岛津制备色谱仪标准操作规程-

14.1.1打开仪器各部分电源开关依次打开仪器的A泵（LC-20AP）、B泵（LC-20AP）（若需要使用C泵作为自动进样泵时，需同时打开C泵电源，否则不打开），检测器(SPD-20A)和控制器（CBM-20A）电源。4.1.2打开工作站软件开启电脑，进入windows界面，左键双击桌面上的LCsolution工作站图标（或者LabSolutions工作站图标），左键选择通道Instrument1（或者选择HPCNG1455D7-instrument1），当听到两次滴的一声并且界面左上角显示绿色的Ready状态，表示仪器软件可以正常工作。4.1.3检查流动相和废液情况流动相不得少于10L，废液不得超过3/4桶高。4.1.4仪器检查左键点击软件右上角的泵控制(instrumenton/off)图标，使该图标下陷，观察各泵是否正常运行，检查管线、接口是否有漏液现象；检查仪器压力是否正常，正常值应在3~10MPa之间，压力波动不得超过±0.5MPa。压力值不得超过10MPa，否则应予以停泵，检查管线、色谱柱是否有堵塞现象，在线过滤器是否需要清洗或更换；压力值不得低于0.5MPa，否则检查柱塞杆密封圈是否漏液，Purge阀是否有打开未关。4.2方法设置4.2.1梯度程序表设置点击工作站界面下半部分的Normal按钮图标，选择LCTimeProg.，出现时间程序表，其中Time列表示时间，Module是仪器模块，Action是对应的时间/模块需要执行的动作，Value是设置的具体数值。下面的截图表示40-65的梯度程序表：2该程序表示：0.01分钟时，泵的总流速达到80ml/min，其中B泵（有机相）的比例为40；0.40分钟时，检测器基线调零；25分钟时，B泵比例达到65%；35分钟时，B泵比例达到75%；45分钟时，B泵比例达到85%；60分钟时，系统停止运行。4.2.2其它参数设置点击SimpleSettings按钮，界面如下：SimpleSettings中与LCTimeProg界面中的相同项目需保持一致。其中LCStopTime表示工作站停止数据采集的时间，EndTime表示方法停止运行的时间，Mode选择二元梯度(Binarygradient)模式，TotalFlow表示总流速80mL/min，PumpBConc.表示起始梯度40%，C泵流速为0，Wavelength表示检测波长，一般通用为Ch1为220nm,Ch2为254nm。如化合物的紫外吸收较弱，应根据化合物的紫外情况设定检测波长Ch1。检测器在自动收集时，以Ch1下化合物出峰的峰高为是否满足收集条件的判定依据。4.3色谱柱平衡方法编辑完成后，对色谱柱进行平衡。点击右下角Download方法，用方法中的起始流动相浓度平衡色谱柱，在80ml/min的流速下平衡5min即可。4.4进样34.4.1单针进样（手动进样）首先左键点击菜单栏中单针进样图标（SingleRun），会出现一个对话框，界面如下：需要填写完整信息：SampleName、SampleID，方法路径（MethodFile）：D:\methods\wuhan-prepHPLCmethod(80mL).lcm，数据保存路径（DataFile）：D:\Data\Date\Name-SampleID-SampleWeight-Conditions-Number（D:\Data\201406\ZHP-EW156-220-P1-3g-Basic-ACN-4.lcd）。然后在手动进样器转至Download状态时，通过专用进样注射器将样品注射进去，迅速将手动进样器转至inject状态完成进样，鼠标左键点击确定（OK），触发分离方法运行。4.4.2Batch进样（C泵自动进样）首先打开Batch表格，出现以下界面：填写表格完整信息，如上图（Vial#：-1、SampleName：EW159-208、SampleID：EW159-208、MethodFile：D:\methods\Auto-wuhan-prepHPLCmethod(80mL).lcm、DataFile：D:\Data\Date\Name-SampleID-Sampleweight-Conditions），通过总体积和单针进样体积确4定进样针数，最后增加一个停机方法（D:\methods\OFF.lcm），确保Batch在运行完毕之后，仪器能够自动停机。4.5组分收集4.3.1手动收集在仪器运行过程中，需要手动收集峰时，点击按钮，会听到一声“嗒”响声，电磁阀切换到收集状态，收集fraction，此时应查看电磁阀是否正常收集样品。4.3.2自动收集在4.2.1和4.2.2方法设置完成后，在4.2.2所示界面点击FractionCollector按钮进行自动馏分收集方法编辑，界面如下：RackType表示收集管型号Rack3是16孔类型收集管架,对应的是250mL收集管Rack2是64孔类型收集管架（自动收集时，切记收集管型号和收集管架对应，夜晚自动进样时，应该将收集管架改为Rack2）。VialVolume表示单个收集管的最大收集容量（如上图设置为240mL），夜间排样时，应将该数值改为1000mL。Level:表示按照峰高收集，Value表示按照给定的命令动作执行。Unlock表示收集阀打开，收集开始，lock表示收集阀关闭，收集结束。自动收集方法由峰高（level值）和收集时间两部分共同决定。上图显示level值100000uv(表示峰高超过100mV或者0.1V时，电磁阀会切换至收集状态)。16.98分钟馏分收集电磁阀执行unlock指令，此时电磁阀会处于收集状态；20.60分钟馏分收集电磁阀执行Lock指令,此时电磁阀会切换至不收集状态。两个命令结合起来的意思是表示5当色谱峰峰高大于100mv且在16.98-20.60min时间范围内时，电磁阀会依次自动开启和关闭达到自动收集效果。备注：①方法设置完成点击右下角Download方法②确保第一针手动收集。4.6关机待仪器使用完毕后，关闭LCsolution工作站(或者LabSolution工作站)，再分别依次关闭仪器的的A泵（LC-20AP）、B泵（LC-20AP）、检测器(SPD-20A)和控制器（CBM-20A）电源，最后关闭电脑。