微生物学实验复习汇总

微生物学实验复习汇总1.细菌培养基的配制过程？答：配制培养液→调节PH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面（搁置斜面的长度不超过试管总长的1/2）2.空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若用湿热灭菌。则要多用几层报纸包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔。3.接种环在用前必须烧灼灭菌，用后也应立即烧灼。4、培养基的种类及用途：标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多菌种分离、鉴定、计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产、连续培养化学合成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生产半合成培养基部分天然物质和部分化学试剂配制而成兼有天然培养基和合成培养基的优点目的用途加富培养基营养物质仅适合一种或一类微生物能使某种微生物的生长、繁殖比其他微生物更加迅速、逐渐淘汰其他微生物鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加(或缺少)某种化学成分菌种的分离5、培养基中的营养物质：营养要素含义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体细胞的物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO2、NaHCO3；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生饼粉、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定无机盐为微生物提供除碳、氮元素以外的各种重要元素，包括某些大量元素细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂6、灭菌与消毒：项目概念常用方法应用的范围消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体上绝大多数微生物(包括病原微生物和有害微生物的营养细胞)煮沸消毒法：在100℃煮沸5～6min一般物品巴氏消毒法：70～75℃煮30min或在80℃煮15min一些不耐高温的液体，如牛奶化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等紫外线消毒法：30W紫外灯照射30min接种室7.酵母的死细胞和活细胞可通过哪些方式鉴别？答：、用美蓝液对酵母菌染色后，活细胞为无色，死细胞为蓝色、平板菌落计数法8、实验常用的凝固剂是哪一种？固体培养基、半固体培养基及液体培养基加凝固剂琼脂的量为多少？琼脂在什么温度下溶化？什么温度下凝固？答：常用凝固剂是琼脂，分别为1—2%，0.5%96°C下融化，40°C凝固9.配制培养基时应遵循哪些原则？配制培养基的一般方法和步骤是什么？配制培养基时不可用铜锅或铁锅，原因是什么？答：原则：目的明确、营养协调、理化适宜、经济节约。铜或铁锅成份会对培养基成份造成干扰。10、培养基分装时，液体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？固体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？半固体分装高度以试管的多少为宜？答：液体：试管高度的1\4,三角瓶的试管高度的1\2,固体：试管高度的1\5，三角瓶的1\2，半固体：试管高度的1\3。高度不适宜易造成搁置斜面时污染棉塞及瓶口。11.培养基灭菌时外用牛皮纸包扎的目的是什么？答：防止灭菌时冷凝水润湿棉塞灭菌使用强烈的物理或化学方法使物体内外所有的微生物永远丧失其生长繁殖能力灼烧灭菌：酒精灯火焰接种工具的灭菌干热灭菌：160～170℃下灭菌1～2h玻璃器皿、金属工具的灭菌高压蒸汽灭菌：121℃条件下，灭菌15～30min培养基及容器灭菌12.摆斜面的正确方法是什么？答：试管口搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。13.棉塞的作用是什么？正确的棉塞要求是什么？棉塞的长度多少在管口外，多少在管内为宜？作棉塞的棉花要求是什么？能否用脱脂棉？为什么？答：作用：阻止外界微生物进入培养基内造成污染和能通气。14.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如果来不及灭菌应如何处理？答：很明显，培养基里含有丰富的氮源，碳源，微量元素等等。如果不立即灭菌，那么，就会长菌。15.采用什么方法能分离到能分解并利用苯作为碳源和能源物质的细菌纯培养？（以苯作为唯一碳源的选择培养基）答：①从苯含量较高的环境中采集土样或水样；②配制培养基，倒平板，一般仅以苯作为唯一碳源（A），另一种不含任何碳源作为对照（B）；③将样品适当稀释（十倍稀释法），涂布A平板；④将平板置于温度适当的条件下（37℃）培养，观察是否有菌落产生；⑤将A平板上的菌落编号并分别转接至B平板，置于相同温度条件下培养（在B平板上生长的菌落可利用空气中的CO2的自养型微生物）；⑥挑取在A平板上生长而不在B平板上生长的菌落，在一个新的A平板上划线、培养，获得单菌落，初步确定为可利用苯作为碳源和能源的微生物纯培养物；⑦将初步确定的目标菌株转接至以苯作为唯一碳源的液体培养基中进行摇瓶发酵实验，利用相应的化学分析方法定量分析该菌株分解苯的情况。16.为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温度高，时间长？答：由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易杀死，所以温度高、时间长。17.在干热灭菌过程中应注意哪些问题,为什么？答：1干热过程中，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。电热干燥箱具有可以观察的窗口，灭菌过程中玻璃温度较高，注意避免烫伤。2电热干燥箱内温度未降到70°C以前，切勿自行打开箱门，以免骤然降温导致玻璃器皿炸裂。3物品不要摆的太挤，以免妨碍空气流通，灭菌物品不要接触电热干燥箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。18.高压蒸汽灭菌的关键技术是什么？（使用高压蒸汽灭菌锅时，加压之前一定要把原先的空气排尽，注意恒温灭菌，同时要注意高压蒸汽灭菌锅的压力(100kPa)、温度(121℃)和灭菌时间(20min)。