巨噬细胞中脂多糖诱导微小RNA-155表达与地塞米松的抑制

中国组织工程研究第20卷第11期2016–03–11出版ChineseJournalofTissueEngineeringResearchMarch11,2016Vol.20,No.11ISSN2095-4344CN21-1581/RCODEN:ZLKHAH1591·研究原著·王中华，男，1979年生，四川省泸州市人，汉族，2012年中山大学毕业，博士，主要从事脓毒症病理生理研究。通讯作者：覃铁和，主任医师，广东省人民医院(广东省医学科学院)，广东省老年医学研究所重症医学科，广东省广州市510080中图分类号:R318文献标识码:B文章编号:2095-4344(2016)11-01591-06稿件接受：2016-02-10表达与地塞米松的抑制王中华，王首红，吴岩，李宙，廖小龙，覃铁和(广东省人民医院(广东省医学科学院)，广东省老年医学研究所重症医学科，广东省广州市510080)引用本文：王中华，王首红，吴岩，李宙，廖小龙，覃铁和.巨噬细胞中脂多糖诱导微小RNA-155表达与地塞米松的抑制[J].中国组织工程研究，2016，20(11):1591-1596.DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.11.011ORCID:0000-0003-0950-3571(王中华)文章快速阅读：文题释义：微小RNA：是长约22nt的非编码RNA，广泛存在于从病毒到人类的各种生物中。这些小RNA能够与mRNA结合阻断蛋白编码基因的表达，防止它们翻译成为蛋白。科学家们发现，microRNA与结直肠癌等肠道疾病关系密切，而且能进入线粒体控制其基因表达。脂多糖：是革兰阴性细菌细胞壁中的一种成分，对宿主有毒性，当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，所以叫做内毒素。其毒性成分主要为类脂质A，内毒素位于细胞壁的最外层、覆盖于细胞壁的黏肽上。各种细菌的内毒素的毒性作用较弱，大致相同，可引起发热及微循环障碍和内毒素休克并播散性血管内凝血等，内毒素耐热而稳定，抗原性弱。摘要背景：目前地塞米松对巨噬细胞中微小RNA-155表达的调控作用尚不明确。目的：了解地塞米松是否调节巨噬细胞中微小RNA-155的表达。方法：①脂多糖刺激小鼠巨噬细胞：体外培养小鼠巨噬细胞株Raw264.7细胞，予脂多糖刺激。分别在培养0，0.5，2，6h收集细胞，检测miRNA-155的动态表达。②地塞米松对巨噬细胞的干预：实验分4组：对照组予磷酸盐缓冲液培养；脂多糖组予脂多糖刺激；地塞米松+脂多糖组予地塞米松和脂多糖共同作用；地塞米松组予地塞米松培养。6h后收集培养上清用ELISA法检测培养液中肿瘤坏死因子α、白细胞介素6等炎症因子表达，用实时荧光定量PCR法检测巨噬细胞中微小RNA-155的表达。结果与结论：①脂多糖刺激Raw264.7巨噬细胞6h后炎症因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6及微小RNA-155表达明显增加(P0.05)。②用地塞米松+脂多糖干预后炎症因子及微小RNA-155的表达轻度升高(P0.05)。③单独地塞米松处理组中炎症因子无明显变化(P0.05)，但微小RNA-155却明显减低(P0.05)。④结果说明地塞米松抑制脂多糖诱导的巨噬细胞中微小RNA-155的表达。关键词：组织构建；组织工程；微小RNA-155；巨噬细胞；地塞米松；脂多糖；炎症主题词：微小RNA；巨噬细胞；脂多糖地塞米松调节巨噬细胞中微小RNA-155的表达观察指标：①6h后收集培养上清用ELISA法检测培养液中肿瘤坏死因子α、白细胞介素6等炎症因子表达②用实时荧光定量PCR法检测巨噬细胞中微小RNA-155的表达地塞米松调节巨噬细胞中微小RNA-155的表达脂多糖刺激小鼠巨噬细胞株Raw264.7细胞培养0，0.5，2，6h检测miRNA-155表达地塞米松组予地塞米松培养观察指标：（1）6h后收集培养上清用ELISA法检测培养液中肿瘤坏死因子α、白细胞介素6等炎症因子表达；（2）用实时荧光定量PCR法检测巨噬细胞中微小RNA-155的表达地塞米松干预巨噬细胞实验脂多糖组予脂多糖刺激地塞米松+脂多糖组二者共同作用对照组予磷酸盐缓冲液培养地塞米松干预巨噬细胞实验培养0，0.5，2，6h，检测miRNA-155表达小鼠巨噬细胞株Raw264.7细胞脂多糖刺激王中华，等.巨噬细胞中脂多糖诱导微小RNA-155表达与地塞米松的抑制P.O.Box10002,Shenyang110180(GuangdongAcademyofMedicalScience),Guangzhou510080,GuangdongProvince,ChinaCorrespondingauthor:QinTie-he,Chiefphysician,GuangdongProvincialInstituteofGeriatrics,GuangdongGeneralHospital(GuangdongAcademyofMedicalScience),Guangzhou510080,GuangdongProvince,ChinaDexamethasoneinhibitstheexpressionofmicroRNA-155inmacrophagesinducedbylipopolysaccharideWangZhong-hua,WangShou-hong,WuYan,LiZhou,LiaoXiao-long,QinTie-he(GuangdongProvincialInstituteofGeriatrics,GuangdongGeneralHospital(GuangdongAcademyofMedicalScience),Guangzhou510080,GuangdongProvince,China)AbstractBACKGROUND:ItisunclearaboutdexamethasoneeffectontheregulationofmicroRNA-155expressioninmacrophages.OBJCTIVE:ToexplorewhetherdexamethasonecanregulatetheexpressionofmicroRNA-155inmacrophages.METHODS:(1)Lipopolysaccharidestimulationofmousemacrophages:mousemacrophagecelllines,Raw264.7cells,wereculturedinvitroandstimulatedbylipopolysaccharide.Culturedcellswerecollectedat0,0.5,2,6hoursafterculturetodetectthedynamicalexpressionofmicroRNA-155.(2)Dexamethasoneinterventionformacrophages:Macrophagesweredividedintofourgroups:controlgrouptreatedwithphosphatebuffer;lipopolysaccharidegroupstimulatedbylipopolysaccharide;combinedgroupgiveninterventionwithdexamethasoneandlipopolysaccharide;dexamethasonegroupculturedwithdexamethasone.At6hoursafterculture,cellsupernatantwascollectedtodetecttheexpressionoftumornecrosisfactorαandinterleukin-6usingELISAmethod.Real-timefluorescencequantitativePCRwasusedtodetecttheexpressionofmicroRNA-155intheRaw264.7macrophages.RESULTSANDCONCLUSION:Lipopolysaccharidesignificantlyincreasedtheexpressionoftumornecrosisfactorα,interleukin-6andmicroRNA-155after6hoursofculture(P0.05).Combineduseofdexamethasoneandlipopolysaccharideslightlyincreasedtheexpressionoftumornecrosisfactorα,interleukin-6andmicroRNA-155(P0.05).Dexamethasonealonehadnoinfluenceontheexpressionoftumornecrosisfactorαandinterleukin-6,butsignificantlydecreasedtheexpressionofmicroRNA-155(P0.05).ThesefindingsindicatethatdexamethasonecaninhibittheexpressionofmicroRNA-155inthemacrophagesinducedbylipopolysaccharide.Subjectheadings:MicroRNAs;Macrophages;LipopolysaccharidesCitethisarticle:WangZH,WangSH,WuY,LiZ,LiaoXL,QinTH.DexamethasoneinhibitstheexpressionofmicroRNA-155inmacrophagesinducedbylipopolysaccharide.ZhongguoZuzhiGongchengYanjiu.2016;20(11):1591-1596.0引言Introduction微小RNA(microRNA)是一组非编码RNA，其通过与靶基因3’端非编码区结合，从而调节靶基因的表达，在组织细胞的生长、分化、凋亡过程中发挥着重要作用，参与机体多种病理生理过程[1]。微小RNA的生物学活性来源于成熟的微小RNA，它是由初级微小RNA经过一系列剪切和修饰后转变而来。首先，微小RNA基因在RNA聚合酶Ⅱ作用下编码出初级微小RNA，再通过剪切修饰后形成前体微小RNA，后进入细胞浆在Dicer酶作用下转变为长20-24个核苷酸的成熟微小RNA，它再与相应的酶及因子一起形成RNA诱导沉默复合物(RISC)。最后，该复合物以碱基互补配对的方式识别靶基因mRNA3’端非编码区，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解或阻遏靶mRNA的翻译，从而实现转录后调控。目前已明确在哺乳动物体内有近千种微小RNA存在，且微小RNA在机体内的分布存在器官特异性，每种微小RNA在不同器官组织中的表达不尽相同，在同一组织器官中不同疾病状态下表达也不同。不同微小RNA作用于不同的靶基因发挥着不同的作用，同一微小RNA也可以作用于不同的靶基因发挥效应[2]。微小RNA通过对靶基因表达的影响参与肿瘤、心血管疾病、自身免疫性疾病及感染性疾病的调节，尤其在肿瘤的发生发展及侵袭中发挥重要作用。近年对微小RNA-155(miRNA-155)研究较多，其作为多功能微小RNA参与了免疫、炎症及肿瘤等方面的调节[3]。虽然对miRNA-155的研究更多集中在肿瘤方面，但也有不少研究提示miRNA-155