微生物肠杆菌科综合实验报告

河北联合大学临床微生物学和微生物学检验学ClinicalMicrobiology&MicrobiologicalDiagnosis肠道杆菌实验论文班级：检验一班实验日期：2013-09-24~30实验组：第二组指导老师：河北联合大学临床微生物学和微生物学检验学ClinicalMicrobiology&MicrobiologicalDiagnosis综合实验报告专业班级：医学检验时间：2013年9月24日～9月30日实验名称肠道杆菌指导教师熊亚南一、预习报告1.实验目的1.1掌握肠道条件致病菌与肠道致病菌的菌落特点。1.2掌握肠道杆菌的主要生化反应。1.3掌握肠道杆菌的分离鉴定方法。1.4掌握粪便标本细菌学检测流程2.实验基本原理肠道杆菌的细菌为革兰氏阴性菌，大多数有鞭毛，能运动。少数无鞭毛不能运动，不产生芽孢，需氧或兼性厌氧，在普通培养基上，一般都生长良好，均能发酵葡萄糖产酸或产气，触酶试验阳性，氧化酶试验阴性，还原硝酸盐。这类细菌是人类和动物肠道中的细菌，有的引起腹泻、肠炎、肠热症和痢疾等。有的为条件致病菌，有时也可引起身体各个部位的感染。3.实验流程图4.主要仪器设备高压灭菌锅试管锥形瓶接种环酒精灯无菌玻片显微镜、载玻片镊子二、实验报告1.材料与方法1.1材料2号菌液双糖铁培养基CB培养基SS培养基基础培养基青霉素庆大霉素氯霉素复方新诺明志贺氏诊断血清沙门氏诊断血清无菌生理盐水、结晶紫染液、卢戈碘液、95%乙醇溶液、稀释石碳酸复红染液、无水乙醇、松柏油1.2方法1.2.1标本分离将菌种用平板划线法，分别接种于CB和SB培养基中，37℃温室培养24小时，进行菌落分离。操做人：1.2.2鉴别实验1.2.2.1双糖铁实验用接种针以无菌操作技术挑取可疑菌落，立即垂直插入培养基中心至接近管底处，再循制作培养基CB，SS，基础培养基，双糖铁发酵培养管接种鉴别培养基接种双糖铁培养基革兰氏染色血清学反应药敏反应河北联合大学临床微生物学和微生物学检验学ClinicalMicrobiology&MicrobiologicalDiagnosis原路退出到斜面上；接种针自斜面最低处向上划一直线（要求通过试管培养基的中心点），然后再从斜面低处向上轻轻来回作蜿蜒划线；接种完毕，盖好试管塞。贴上标签纸。37℃培养18~24小时，取出观察结果并分析，观察结果。1.2.2.2Gramstain实验1.2.2.2.1涂片于洁净无油的载玻片上,加无菌生理盐水一滴,按无菌操作法用接种环取待检标本少许，研入无菌盐水中，使成一个均匀、极薄菌膜，直径在1cm左右。1.2.2.2.2干燥使涂片自然干燥1.2.2.2.3固定将玻片涂有菌膜的面向上迅速地往返通过火焰２－３次，以玻片触及皮肤，热而不烫为度。1.2.2.2.4初染在制作的涂片上滴加结晶紫染液，1min后水洗，并将片上积水轻轻洒净1.2.2.2.5媒染加卢戈碘液，1min后水洗，并将片上积水洒净1.2.2.2.6脱色加95%乙醇溶液数滴于涂片上，频频摇3-5s后，斜持玻片，使乙醇溶液流去，再加乙醇溶液。如此反复２－３次，直至流下的乙醇溶液无色或稍呈淡紫色时为止（约30s）。水洗，轻轻洒去片上积水。1.2.2.2.7复染以稀释石碳酸复红染液1min后，水洗，待干或用吸水纸印干，油镜检视。1.2.2.3血清学实验取一块无菌玻片，平均分成两区，分别滴上志贺和沙门氏诊断血清，用接种环取在双糖铁培养基斜面上培养的可疑菌种分别与玻片上的两种血清混匀，注意每换一种血清时应用火焰灭菌再取菌落，以防交叉感染。混匀后等待实验结果并观察操做人：1.2.4药敏实验1.2.4.1用灼烧过的接种环取可疑菌种，做来回划线，使之密密涂满于基础培养基表面。1.2.4.2将镊子经酒精灯灼烧后夹取含青霉素、庆大霉素、复方新诺明、氯霉素的纸片贴于含菌培养基表面并轻压，纸片应贴得均匀，纸片贴牢后避免移动。1.2.4.337℃孵育24h，观察各消毒剂周围有无抑菌圈，比较各抑菌圈大小。1.2.4.4从平板背面用直尺测包括纸片直径在内的抑菌圈直径，记录结果。操做人：2.结果2.1标本分离CB培养基平板未变色，SS培养基在同一个平板上部分由原来红色变为黄色，则SS平板仍为红色培养基上的单个菌落为可疑菌落。2.2鉴别实验2.2.1双糖铁试验结果所有培养基均是斜面为红色，底层培养基生成黑色沉淀，斜面培养基与底层培养基有部河北联合大学临床微生物学和微生物学检验学ClinicalMicrobiology&MicrobiologicalDiagnosis分分离。则该菌种能分解葡萄糖产酸产气，不分解乳糖，并且能产黑色沉淀。如图2-1所示：图1-1双糖铁培养基发酵试管2．2.2血清学实验结果通过实验，观察到在滴有沙门氏诊断血清中发生凝集反应，且志贺氏诊断血清没有变化。如图2-2所示：图1-2血清学试验结果2.2.3革兰氏染色结果在显微镜下观察到可疑菌被染成红色，则该菌为革兰氏阴性菌。2.3药敏实验药敏试验抗生素抑菌圈的大小抗生素抑菌圈大小（单位：mm）青霉素9河北联合大学临床微生物学和微生物学检验学ClinicalMicrobiology&MicrobiologicalDiagnosis氯霉素22庆大霉素25复方新诺明18图1-3药敏试验结果图3.结论3.1通过鉴定试验，确定该2号菌为沙门氏菌3.2通过药敏试验分析，该菌种对庆大霉素最为敏感4.自评反馈经过本次试验，我们通过团队密切合作，组员各自分工明确，在大家的共同努力下，实验成功的结束了。在本次实验中我们有做的好的地方：因为本次接种的是致病性的菌种，所以全部接种过程都在酒精灯附近进行试验操作，做好灭菌，操作非常谨慎。在倒平板时，快速，稳健的倾倒。实验结果观察非常细心，真实的记录实验现象，实验结果，应用科学严谨的态度，在测量时反复测量求平均值，避免人为的误差。也有差强人意的地方：在用平板划线法接种过程中，由于操作手法不熟练，琼脂板被破坏。在以后的实验中，本组队员将再接再厉，认真的对待每一个实验，细心，耐心的得出实验结果。参考文献://