抗衰老药物研究的筛选规范与临床评价(中药药理与临床)

1DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.1990.06.020《中药药理与临床》1990；6(6)抗衰老药物研究的筛选规范与临床评价本稿是在1998年12月3日全国抗衰老学术研讨会广州会议通过的送审稿基础上，经两年的试用后修改补充，于1990年5月18日中国药学会老年药学会沈阳会议通过。一、抗衰老药物的概念抗衰老药物是一类以提高生命效率，改善人类体质，并能在遗传特性所决定的限度内有效延长机体寿限的药物；是具有抑制、延缓岌预防机体生理袁老进程，增强纠正病理性紊乱的能力，调整重要脏器功能失调，重建机体内环境平衡，作用广泛，可促进整体健康的药物。在经典药理学研究中没有抗衰老药物的分类学地位，长寿药理学(Pharmaeolongerity)是近20年来在衰老生物学、衰老生物化学和分子生物学等多学科渗入到药理学、药物学研究中而形成的边缘学科。由于机体的衰老是一个整体的连续过程，因此抗衰老药物是针对机体不同程度衰老症状的一组药物。它的特点是可以通过多层次(整体、器官、细胞和分子水平)、多系统(神经、内分泌、免疫、心血管及呼吸等)、多方面(既有只奋又有抑制)和较长时间的作用，以调整机体的物质、能量代谢及组织学与功能状态，从而达到延缓衰老的目的。二、抗衰老药物药效研究方法1.基本要求1.1抗衰老药物能在不同水平、不同环节起调整作用尹因此需要进行多系统、多层次、多指标的观察研究。1.2动物种属和品系的选择应符合抗衰老药物筛选要求，动物模型可用自然衰老和人工衰老动物，以自然衰老为主；长寿命(2~3年)和(短寿命(1~数月)动物，以短寿命为主；高级(哺乳类)和低级(细胞、昆虫等)动物，以低级动物为主。1.3动物实验设计应有青年对照组、老年对照组和阳性药物（中药或西药）对照组。动物实验不仅应有生理、生化等功能方面的指标，还应有光学显微镜、组织化学等形2态学指标，以更好为临床疗效提供试验依据。1.4在实验层次上既应有共性实验或称基础实验，也应有针对某一特定要求的个性或称特殊实验。1.5给药时间和剂量应根据不同动物而异，一般应从中年动物开始给药，按高、低二个剂量给药，时间1或4个月(依临床疗程长短确定)。给药方法既可拌在饲料、饭水中，也可来用灌胃法。2.主要药效学实验2.1寿命实验:至少要完成两种动物的寿命实验，或者一种整体动物，一种细胞培养传代实验。2.2脑功能实验:动物学习记忆行为实验、神经递质、受体和乙酞胆碱醋酶可逆性抑制作用。根据测试药物需要也可进行两个以上指标的测定。2.3老化相关酶的测定:分为与维持正常代谢有关的酶及清除衰老产物的酶。前者有脑、肝组织线粒体中单胺氧化酶—(MAO-B和MAO-A)钠-钾ATP酶(Na-K-ATPase)、胆碱醋酶、墟泊酸脱氢酶等；后者有清除自由基的过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和谷胧甘肤过氧化酶等。2.4体力负荷实验与抗应激实验:体力负荷实验是指能使动物主动性运动的一种良性实验，以观察其正常运动能力，例如蹬车轮实验、目标追逐速度时间等；抗应激实验是在劣性刺激下的生存能力实验，例如负重游津永实验、耐寒和耐缺氧实验等。2.5免疫功能实验:测定自然衰老或人工造成的免疫功能紊乱免疫功能低下的动物体液免疫或细胞免疫功能，例如免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、T淋巴细胞转化、自然杀伤细胞(NK)功能、白细胞介素I、l(IL-I、l)等，以观察抗衰老药物对机体体液和细胞免疫功能的形响。2.6核酸及蛋白代谢实验:侧定DNA、RNA及蛋白质的更新率或用同位素双2.7染色体畸变或修复实验用人探针观察染色体的畸变率，或用同位素掺入法观察药物对DNA修复的影响，以确定药物对遗传基因的影响。