90KD5ml10ml15ml20mlH2O2.34.66.99.330%Acr1.32.74.05.31.5MTris-HCl(8.8)1.32.53.85.010%SDS0.050.10.150.210%APS0.050.10.150.2TEMED0.0030.0060.0090.1210%Gel20-80KD5ml10ml15ml20mlH2O1.94.05.97.930%Acr1.73.35.06.71.5MTris-HCl(8.8)1.32.53.85.010%SDS0.050.10.150.2010%APS0.050.10.150.20TEMED0.0020.0040.0060.00812%Gel12-60KD5ml10ml15ml20mlH2O1.63.34.96.630%Acr2.04.06.08.01.5MTris-HCl(8.8)1.32.53.85.010%SDS0.050.10.150.2010%APS0.050.10.150.20TEMED0.0020.0040.0060.00815%Gel10-40KD5ml10ml15ml20mlH2O1.12.33.44.630%Acr2.55.07.510.01.5MTris-HCl(8.8)1.32.53.85.010%SDS0.050.10.150.2010%APS0.050.10.150.20TEMED0.0020.0040.0060.0085%浓缩胶4ml5ml6ml8mlH2O2.73.44.15.530%Acr0.670.831.01.41.5MTris-HCl(6.8)0.50.630.751.010%SDS0.040.050.060.0810%APS0.040.050.060.08TEMED0.0040.0050.0060.008SDS-PAGE标准化流程实验前准备：（1）30%丙烯酰胺溶液：2.9g丙烯酰胺+0.1g甲叉双丙烯酰胺，溶于5mLddH2O，定容至10mL。4℃避光保存。（2）10%SDS（十二烷基磺酸钠）：1gSDS，加6mLddH2O，加热至溶解，定容至10mL。注意SDS溶液很容易起泡沫，加ddH2O要缓慢加。常温下10%SDS会有固体析出，用的时候水浴加热后才能用。（3）1.5M，pH=8.8Tris-HCl缓冲液：18.2gTris溶于200mLddH20，用6MHCl调pH至8.8，定容至250mL。（4）1M，pH=6.8Tris-HCl缓冲液：12.1gTris溶于200mLddH2O，用6MHCl调pH至6.8，定容至250mL。（5）0.05M，pH=8.0Tris-HCl缓冲液：1.5gTris溶于200mLddH2O，用6MHCl调pH至8.0，定容至250mL。（6）10%Ap（过硫酸铵）：1g过硫酸铵溶于6mLddH2O，定容至10mL。注意Ap最好现配。也可配完避光4℃保存一个月。（7）TEMED：有现成的试剂，直接使用。（8）上样缓冲液：0.1gSDS，0.15gDTT，0.002g溴酚蓝，2mL甘油，2mL0.05MpH=8.0Tris-HCl，混合，用ddH2O定容至10mL。（9）染色液：0.625g考马斯亮蓝R250，227.5mL甲醇，22.5mL冰醋酸，混合均匀，过滤，收集滤液。（10）脱色液：300mL冰醋酸，200mL甲醇，混合加ddH2O定容至4L。（11）电泳缓冲液：1.515gTris，9.4g甘氨酸，0.5gSDS溶于300mLddH2O，定容至500mL。实验操作见操作指南和视频。