标准曲线的制定

丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性测定的工作曲线制作一、原理二、测定方法三、参考值四、临床意义五、注意事项一、原理样品中ALT在一定条件下，作用于丙氨酸和α-酮戊二酸，生成一定量的丙酮酸及L-谷氨酸，2，4-二硝基苯肼与反应产生的丙酮酸及剩余基质α-酮戊二酸生成各自相应的2，4-二硝基苯腙。在505nm波长及碱性条件下，以相同摩尔浓度计算，丙酮酸所形成苯腙的吸光度值为α-酮戊二酸苯腙的三倍，根据此特点，可推算出ALT的活力。ALT转氨基反应式转氨基作用二、测定方法1、工作曲线制作：试剂01234蒸馏水（ul）100100100100100校准液（ul）050100150200试剂R1（ul）500450400350300相当于酶karU-285797150活力U/L-50109209406试剂R2（ul）500500500500500混匀，37℃恒温20分钟试剂R3（ul）50005000500050005000各管混匀，室温恒定10分钟，505nm波长，以“0”号管调零，测定各管吸光度值制作工作曲线。3、计算：以各标准管活力单位为横坐标，吸光度变化值为纵坐标，手工绘制工作曲线图，查阅该图即可得样品ALT活性。4、KarU单位定义：KarU单位为分光光度单位，1ml血清在25℃、反应液总体积3ml，波长340nm、光径1.0cm时，每分钟吸光度下降0.001A为1个单位。三、参考值：正常值：5~25KarU或5~50U/L(37℃)