2.8老化代谢产物的测定:用荧光比色法测定有关组织的脂褐素、过氧化脂质，亦可侧定经脯氨酸、载脂蛋白等代谢产物，以观察药物的作用。2.9内分泌功能的测定：用放射免疫分析技术(RIA)测定性腺激素、促性腺激素、肾上腺皮质激素、甲状腺激素、促甲状腺激素、胸腺素等内分泌激素的变化，以观察药物对内分泌功能的影响。忍.10在条件许可的情况下，应该进行组织形态或亚微结构变化的观察，例如用光3学显微镜、组织化学或电镜对有关组织，尤其是对心、脑、子宫、卵巢、辜丸等进行观察。3.特殊实验依不同作用的抗衰老药物，为验证其特点而迸行的实验例如:免疫调节、内分泌调节、性功能调节等。任选实验的药物必须在主要效学实验的基础上进行，否则不能作为抗衰老药物。4.药理学筛选的程序为了提高研究效率，避免无效劳动，研究可分阶段进行。即初筛实验和特殊实验由简至繁进行。5.中药药理实验中药抗衰老药物或以中药为主的组合配方，应在中医药理论的指导下，根据方药的主治功能设计药效指标，同时要有选择的针对某一类型的虚损动物模型进行相应的实验。6.按新药评审办法和报批规定，进行一般药理学及毒理学实验。三、抗衰老药物的临床评价衰老不是疾病，因此不能定出诊断标准，也不能订出疾病的痊愈和总有效率。但是衰老过程中所出现的机能失调和自我不适的感觉却是可知的。衰老是一个有序过程，是生物序在时间上的表现。从总体来说，人类的历法年龄即代表人体的老化程度，同一年龄组的人群具有相似的机能、结构特征，即生物的老化度。但是每个个体由于各种因素，可以使历法年龄与实际年龄有较大的差异。进行个体老化度测定并与相应历法年龄组人群的标准尺度进行比较，以侧算其生理学年龄，然后再观察抗衰老药物对生理学年龄的影响，这就是对抗衰老药物进行临床评价的基本设计思想。1.生理学年龄测定原则生理学年龄(Physiologicalage)包括机体的静态功能和贮备功能，(负荷后调节力)；从测定方法来分类包括各脏器的功能指标及生化指标和免疫学指标。在指标的选择上既要注意到宏观指标，也应注意到微观指标和各指标间的横向关系，主观指标是指随增龄而出现非疾病所致的衰老症状。2.生理学年龄测定方法症状:除常规10项外，症状还应增加眼花、耳鸣、记忆全无、老年斑。分级:“O”、“I”(偶)、“I”(大部份时间`以“l”(全无)。2.1衰老症状:在流行病学调查的基础上确定随增龄而出现非疾病性衰老症状并4且依其严重程度分出等级。一般用模糊数学的方法进行，如主动述出为I级，被动述出为I级，否定为1级。2.2静态机能指标及形体测量:包括血压、心率、脉搏、呼吸、身高体童等常规内外科检查和常规化验检查。2.3按中医辨证分型对被检查对象进行中医阴限、虚实分型。2.4脏器功能测定:(选做)心血管机能测定(心排出量、脉搏和有关指标①阻抗仪，SJ42生理记录录仪等；②RP心功能测定仪；至少应有一种测定。智能测定:①小学以上：WMS；②文盲:修订的长谷川量表及修订的MMSE(CMMSE)。微循环(田牛氏加权评分法)血流变学、血小板聚集率、红细胞变形能力等肺功能；肾功能；肝功能；免疫功能；内分泌功能(垂体一靶腺轴):侧肇丸酮、雌二醇水平。2.5负荷试验(选做)2.6分子生物学指标(选做):cAMPc/GMP血浆、PGIZ/TXAZ血浆、PGE/PGFZ血浆、SOD、LPO、其他(血浆激素水平测定，血微量元素:Zn、eS等)、血脂、血糖、载脂蛋白、脂蛋白电泳等。2.7称7各种受体的放射性配基”:3.临床观察设计注意事项3.1年龄组:老年前期45~59；老年期60、8；9长寿期90以上3.2设立双盲或单盲对照组3.3排除疾病症状的干扰:因老年多病，不可能选出绝对健康老年人，因此要应用相似对照的办祛，把患有同一种疾病的分在治疗组和对照组。为了治疗某些慢性病而同服的治疗药物，可以不停药，但要做好服用抗衰老药物前后的自身对照。3.4老年人平时有服各种补药的习1贯，如人参、鹿茸等；应在用抗衰老药物之前停服一切中西补剂三个月以上，疗程中也不使用其他补剂。