安徽农业大学08基因工程试卷(A)

第1页共6页安徽农业大学2008―2009学年第一学期《基因工程原理》试卷（A卷）考试形式:闭卷，2小时，总分100分适用专业：06生物技术考试时间：2008.11.题号一二三四五总分得分一大题：填空题（共8小题，每空1分，共20分）1.年,Smith和Wilcox从流感嗜血杆菌中分离到第一个Ⅱ类限制性内切核酸酶，这个酶后来被命名为；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是。2.Ⅱ类限制性内切核酸酶仅有内切核酸酶活性，而没有活性，作用时需要作为辅助因子。3.原核生物主要有两种类型的DNA连接酶：连接酶和连接酶。正常情况下只有连接酶能够连接平末端的双链DNA。4.受体细胞的感受态是，诱导处理E.coli通常采用的化学试剂是。5.两个天然质粒pSC101和ColE1分别是和复制的质粒。其中第一个作为重组DNA载体的质粒是。6.pBR322质粒具有和两种抗性基因，而pUC系列的载体仅有抗性基因。7.在分离提取DNA的过程中，通常使用金属离子螯合剂EDTA，其目的是，而使用异戊醇得分评阅人学院：专业班级：姓名：学号：装订线第2页共6页的作用是。8.在Southern印迹中，DNA转移的速度主要取决于和。二大题：选择题（每小题1分，共15分）1.因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是（）。（a）P．Berg（b）W．Gilbert（c）A．Kormberg（d）B．McClintock2.关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（）不太恰当。（a）由作用于同一DNA序列的两种酶构成（b）这一系统中的核酸酶都是Ⅱ型限制性内切核酸酶（c）这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰（d）不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统3.限制性内切核酸酶可以特异性地识别和切割（）。（a）双链DNA的特异碱基对（b）双链DNA的特异碱基序列（c）特定的三联密码（d）以上都正确4.限制性内切核酸酶的星号活性是指（）。（a）在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性（b）活性大大提高（c）切割速度大大加快（d）识别序列与原来的完全不同5.下列限制性内切核酸酶中，选用（）时要考虑连接后外源DNA的插入方向。（a）EcoRⅠ（b）EcoRⅡ（c）BamHⅠ（d）PstⅠ6.下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性（）？（a）S1核酸酶（b）Bal31核酸酶（c）末端转移酶（d）碱性磷酸酶7.用碱法分离质粒DNA时，因为（）所以可以被除去。（a）染色体DNA断成了碎片（b）染色体DNA分子量大，而不能释放（c）染色体DNA变性后来不及复性得分评阅人第3页共6页（d）染色体末同蛋白质分开而沉淀8.DNA连接酶的主要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口，（）。（a）将双链DNA中的5′-P同3′-OH末端重新形成磷酸二脂键（b）作用时不消耗能量（c）需要Mn2+等二价辅助离子（d）也可以连接RNA分子9.关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确？（）（a）在不同的宿主中具有不同的复制机制（b）在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点（c）在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶（d）在不同的宿主细胞中具有不同的复制速度10.关于噬菌斑筛选法的原理，下面哪一种说法不正确？（）（a）噬菌斑颜色的变化（b）cI基因失活造成噬菌斑的变化（c）对IPTG的分解能力（d）对Xgal的分解与否11.在利用lacZ失活的显色反应筛选中，IPTG的作用是（）。（a）诱导宿主的α肽的合成（b）诱导宿主的ω肽的合成（c）作为酶的作用底物（d）作为显色反应的指示剂12.在切口移位标记DNA探针时只能使用（）。（a）Klenow酶（b）DNA聚合酶Ⅰ（c）T4DNA聚合酶（d）T7DNA聚合酶13.用下列方法进行重组体的筛选，只有（）说明外源基因进行了表达。（a）Southern印迹杂交（b）Northern印迹杂交（c）Western印迹杂交（d）原位菌落杂交14.用免疫化学法筛选重组体的原理是（）。（a）根据mRNA同DNA的杂交（b）根据DNA同DNA的杂交（c）根据载体基因的表达（d）根据外源基因的表达15.限制性内切核酸酶EcoRⅠ、BamHⅠ和HindⅢ在野生型的λ噬菌体DNA中有多个酶切位点，删除这些酶切位点的数量，主要通过（）。（a）体内突变（b）完全酶切后连接（c）部分酶切（d）先用甲基化酶修饰后再酶切第4页共6页三大题：判断题（每小题1分，共20分）1.DNA多态性就是限制性片段长度多态性。（）2.在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他的限制酶就不能切割了。（）3.E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶作用时都需要ATP和NAD+作为辅助因子。（）4.用产生不同黏性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源DNA片段，得到的黏性末端是不亲和的黏性末端。（）5.通过原位菌落杂交得到的阳性克隆即是重组体，但不能判断插入的外源基因是否表达。（）6.限制性内切核酸酶的切割频率理论值应该是1/4n。（）7.甘油是导致限制酶星活性的主要原因之一，防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5%以下。（）8.在反转录过程中，使用AMV比使用M-MLV可得到较多的产物。（）9.ColE1天然质粒载体具有四环素抗性标记，因而很容易选择。（）10.只有完整的复制子才能进行独立复制，一个失去了复制起点的复制子不能进行独立复制。（）11.松弛型质粒pUC载体系列的拷贝数很高，达到500~700，因此不必进行氯霉素扩增。（）12.基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。（）13.不匹配的黏性末端可以通过部分填补后进行连接。（）14.一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。（）15.外源基因（或DNA片段）插入到某一基因内的位点后，这个基因不再有任何功能。（）16.所谓引物就是同DNA互补的一小段RNA分子。（）17.突出或凹缺的3，末端都可以用Klenow酶进行末端标记。（）18.以mRNA为模板合成的DNA是互补DNA（cDNA）。（）19.多克隆位点（MCS）仅位于质粒载体中。（）得分评阅人第5页共6页20.如果两个不同的质粒可以稳定地共存于同一个细胞中，这两种质粒则属于同一个不亲和群。（）四大题：简答题（共5小题，每小题4分，共20分）1.何谓限制性内切核酸酶的切割频率？2.什么是Klenow酶?具有哪些活性？3.在DNA分离过程中造成DNA分子断裂的主要原因？4.碱裂解法提取质粒DNA时，其中溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ各自的作用什么？5.下面几种序列中你认为哪一个（哪些）最有可能是Ⅱ类酶的识别序列，为什么？AAGCTT，GAATTC，ACGGCA,CTGCAG，GAATCG。得分评阅人第6页共6页五大题：问答题（第1.2小题各8分，第3小题9分，共25分）1.什么是细菌的限制-修饰系统？它有什么意义？2.为什么野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体？3.什么是同尾酶？为什么说用同尾酶进行体外重组效率最高？得分评阅人