实验七稀释平板计数法及土壤中真菌的分离纯化

实验七稀释平板计数法及土壤中真菌的分离纯化一、实验目的掌握活菌计数的基本原理及方法掌握从样品中分离目的微生物的原理及方法二、实验原理---稀释平皿计数法将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分散的细胞均匀涂布在平皿培养基上，培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落都由原液中单个细胞发育而来，计算菌落数，通过公式可以求出单位原样品中的活菌数。每ml(g)样品中的活菌数=（每皿菌落数平均值/取样体积）×稀释倍数二、实验原理---土壤中真菌的分离纯化马丁孟加拉红---链霉素培养基马丁培养基孟加拉红链霉素三、实验器材（一）培养基1、牛肉膏蛋白胨培养基2、马丁孟加拉红---链霉素培养基（二）其他1、无菌培养皿2、无菌吸管3、无菌水（三）仪器1、超净工作台2、玻璃刮铲3、酒精棉球四、实验步骤---稀释平板计数法1、熔化培养基2、倒平皿3、梯度稀释法稀释原菌样品四、实验步骤4、涂平皿：选取1/106,1/107,1/108三个稀释度计数，每皿取菌液0.1ml，用玻璃刮铲涂布均匀，每个稀释度做一个重复。5、37℃倒置培养2天6、计数：每ml原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU＝（同一稀释度平板上菌落平均数×稀释倍数）/原菌样品体积（ml）菌落计数规则：（一）选择平均菌落数在30~300间的平板1、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告；2、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌落数除以低稀释度的菌落数的值）：1）若0.5≤比值≤2，以两稀释度的菌落数乘稀释倍数所得的值的均值报告。2）若2≤比值或比值≤0.5，则取其中较少的菌落总数进行报告。（二）所有菌落数均不在30~300间以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数1、若所有稀释度的菌落平均数均大于300，则按稀释倍数最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告；2、若所有稀释度的菌落平均数均小于30，则按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告；四、实验步骤---从土壤里分离真菌1、熔化培养基2、倒平皿3、捻碎土样，将土样溶解在90ml无菌水三角瓶中4、梯度稀释法稀释土样10g90ml10-110-210-310-410-54、涂平皿：每个稀释度均需要涂布平皿，每皿取菌液0.1ml，用玻璃刮铲涂布均匀。5、28℃倒置培养3~7天6、观察并描述真菌菌落特征五、实验结果及分析稀释平皿计数法：稀释倍数106107108菌落数每ml原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU＝（同一稀释度平板上菌落平均数×稀释倍数）/原菌样品体积（ml）描述酵母菌菌落特征：描述霉菌菌落特征