19.高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内的冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么待压力降低“0”时才能打开排气阀，开盖取物？答：灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀。否则就会因为锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至烫伤操作者。20.对含糖（如葡萄糖或乳糖等）培养基进行高压蒸汽灭菌时，应采用大多压力、多长时间灭菌为宜？答100KPa,121°C，15~30min21.对血清、噬菌体浓缩液、氨基酸溶液、维生素溶液、抗生素溶液能否进行高压蒸汽灭菌？应采用何种方法除菌为宜？答：不能，采用微孔滤膜过滤除菌法为宜。22.紫外线灭菌的原理及适用对象是什么？答：原理：紫外线波长在200nm~300nm具有杀菌作用，其中265~266nm杀菌力最强。此波长的紫外线易被细胞中核酸吸收，造成细胞损伤而杀菌。适用对象：无菌室、接种箱、手术室内的空气及物体表面的灭菌。23.过滤除菌法的适用对象是什么？缺点是什么？答：只适用于实验室中小量溶液的过滤除菌，缺点是虑量有限。24.微生物分离纯化常用的方法有哪些？答：划线法、稀释平板法、选择培养基法、单细胞挑取法。25.如果用牛肉膏蛋白胨培养基分离一种对青霉素具有抗性的细菌，你认为该如何做？答：在培养基中加入少量青霉素（选择培养基）26.稀释分离时，为什么要将已融化的琼脂培养基冷却到45～50℃左右才能倾入到装有菌液的皿内？为什么需要使试管口通过火焰？（通过灼烧灭菌，防止试管口的微生物污染培养基）答：如果高于50℃会将菌体烫死，低于40℃培养基会凝固，不能倒平板。可以用手触摸盛有培养基的试管，感觉试管的温度下降到刚刚不烫手时就可以进行倒平板了27.在恒温箱中培养微生物时为何培养皿均需倒置？答：①防止培养基水分蒸发②防止冷凝水的流动造成平板表面的“交叉感染”，影响单个菌落的形成③防止外物掉在培养基上。28.常用于测定微生物数量的方法有哪些？答：1个体计数法：直接法：血球计数板法、涂片染色法；间接法：平板菌落数法，薄膜过滤计数法。29.什么是显微直接计数法？工具是什么？此方法的优缺点？缺点怎样克服？答：指用计数板在光学显微镜下直接观察细胞并进行计数的方法。工具：血细胞计数板、显微镜优点：直观、快速、操作简单缺点：所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和，且难以对运动性强的活菌进行计数克服方法：综合活菌染色、微室培养以及加细胞分裂抑制剂等只计数活菌体。30利用血球计数板计数时，如何计数？计算公式？答：以25个中方格的计数板为例，设5个中方格的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，则：1ml菌液中的总菌数=(A\5)*25*104×B31.影响微生物生长的主要因素有营养物质、水的活度、温度、_pH__和氧等。32.细菌、酵母菌、霉菌、真菌放线菌培养的最适宜PH一般为多少?答：细菌最适PH6.5～7.5、最适温度37℃左右；酵母菌最适PH6.0～6.5、发酵最适温度18～25℃左右；毛霉最适PH4.5～5.5、发酵最适温度16℃左右；（真菌最适PH5.0～6.0，放线菌最适PH7.5～8.5）。33.无菌操作和接种技术(1)接种概念：在_无菌条件下将微生物接入培养基____的操作过程。工具：玻璃刮铲、接种针和接种环。方法：穿刺接种、斜面划线接种和平板划线接种、涂抹平板等。（2）无菌操作——微生物接种技术的关键①培养微生物用的试管、培养皿和微生物培养基等，在接种之前都需要灭菌_。②通常接种操作要在____酒精灯火焰__的附近进行。【想一想】在微生物的培养过程中为什么要进行无菌操作？提示：无菌操作的目的是防止受到空气中的杂菌污染。34、微生物的分离（1）原理：根据微生物对_营养成分、氧气、pH等要求的不同，通过只提供目的微生物生长的必需条件，或加入某些抑制剂使非目的微生物不能生长，从而达到选择分离微生物的目的。(2)方法①据菌落形态特征初步分离②常用方法——平板分离法分类_____________混合平板法______________：是常用的平板分离法，有扇形划线、连续划线、交叉划线和方格划线等目的：在培养基上得到目的微生物的单个菌落【归纳】无菌技术的具体内容(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。(3)实验操作应在酒精灯火焰附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。(4)实验操作时应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触。（5）在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。35、平板分离法①原理：大多数细菌、许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落。平板分离法能将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面，每个孤立的活微生物体经过生长、繁殖均可形成便于移植的菌落。②常用培养基：最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基。③.方法：(1)涂抹平板法：分离材料进行10倍系列稀释，取一定稀释度样品倒入预先准备好的琼脂平板，用无菌玻璃刮铲将样品涂布均匀，细菌菌落常仅在平板表面生长。(2)混合平板法：分离材料进行10倍系列稀释，取一定稀释度样品与溶化的琼脂混合，将与样品混合的琼脂倒入无菌平皿，细菌菌落出现在平板表面及内部。(3)平板划线法：有扇形划线、连续划线、方格划线等。4.目的：通过采用各种平板分离法在培养基上得到目的微生物的单个菌落。(1)灭菌后的接种环须冷却后再挑取菌种，否则会杀死菌种。(2)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。(3)划线时用力大小要适当，防止用力过大使培养基划破。（细胞接种于裂口内，生长空间变小，影响生长。.菌体在狭缝中生长时，氧气可能不足，是其生长减缓。在划破的培养基下会因培养基的沟槽造成菌落形态改变。不能形成正常的特征形态，涂抹平板法平板划线法影响对菌落形态的观察及特征鉴别，同时菌落生长中，凹陷处积累代谢废物，抑制细菌生长。）36、菌落数目的统计方法(1)显微镜直接计数法①原理：此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。②方法：用计数板计数。计数板