3.5治疗前后的生活起居、饮食习质和食量应基本保持一致，避免附加因素的影响，如疗程中发生疾病或慢性心脑疾病的急性发作，即应。53.6在观察预定指标的同时，也要注意其原发疾病的变化，并应记录和探索与本次用药的关系。4.总疗效判定:有两种方法4.1生理学年龄差法:应用电子计算机进行多指标的多元逐步回归分析，测定生理学年龄，疗程前后进行对比，同时用以下两法:1)生理学年龄下降3岁以上者为显效；3O者为有；《D者为无效。2)总有效率与对照组比较，P0.05者，治疗组才能判定有效。4.2积分法.’:将各种数据划等级给分，相加后积分得总值，以肾虚脾虚为例，见下表。肾虚、脾虚各类证型衰老辩证标准《抗衰老药物研究的筛选规范与临床评价19900518》证型望诊脉诊问诊主要疾状次要疾状肾气虚1.面色皓（白光）白1.腰膝酸软1.夜尿频（或尿后余沥）；2.自汗；2.舌淡胖、苔白2.疲倦乏力3.气短；4.耳鸣（或聋）；5.发脱或变白3.脉细弱6.健忘；7.齿摇；8.性欲减退肾阴虚1.两罐潮红1.腰膝酸软1.头晕耳鸣；2.盗汗；3.口干舌燥；2.色红少苔2.五心烦热4.便秘；5.发脱或变白；6.健忘；3.脉细数7.齿摇；8.性欲减退；肾阳虚1.面目浮肿1.腰膝酸软1.夜尿频；2.精神不振；3.气短而踹2.舌淡胖而润，苔白厚2.畏寒肢冷4.大便糖稀；5.发脱或变白；6.健忘3.脉沉池7.齿摇；8.性欲减退；脾气虚1.面色萎黄1.四肢乏力1.食不消化；2.呕逆2.舌淡胖、苔白2.腹胀肠鸣3.大便糖稀；4.纳减；3.脉细数脾阴虚1.面色萎黄1.四肢乏力1.饥不择食；2.呕逆2.舌心肝或肝绛2.口干喜饮3.大便干结；4.脘闷腹胀3.脉细数脾阳虚1.面色萎黄1.四肢乏力1.畏寒喜暖；2.口泛清水；2.舌淡胖、嫩、苔白润2.腹中冷痛，得温痛减3.大便糖稀；4.纳减；3.脉沉迟6说明:1.各型肾虚必备主要症状二项，次要症状中任意三项和望诊脉诊中的一项，或积分值大于等于13分。2.各型脾虚必备主要症状二项，次要症状中任意二项和望诊脉诊中的一项，或积分值大于等于12分。3.望诊、脉诊中任一项或一项以上均记为6分，无为0分。4.主要症状记分按程度标准较定后X2。衰老症状积分值评定方法：一、问诊:使用一致股语句提问，凡主动说出的症状记4分，问出的症状按照症状显著或持续出现、定状时轻时重或间断出现、症状轻或偶尔出现分别记3分、2分和1分，无症状为0分。问诊方式:1.先让受试者主诉。可问“你平时感到哪些不好?”或“你服药后还感到哪些不好?”。2.按照各类证型衰老辨证标准，依次询问各型虚证的主要症状(己主诉的除外)，如询问肾虚证型的主要症状，可问“你是否感到腰膝酸软?疲倦乏力?五心烦热?畏寒肢冷?”。3.依次询问各型虚证的次要症状，方式同二、望诊和脉诊:望诊和脉诊中具有任意一项应记为6分，因为这些症状是较客观的。三、疗效判断:每例问诊、望诊和脉诊记分之总和为衰老见证积分值。(1)显效:治疗后衰老见证积分下降之值》2/3治疗前平均衰老见证积分值。(2)有效:治疗后衰1/3、2/3治疗前平均衰老见证积分值之间。(3)无效:治疗后衰老见证积分下降之值在1/3治疗前平均衰老见证积分值以下。IMAO-A和MAO-B测定法:(1)用化学方法测OD值。(2)用同位素方法:’H-5经色胺硫酸盐(3H-5HT)测MAO-A；“C-b苯乙胺(’`C-bPEA)测MAO-B.2.各种受体的放射性配基(体)(1)3H-Dihydrolpranlol(“H-DHA)刀受体的配体。(2)3H-Spiperone(3H-氟呱哆陡醇):DA(多巴胺)受体的配体。(3)3H-Prazosin(3H-呱哇嗓):a-受体的配体。(4)“H-QNBM受体的配体。(5)3H-rGABA:r-氨基丁酸的受体73.积分法是考核临床疗效的一种可操作量效方法，对某一特定老年病而言，还应依其临床症状的特点制定出具体的积分标准。（起草小组:李锐霍玉书宫斌马永兴)