我的基因我知道

我的基因我知道一、实验名称颊粘膜上皮细胞基因组DNA的抽提及ACE基因多态性分析二、实验目的1、从微量来源的组织细胞中抽提基因组DNA2、PCR法分析基因多态性分析三、实验原理用碱裂解法抽提基因组DNA，以DNA为模版，用血管紧张素转化酶基因特异的引物进行PCR扩增，根据PCR扩增的大小进行多态性分析。ACE基因第16内含子存在一种长度为287bp片段的插入/缺失多态性，人类存在DD、ID、II三种基因型，其频率在人种间有差异。本实验引物序列位于287bp片段的两侧，扩增片段包括插入/缺失的片段，故II型扩增片段的长度为490bp，DD型扩增片段长度为190bp，ID型扩增片段为2个，分别为190bp和490bp。四、实验步骤1、基因组DNA提取溶液Ⅰ10ml漱口20秒收集漱口水；↓3000r/minX5minXRT，弃上清；溶液Ⅱ250ul重悬沉淀；↓3000r/minX1min，弃上清；溶液Ⅲ250ul重选沉淀，振荡10秒；（变性）↓转至0.5ml离心管，99℃X5min；加溶液Ⅳ50ul振荡5秒；（中和）↓3000r/minX1min，取上清转移至0.5ml离心管，保留上清5ul用于PCR。2、PCR反应1）取消毒的0.2ml离心管，加入下列成分：2XPCRmixture（包括PCRBuffer，dNTP，TaqDNApolymerase）12.5ul引物混合物（10uMeach）2ulddH2O5.5ulDNA模版5ul总体系25ul2）进行PCR扩增。3、琼脂糖电泳检测制备1.5%琼脂糖凝胶：2.25g琼脂糖溶解于150ml1XTBE电泳缓冲液，在微波炉中加热沸腾融化。稍等温度微微下降后，加入溴乙锭溶液做显色剂，混合均匀并灌制琼脂糖凝胶板。取5ulPCR产物，上样并电泳。紫外灯下观察实验结果。五、实验结果实验结果如图所示：1号为我的DNA，我的DNA扩增片段只在190bp部分有停留，所以为DD型；2号DNA扩增片段在490bp和190bp都有停留部分，所以为ID型；3号DNA扩增片段停留在490bp的位置，为II型。六、实验讨论与分析注意事项：1、清洁口腔，充分漱口。2、裂解细胞后震荡时间不易长，以免DNA断裂。123