实验十动物组织DNA的提取

动物组织中总DNA的提取TotalDNAextractionfromeukaryotictissue实验目的了解真核生物基因组DNA提取的一般原理通过动物组织DNA的提取，掌握DNA提取的方法和步骤动物细胞基因组在提取过程中一般有以下几步，首先是机械法破细胞抽提；然后去除蛋白质，糖类等细胞内杂质污染；最后纯化出ＤＮＡ。DNA提取原则保证DNA结构的完整性纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质排除有机溶剂和金属离子的污染蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度排除其他核酸分子的污染实验原理细胞内各种DNA（包括基因组DNA和核外DNA）称为总DNA。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白（DNP），能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液中，而不溶于有机溶剂。目前从样品中分离DNA的方法主要有两种，分为CTAB法和SDS法（表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来）。SDS（十二烷基硫酸钠）是阴离子表面活性剂，溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再加入氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中，即DNA溶液。SDS法提取动物组织DNA试剂提取缓冲液：200mmol/LTris·Cl(pH8.0),25mmol/LEDTA,500mmol/LNaCl,0.5%SDS24：1的氯仿：异戊醇预冷无水乙醇SDS抽提液配方(1000ml):操作步骤1.肝脏1g左右,(剪碎)置研钵中，加入2-3mL提取缓冲液，研磨成浆；吸入10mLEP管中，摇动混匀；2.60℃水浴保温20min，不时颠倒混匀；3.室温下3000rpm离心10min；4.小心吸上清于另一只离心管中，加入等体积的24:1的氯仿：异戊醇，上下颠倒混匀；5.室温下3000rpm离心10min；6.小心将上层水相吸入另一只离心管中；7.重复4-5步2-3次;(此步不做）8.加入等体积预冷无水乙醇，室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。结果分析与讨论