大肠杆菌非中断杂交实验

遗传学实验报告大肠杆菌非中断杂交实验一、实验结果1、B〜G各培养基菌落数生长情况表一：B〜G各培养基菌落数生长情况板号阳性阴性不确定阳性菌落数目重组频率B28712290.29C3266.5333.50.335D24744260.26E18796210.21F4156.5543.50.435G27714290.29【注】（1）为减少实验误差，同一培养基上的菌落数由三个人各数一次，最后取平均值得出结果；（2）阳性菌落数及重组率计算公式：阳性菌落数=阳性+1/2不确定菌落数重组频率=每种选择培养基上的阳性菌落数/点种的总菌落数×100%（3）由上表一可得，将重组频率从大到小排列，板号顺序为FCGBDE。2、B〜G各培养基中阳性菌落数与基因重组率对应关系:表二：B〜G各培养基基因重组结果对照表培养基板号FCGBDE基因lacadegalargtrphis重组率0.4350.3350.290.290.260.21由表二可以得出arg，ade，trp，his，lac，gal从近到远的排列顺序为：lac-ade-gal-arg-trp–his；供体菌上基因从近到远的顺序为lac-ade-gal-trp-arg-his。经试验确认全部大肠杆菌染色体要将基因全部转入到受体菌内需要100min，但由于转移过程中各种条件的影响，接合过程往往不时发生中中断，完整染色体进入受体菌的机会很少；而lac基因距离原点最近，所以最先转入。随着时间的增长，DNA链变长则容易断裂，举例原点远的基因转入受体菌群的难度增加，所以距离原点最远的his基因基因导入的最少，重组频率最低。3、由表二数据作大肠杆菌连锁基因图如下图所示图1：实验得到的大肠杆菌连锁基因图图2：大肠杆菌的遗传图示实验所得大肠杆菌基因顺序：lac-ade-gal-arg-trp–his，由图谱所得的基因顺序为：lac-purE-gal-trp-his-arg。对比大肠杆菌的基因顺序，实验所得的gal与arg的重组频率都为0.29，重组频率相等；而arg基因与his基因顺序相反。而通过实验结果可以看出两者之间的阳性菌落数及基因重组率相差不大，一个阳性菌落数为26,另一个为21，而实验中人为因素造成的误差较大，也有可能在阳性菌落计数时出现误差，导致试验结果与理论值不符合。由图可见，前面的基因相对位置都较为符合，而后面的基因因为太远，这种计算方法不是那么适合，实验结果不是很理想。4、周三下午组、全年级以及历年非中断杂交实验结果：表三：周三下午组全班非中断杂交实验结果板号组号BCDEFG板号排序一23.5030.5020.259.8346.1325.00FCGBDE二32.5841.5722.1916.8560.3925.28FCBGDE三42.2436.0528.4916.2850.2029.85FBCGDE四29.0032.5026.0021.0043.5029.00FCGBDE五22.0037.0031.0021.8566.0030.00FCGDBE六26.2554.0035.5032.5087.5048.00FCGDEB平均值29.8635.5225.5917.1653.2427.83FCBGDE由表三可以得出，全班同学所做的结果F培养基所代表的的lac基因的重组率最高，是距离远点最近的基因；C培养基所代表的的ade基因大多也相同；但是各小组B培养基所代表的的arg基因的位置相差较大，而理论上B培养基所代表的的arg基因是距离远点最远的基因，我们班实验结果与理论值位置相差较大，分析原因可能是B培养基配制出现了问题。表四：2013级全年级非中断杂交实验结果板号班次BCDEFG板号排序周三上午183528284530FCGDEB周三下午303626175328FCBGDE周四上午104645195942FCDGEB周四下午17.0842.1338.2920.2567.6338.29FCDGEB\FCGDEB全年级结果18.6339.6434.2521.1156.4234.62FCGDEB由表四可得，本班同学与全年级实验所得的结果比较可以得出：F培养基所代表的的lac基因是距离远点最近的基因；C次之；前面的基因相对位置较为符合，而后面的基因因为太远，所以后面的顺序各班不尽相同。表五：2013级全年级非中断杂交实验结果学年板号排序学生年级2010-2011FGCDEB20082011-2012FCDGEB20092012-2013FCDGEB20102013-2014FCGDEB20112014-2015FGCDEB20122015-2016FCGDEB2013理论排序FCGDEB由表五历年实验结果可以得出，F培养基所代表的的lac基因最先转入到受体菌内，而C、D、G板所代表的基因在历年实验中所得到的基因顺序都不太相同。E所代表的his基因在B所代表的arg基因前转入到受体菌内，B所代表的arg基因最后转入到受体菌内。但扩大了样本量后，全年级的实验结果与理论值比较符合。二、实验讨论1、点菌要注意的是牙签不要插得太深，否则计数时会搞不清是牙签印还是菌落。但是又要保证碰到，不然可能没有点上。2、一根牙签要点六块板，点到后三块时菌浓度肯定更低了，所以每次点板顺序都不相同，而是按照BCDEFG、CDEFGB、DEFGBC、EFGBCD、FGBCDE、GBCDEF的顺序轮流点板，尽可能的减少由于点板造成的实验误差。3、统计的时候一定要四个人一起，在有疑问的时候才能更好地讨论。我们的经验是，反面不确定就看正面侧面，从多个角度观察，菌落会比较潮湿而且稍微比培养基高，还是可以和牙签印分开的；对于长了霉菌的也是用这个方法，霉菌菌落的形态和大肠杆菌是不同的，仔细从不同角度观察可以判断霉菌菌落旁有没有盖着大肠杆菌菌落。